Том 88, № 6 (2011)

Цель. Исследование сорбционных свойств различных сферических полисахаридных матриц, обозначенных как Сфероцелл, в отношении пробиотических бактерий Lactobacillus plantarum 8PA-3. Материалы и методы. Использован производственный штамм Lactobacillus plantarum 8PA-3. Исследован процесс иммобилизации лактобацилл на трех разновидностях сферических сорбентов. Первый сорбент - нейтральный, состоящий из неполярной целлюлозной матрицы с («0») зарядом, второй - DEAE, полученный путем модификации целлюлозы диэтиламиноэтиловыми группами, с положительным («+») зарядом, и третий - КМ (карбоксиметил), с отрицательным («-») зарядом. Целлюлозные матрицы обозначены нами термином Сфероцелл. Иммобилизацию бактериальных клеток на Сфероцелл осуществляли путем добавления суспензии, содержащей 1,0х109 КОЕ/мл. Эффект бактериальной иммобилизации оценивали раститровкой КОЕ/мл и при электронно-микроскопическом исследовании. Результаты. Показана зависимость адсорбционной иммобилизации клеток лактобацилл на гранулах сорбента в зависимости от заряда матрицы. При определенных равных условиях (размер гранул, характеристика поверхности, величина заряда) позитивно заряженная матрица сорбировала клетки в 3 - 10 раз больше, чем нейтральная, и в 20 - 25 раз

Цель. Разработать метод обработки бактерий Streptococcus pyogenes, не нарушающий целостность поверхностной структуры клеток, обеспечивающий оптимальную воспроизводимость результатов испытаний активности ферментных препаратов. Материалы и методы. В работе использовали музейные культуры S. pyogenes M29 и S. pyogenes T1, эталонный штамм S. pyogenes T5 (ATCC) и 3 препарата фаг-ассоциированного лизина (энзибиотика) PlyC: два выделены из фага С1, третий - рекомбинантный фермент, полученный клонированием ДНК фага С1. Применяли 3 способа обработки клеток S. pyogenes: инактивацию хлороформом, антибиотиками и прогреванием. Результаты. Установлено, что обработка клеток S. pyogenes рифампи-цином и гентамицином позволяет проводить одновременное турбидиметрическое определение активности ферментных препаратов и эффективности лизиса стрептококков с хорошим воспроизведением результатов испытаний. Сравнение кинетических кривых лизиса стрептококков, убитых нагреванием, с кривыми лизиса живых культур показало, что термическая обработка клеток приводит к уменьшению глубины лизиса и снижению активности фермента. Характер и эффективность лизиса клеток, проинкубированных с хлороформом, приближались к кривой лизиса живых стрептококков, однако метод не исключал лизиса части клеток и требовал наличия оборудования для работы с химическими веществами. Заключение. Разработан метод инактивации тест-культуры S. pyogenes путем двуступенчатой обработки культуры антибиотиками, не нарушающий целостность поверхностной структуры клеток, обеспечивающий оптимальную воспроизводимость результатов испытаний активности ферментных препаратов.

Цель. Характеристика лекарственной устойчивости (ЛУ) и структуры популяции Mycobacterium tuberculosis в Псковской области. Материалы и методы. У 90 штаммов M.tuberculosis изучена лекарственная устойчивость культуральным методом и с помощью тест-системы «ТБ-БИОЧИП»; принадлежность к генотипу определяли методом сполиготипирова-ния. Результаты. Лекарственной устойчивостью обладали 55 (61,1%) из 90 штаммов M. tuberculosis, при этом 40 (44,4%) были мультирезистентны. Популяция M. tuberculosis представлена штаммами спо-лиготипа SIT1 генетического семейства Beijing - 44,4%, LAM - 21,1%, Т - 14,4%, Haarlem - 11,1% и Ural - 5,6%, согласно SpolDB4. У штаммов M.tuberculosis, циркулирующих в Псковской области, наиболее распространен (44,4%) сполиготип SIT1 (р<0,0001). ЛУ и мультирезистентная ЛУ (МЛУ) у штаммов Beijing встречались чаще, чем у штаммов «не-Beijing» (р<0,001 и р=0,03, соответственно) и были обусловлены мутациями rpoB Ser531^Leu и katG Ser315^Thr. Все штаммы сполиготипа SIT252 были мультирезистентны, причем их устойчивость к рифампицину была обусловлена заменами rpoB Asp516^Ser, к изониазиду - katG Ser315^Thr и inhA_ T15. Заключение. Полученные данные свидетельствуют об эпидемическом неблагополучии по туберкулезу и широкой циркуляции МЛУ штаммов M.tuberculosis в Псковской области.

