DEPENDENCE OF IgG TITERS SPECIFIC TO VARIOUS HEPATITIS C VIRUS PROTEINS ON FEATURES OF CHRONIC INFECTION COURSE

Full Text

Гепатит С по-прежнему представляет актуальную медико-социальную проблему, что связано с его широким распространением, высокой долей хронизации, частотой последующего цирроза, а также значительным экономическим ущербом [1 -3, 8]. В настоящее время диагностика этого заболевания базируется на выявлении его серологических маркеров [3, 4], что также позволяет судить об активности и стадии инфекционного процесса, прогнозировать его исход и оценить эффективность противовирусного лечения. Для выявления гепатита С наиболее широко применяют определение анти-HCV с использованием диагностических систем 3 поколения, построенных из рекомбинантных и/или синтетических фрагментов структурных и неструктурных HCV-белков - core, NS3, NS4, NS5 [5, 7]. Однако используемые методики являются лишь качественными и полуколичественными; диагностика гепатита С с помощью количественного варианта ИФА все еще разработана недостаточно [1]. Количественные варианты методов ПЦР и иммуноблоттинга недоступны для широкого использования в практическом здравоохранении ввиду технической сложности и высокой стоимости [2, 3, 7]. Именно поэтому поиск относительно простых и недорогих методик количественного определения антител к HCV во взаимосвязи с клиническими особенностями вызываемой им инфекции является актуальным, так как их внедрение позволит прогнозировать течение и исходы патологического процесса. Кроме того, это существенно экономичней им-муноблоттинга и ПЦР-диагностики. Цель настоящего исследования - анализ уровня IgG, специфичных к различным белкам вируса гепатита С, вза-висимости от особенностей течения хронической HCV-инфекции. В ходе работы по нозологическому признаку было отобрано 2 группы по 30 пациентов с хронической HCV-инфек- цией, находившихся на стационарном лечении в ОГУЗ «Кировская инфекционная клиническая больница» в 2005 - 2006 гг. В первую группу вошли 30 человек (мужчин - 22, женщин - 8) с хроническим гепатитом С (слабовыраженная активность процесса), во вторую - 30 пациентов (мужчин - 27, женщин - 3) с хроническим HCV-носительством. Средний возраст пациентов первой группы составил 33,2± 1,3 года, второй - 34,5±1,2 года. Диагноз «хронический гепатит С» ставили на основании комплексного клинико-лабораторного обследования, которое включало сбор эпиданамнеза (употребление внутривенных наркотиков, гемотрансфузии и другие медицинские манипуляции, беспорядочные половые связи); выявление с помощью ИФА серологических маркеров гепатита С (анти-HCV, РНК HCV); обнаружение повышения активности трансаминаз в течение 6 мес и более [3, 8]. С помощью ПЦР определяли маркеры репликации (RNA HCV). Слабовыраженную активность инфекционного процесса регистрировали на основании отсутствия или скудности жалоб и клинических проявлений, повышения активности трансаминаз в 1,5 - 2 раза выше нормы. Критериями отбора больных с HCV-носительством были: соответствующий эпиданамнез, наличие серологических (анти-HCV, RNA HCV) маркеров в течение 6 и более месяцев, отсутствие других лабораторных и клинических проявлений. Диагноз хронической HCV-инфекции во всех случаях подтвержден иммунологически методом ИФА. Маркеры репликации (RNA HCV) определяли с помощью метода ПЦР [3]. Клиниколабораторные методы обследования, в том числе ИФА, выполняли согласно общепринятым рекомендациям [4, 6]. Предлагаемая нами методика количественной оценки титров IgG к различным белкам HCV разработана на базе стандартной 96-луночной тест-системы 3 поколения для твердофазного ИФА «Анти-НСУ-спектр» (НПО «Диагностические системы», Н. Новгород) для определения спектра IgG, специфичных к HCV [5]. Методика позволяет более точно определять количество антител к антигенам HCV Титр антител к структурным (core) и неструктурным (NS3, NS4, NS5) белкам вируса определяли методом серийных разведений от 1:2 до 1:8192. Работу тест-системы верифицировали с помощью внутрилабораторного (отраслевые стандартизированные образцы, контрольные панели сывороток) и внешнего контроля качества [4]. Для отмывок планшетов при постановке ИФА использовали автоматическое промывочное устройство (вошер) «Stat Fax-2000» (США). Результаты ИФА считывали при помощи автоматического микрофотометра (ридера) «Microline-220» (Франция). Полученные в ходе проведенного исследования результаты были статистически обработаны согласно рекомендациям, общепринятым в медико-биологических и иммунологических исследованиях [7]. Среди больных ХГС доля лиц 18 - 25 лет составила 30%, 26 - 45 лет - 56% и старше 45 лет - 14%. В группе носителей HCV эти величины равнялись 38%, 45% и 16%, соответственно. Среди больных ХГС 30% не смогли назвать источник заражения. Из опрошенных 40% заявили о единичном употреблении в прошлом внутривенных наркотиков. На случайные половые связи указали почти 13% обследованных. На медицинские манипуляции (полостные операции, донорство, лечение зубов, гемотрансфузии, кесарево сечение) в качестве источника заражения указали 17% пациентов. Среди лиц с HCV-носительством существенные различия в распределении по источникам заражения отсутствовали (неизвестный источник - 32%, употребление внутривенных наркотиков - 38%, медицинские манипуляции - 19%, беспорядочная половая жизнь - 11%). В целом