Представлена структура и модули компьютерной информационно-аналитической системы «Электронный Атлас России», в котором объектом картографирования выступает эпидемиология социально значимых инфекционных заболеваний. В атласе представлена системная информация о процессах возникновения и распространения социально значимых инфекционных заболеваний (антропонозы, зоонозы и сапронозы) среди населении РФ. Особый интерес представляют подробные электронные карты территории страны, насыщенные прогнозно-аналитической информацией, созданной с использованием достижений технологий математического и компьютерного моделирования эпидемий и вспышек вирусных и бактериальных инфекций. Атлас позволяет реально оценить картину распространения инфекций, составить прогнозы развития эпидемий и вспышек с учетом реализации мер противодействия (вакцинация, профилактика, диагностика и терапия) и оценить их экономическую эффективность.

Цель. Разработка методического подхода к оценке микробного распознавания «свой-чужой» в условиях кишечного микросимбиоценоза человека. Материалы и методы. Использовано 9 культур бифидобактерий (доминанты) и 18 штаммов условно патогенных микроорганизмов (ассоцианты), изолированных от пациентов при обследовании на дисбиоз кишечника и идентифицированных общепринятыми методами. Оценку микробного распознавания «свой-чужой» в микросимбиоценозе проводили по методике, разработанной авторами, основанной на определении ростовых свойств (РС), антилизоцимной активности (АЛА) и образования биопленок (БПО) ассоциантов, соинкубированных с экзометаболитами доминантов. РС, АЛА и БПО изучали фотометрическими методами (Бухарин О.В., 1999, 2009; O'Toole G. A., 2000). Результаты статистически обработаны с использованием критерия Фишера-Стьюдента. Результаты. Выявленный оппозитный (усиление/подавление) феномен пары «доминант-ассоциант» позволил реализовать распознавание «свой-чужой» в микросимбиоценозе. К «своим» видам относились ассоцианты (E.coli и Enterococcus faecium), у которых экзометаболиты бифидобактерий не изменяли ростовые свойства и стимулировали АЛА (на 17,5 - 32%) и БПО (на 25 - 39%). «Чужими» видами микросимбионтов являлись ассоцианты (Escherichia coli, Klebsiella рпеитошае, Staphylococcus aureus, Candida albicans), у которых экзометаболиты бифидофлоры снижали РС на 20,7 - 68%, АЛА на 22,7 - 54% и БПО на 22,5 - 39%. Заключение. Индигенная микрофлора при формировании микросимбиоценоза способна участвовать в распознавании «свой - чужой», основу которого определяют экзометаболиты микросимбионтов. Полученные данные открывают перспективу понимания механизмов межмикробных взаимодействий микросимбионтов и могут быть использованы как для диагностических целей, так и для оптимального отбора «кандидатов» при создании новых пробиотиков и синбиотиков.

Цель. Изучение уровня противодифтерийного и противостолбнячного иммунитета у рожениц в раннем послеродовом периоде в зависимости от их возраста. Материалы и методы. Для оценки состояния противодифтерийного и противостолбнячного иммунитета обследованы родильницы в раннем послеродовом периоде (139 чел.) с неизвестным вакцинальным анамнезом в возрасте от 17 до 44 лет, находившиеся под наблюдением в родильном доме №2 г. Ростов-на-Дону. Результаты. Все женщины имели высокий уровень защищенности от этих инфекций. Уровень напряженности противостолбнячного иммунитета у обследованных был выше, чем противодифтерийного. Заключение. Мониторинг противодифтерийного и противостолбнячного иммунитета у женщин детородного возраста является необходимым для решения вопроса о назначении им вакцинации. Высокий уровень напряженности материнского иммунитета позволит сформировать достаточную защиту от инфекционных агентов у новорожденных.

Цель. Оценить влияние электромагнитного излучения (ЭМИ) на частотах молекулярного спектра поглощения и излучения атмосферного кислорода и оксида азота (МСПИ О2 и МСПИ NO, соответственно) на адгезию, развитие популяции и образование биопленок Pseudomonas aeruginosa. Материалы и методы. Адгезивную активность оценивали по среднему показателю адгезии (СПА) бактерий на эритроцитах человека. О динамике роста популяции судили по показателям оптической плотности бульонных культур; формировании биопленок - по значению оптической плотности клеток, прикрепившихся на поверхности полистероловых лунок. Результаты. Бактерии P. аeruginosa обладали сильными адгезивными свойствами, которые увеличивались при воздействии на них излучения на частоте МСПИ O2 и не изменялась при воздействии на частоте МСПИ NO. Облучение бактерий на частоте МСПИ NO на развитие популяции не влияло; облучение на частоте МСПИ O2 стимулировало способность бактерий к пленкообразованию, а на частоте МСПИ NO - снижало эту способность. Заключение. ЭМИ на частоте МСПИ NO может быть использовано для подавления образования бактериальных биопленок, формируемых псевдомонадами.

Цель. Поиск новых мишеней и усовершенствование способов молекулярно-генетической детекции в мокроте видоспецифических фрагментов ДНК возбудителей внебольничной пневмонии (ВП). Материалы и методы. Подобраны видоспецифичные олигонуклеотидные праймеры к Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Branhamella catarrhalis. Бактериологическим методом и при использовании ПЦР протестировано 103 образца мокроты больных ВП и 15 практически здоровых людей. Результаты. Бактериологическим методом при ВП в 26 случаях (25,2%) выявлена смешанная бактериальная флора. У 14 больных (13,6%) в мокроте обнаружена ДНК B. catarrhalis, у 12 пациентов (11,6%) - S. pneumoniaе, H. influenzae была выявлена у 11 обследуемых (10,7%), K.pneumoniae в 8 случаях (7,9%). В 32 случаях (30%) бактериологически этиологию ВП расшифровать не удалось. При использовании ПЦР с разработанными праймерами B. catarrhalis выявлены у 19 (18,5%) больных ВП; S. pneumoniaе - у 17 (16,5%); H. influenzaе и K.pneumoniae - в 14,5 и 12,6% (15 и 13 пациентов) случаев. В 16,5% случаев (17 больных) методом ПЦР были получены положительные результаты одновременно к нескольким видам бактерий, в 3,9% случаев (4 больных) обнаружены P. aeruginosa. Заключение. Применение ПЦР для обнаружения ДНК возбудителей внебольничной пневмонии значительно повышает информативность исследования в сравнении с бактериологическим методом.

Цель. Исследование продукции внеклеточных мембранных нановезикул бактериями Aeromonas hydrophila и Aeromonas salmonicida на субклеточном уровне. Материалы и методы. Использованы 4 штамма A.hydrophila: 342-1, Е 8-8, Н 336 и Н 1-6-05 и 1 штамм A.salmonicida А-450, а также интактные крысы линии Вистар. Применяли методы электронной микроскопии: ультратонкие срезы и негативное контрастирование. Результаты. Показано, что бактерии A.hydrophila и A. salmonicida, выращиваемые в чистых культурах, выделяют в окружающую среду внеклеточные мембранные нановезикулы. Размеры таких везикул варьируют от 20 до 200 нм в диаметре. Показан процесс отпочковывания от бактериальной клетки и возможность получения препаратов изолированных мембранных нановезикул. Подобные везикулы выявлены на ультратонких срезах апикальной поверхности кишечника интактных крыс среди скоплений пристеночных микроорганизмов, колонизирующих слизистую оболочку. Внеклеточные мембранные нановезикулы, выделяемые аэромонадами, по размерам и ультраструктуре аналогичны везикулам других видов грамотрицательных бактерий, описанных в литературе. Заключение. При выращивании бактерий A.hydrophila и A.salmonicida in vitro из внешних мембран клеток образуются нановезикулы, выделяемые во внешнюю среду и подобные таковым, обнаруживаемым на ультратонких срезах поверхности кишечника крыс среди скоплений пристеночных микроорганизмов и в гликокаликсе, между микроворсинками эпителиоцитов.