эти данные согласуются с имеющимися в литературе [2, 5, 8]. При изучении клинико-лабораторных особенностей пациентов с ХГС были получены следующие данные. Длительность заболевания ХГС составила, в среднем, 5,3± 1,4 года. Среди них преобладало бессимптомное или малосим-птомное течение заболевания. Чаще всего пациенты предъявляли жалобы на некоторую слабость (62%) и снижение аппетита (66%). Изжогу отмечали в 18% случаев, тошноту - в 6%, горечь во рту - в 15%. На дискомфорт в правом подреберье, спровоцированный погрешностями в диете или физической нагрузкой, указали 27% больных. Никаких жалоб не предъявляли 24% больных. Незначительная (до 2 см) гепатомегалия выявлена в 45% случаев, на 2 - 4 см - в 6%; у 11% больных развилась спленомегалия. У 9% пациентов были обнаружены вторичные печеночные признаки (капиллярит на щеках, телеангиэктазии). Активность АЛТ в среднем составила 83,4±8,2 ЕД/л, АСТ - 52,7±6,4 ЕД/л; показатели общего билирубина в среднем достигали 6,4±3,7 мкмоль/л, прямой фракции выявлено не было. Средняя величина тимоловой пробы - 5,8±2,2 ЕД. Концентрация общего белка достигала 94,2±6,4 г/л (в том числе альбуминов - 36,3±2,5 г/л). Протромбиновый индекс насчитывал 84,8+4,6%. Щелочная фосфатаза составляла 119,2+9,7 ЕД/л, у-глутамил транспептидаза - 40,3+4,2 ЕД/л. Маркеры репликации HCV выявлены у 76% пациентов. В группе носителей HCV длительность заболевания составила 4,6+2,8 года. Никаких других клинико-лабораторных данных, кроме выявления анти-HCV IgG, обнаружено не было. Приведенные выше данные соответствуют описанным в литературе [2, 3, 8]. При изучении величин титров специфических IgG к различным белкам HCV у больных с ХГС и вирусоносителей были получены следующие данные. Титры антител к белку core у всех лиц с ХГС находились в диапазоне 1:128 - 1:1024; тогда как у HCV-носителей они распределились в интервале 1:8 - 1:64. Анти-HCV NS3 у больных ХГС в большинстве случаев (73,4%) выявляли в титрах 1:64 - 1:256; у 84,2% вирусоносителей этот показатель варьировал в пределах 1:512 - 1:1024. Титр анти-HCV NS4 у большинства обследованных (74,4%) с ХГС находился в диапазоне 1:32 - 1:128, в то же время, для группы HCV-носителей в 87,6% случаев этот диапазон составил 1:8 - 1:16. Среди больных ХГС титры анти-HCV NS5 колебались от 1:128 до 1:256 в 92,5%; у 93,2% вирусоносителей эти антитела были выявлены в титрах 1:32 - 1:128. Для объективности анализа полученных результатов обратные значения титров антител были прологарифмированы по основанию 2 (например, log2x для 8 равен 3 и т.п.) с последующим вычислением средней геометрической log2x анти-HCV IgG для всех изучаемых групп. Указанные расчеты были выполнены согласно методикам, практикуемым в подобных исследованиях [6]. Установлено, что титры анти-core в группе лиц с хронической инфекцией были достоверно выше, чем среди носителей: 8,30±0,16 и 4,00±0,17(p<0,001), соответственно. Средняя геометрическая титра анти-№3 у лиц в первой группе была достоверно ниже, чем во второй: 7,80±0,16 и 9,07±0,15 (p<0,001), соответственно. Значения этого показателя для анти-№4 у больных с хроническим гепатитом С были достоверно выше, чем у HCV-носителей: 5,23±0,18 и 3,47±0,13 (p<0,001), соответственно. В то же время, средняя геометрическая титра анти-NS5 среди пациентов в первой группе была существенно выше, чем во второй: 7,47±0,12 и 6,40±0,14 (p<0,001), соответственно. Из полученных результатов видно, что в данном исследовании среди больных ХГС и вирусоносителей преобладали мужчины 18 - 25 и 26 - 45 лет. Из путей заражения чаще отмечали употребление внутривенных наркотиков, реже - медицинские манипуляции и беспорядочные половые связи. У значительной части пациентов заболевание протекает без-симптомно или малосимптомно, что затрудняет диагностику и своевременное проведение адекватного лечения. У больных ХГС и вирусоносителей выявлены значительные различия по уровню накопления всех изученных групп антител. Низкие титры анти-core IgG и анти-№4, высокие титры анти-№3, а также средние значения анти-NS5 могут свидетельствовать о формировании HCV-носительства. В то же время, средние и высокие титры анти-core, средние титры анти-№3 и анти-№4, а также более высокие титры анти-№5 могут указывать на наличие хронического гепатита С. Определение величины титров IgG к структурным и неструктурным белкам HCV можно использовать для скрининга формы хронической HCV-инфекции. Экономичность и доступность описанной методики количественного ИФА позволяет широко использовать ее в клинической практике. Таким образом, нами установлена зависимость между уровнем IgG, специфичных к различным белкам HCV, и той или иной формой хронической HCV-инфекции. Полученные данные свидетельствуют о возможности применения предлагаемой методики количественного ИФА для прогнозирования течения хронической HCV-инфекции, как это было показано ранее при использовании качественных и полуколичественных методов [5, 7].

About the authors

D. M Poponin

Kirov State Medical Academy, Kirov Infectious Diseases Hospital, Perm State Medical Academy

Russia

E. S Gorovits

Kirov State Medical Academy, Kirov Infectious Diseases Hospital, Perm State Medical Academy

Russia

A. L Bondarenko

Kirov State Medical Academy, Kirov Infectious Diseases Hospital, Perm State Medical Academy

Russia

References

Supplementary files