Цель. Изучение спектра маломанифестных инфекций (ММИ) с поражением центральной нервной системы (ЦНС) и их роли у больных в длительных бессознательных состояниях (ДБС) невоспалительной этиологии. Материалы и методы. Обследованы 32 пациента (23 мужчины, 9 женщин; возраст 14 - 58 лет) в ДБС различной невоспалительной этиологии. Основная группа (18 пациентов) получала лечение от всех инфекционных заболеваний, включая ММИ; контрольная группа (14 пациентов) - только от банальной и нозокомиальной микрофлоры. Пациентам проводили в динамике иммунологическое, инфектологическое и неврологическое обследования. Полученные данные обрабатывали c использованием STATISTICA for Windows (версия 5.5). Результаты. Достоверных отличий иммунного и инфектологического статуса в зависимости от характера первичного поражения ЦНС не выявлено. У всех пациентов обнаружено иммунодефицитное состояние; у 94% пациентов были повышены неспецифические IgM и ^Е. Среди возбудителей ММИ преобладали Chlamydia spp. Культуральным и/или ПЦР методом этот микроорганизм выявляли при первичном исследовании у 56% пациентов в образцах спинномозговой жидкости и у 56% в образцах крови; при повторной диагностике или при аутопсии - только у 13 и 25%, соответственно. Выявление Bacteroides fragilis, HHV-6, VEB и CMV в спинномозговой жидкости, крови, на слизистых оболочках носоглотки и коньюнктивы чаще сочеталось с наличием Chlamydia spp. в ЦНС (p<0,05), чем других возбудителей ММИ. Санация ЦНС от ММИ достоверно сопровождалась лучшим восстановлением коммуникативной активности по сравнению с контрольной группой. Заключение. У больных в ДБС следует учитывать высокую частоту инфицирования ЦНС различными возбудителями ММИ, и в первую очередь Chlamydia spp. Санация от ММИ может стать «окном» для эффективного нейровосстановительного лечения.

Цель. Выявление особенностей качественного и количественного состава микробиоценоза толстой кишки людей с разной степенью местных метаболических нарушений при дисбактериозах, обусловленных разными причинами. Материалы и методы. Изучена микрофлора толстой кишки и содержание малонового диальдегида (МДА) в копро-фильтратах 330 взрослых людей с дисбактериозами толстой кишки, обусловленными разными причинами. Результаты. Установлено, что высокое содержание МДА в копрофильтратах сочетается с повышением количества в составе микрофлоры толстой кишки условно патогенных микроорганизмов и атипичных эшерихий. Зависимости содержания МДА в копрофильтратах от причин, обусловливающих развитие дисбактериоза, не выявлено. Заключение. Проведенные исследования свидетельствуют, что изменение местной метаболической активности может быть единым механизмом развития дисбактериозов толстой кишки, обусловленных действием разных факторов.

Обзор посвящен роли сенсорных нервных окончаний кишечника, вегетативной и центральной нервной системы (ЦНС) при заболеваниях желудочно-кишечного тракта. Молекулярно-клеточные взаимоотношения между нервными окончаниями кишечника и нейронами ЦНС служат ключевой осью, которые, наряду с нейроэндокринным и иммунным ответами, определяют клиническое проявление и реабилитационный потенциал пациента при развитии инфекционного процесса в кишечнике. Инфекционно-воспалительные процессы кишечника различной этиологии способствуют увеличению проницаемости кишечного барьера с последующей трансинтестинальной транслокацией токсинов и молекулярных медиаторов воспаления в системный кровоток. Бактериальные токсины, включая ЛПС, и дисбаланс цитокинов индуцируют поражение микроглии, определяя дестабилизацию барьера и уязвимость нейронов. Следствием является неадекватная реакция со стороны вегетативной нервной системы с развитием неконтролируемых абдоминальных спазмов и нарастающей мышечной атрофии. В то же время, токсемия способствует увеличению проницаемости гематоэнцефалического барьера, поступлению в мозг воспалительных цитокинов, индуцируя воспаление в его околожелудочковых зонах с развитием кишечной энцефалопатии. Предполагаемый патогенетический механизм диктует новую стратегию лечения, направленную, главным образом, на защиту мозга: назначение этиотропной и противовоспалительной терапии, миотропных спазмолитиков и различных нейропротекторов.

Chlamydia trachomatis - один из самых распространенных в мире бактериальных патогенов, передающийся половым путем. В связи с этим, разработка вакцинного препарата для лечения и профилактики инфекций, вызываемых C.trachomatis, - актуальное направление научных исследований во всем мире. Такие вакцины могут использоваться как для профилактики, так и для лечения уже установившейся хламидийной инфекции и, соответственно, снижать риск развития хронических состояний и препятствовать распространению патогена в популяции. Особенности биологии хламидий, связанные с облигатным внутриклеточным паразитированием, и индуцируемые возбудителем иммунопатологические состояния серьезно осложняют разработки в этой области. В настоящее время вакцинного препарата, перешедшего на стадию клинических испытаний, не существует.