Том 88, № 5 (2011)

Цель . Сравнительный анализ содержания ДНК отдельных клеток штаммов Vibrio cholerae с различными биологическими свойствами. Материалы и методы . Изучали суточные агаровые культуры 2 авирулентных, не имеющих гена холерного токсина, и 2 вирулентных штаммов, а также их субкультуры, полученные путем подращивания на 1% пептонной воде в течение 1, 3 и 5 ч. ДНК убитых бактерий окрашивали смесью бромида этидия и митрамицина. Методом проточной цитофлуориметрии определяли долевое соотношение клеток с низким, промежуточным и высоким относительным содержанием ДНК в условных единицах интенсивности специфической ДНК-флуоресценции. Степень неоднородности клеток исследуемых микробных популяций оценивали по значению коэффициента вариации ДНК гистограмм. Результаты . На уровне больших статистических выборок отдельных клеток V.cholerae зарегистрирован принципиально различный характер реакции исследуемых токсигенных и нетоксигенных штаммов на изменение условий культивирования. Заключение . Популяции клеток токсигенных штаммов V.cholerae, в отличие от нетоксигенных, вероятно, переходят при голодании в «полиплоидное» состояние. Этот феномен может оказаться дифференциальным признаком при определении принадлежности штамма к группе риска (опасности).

Цель. Генотипическая характеристика и определение серологической принадлежности штаммов Vibrio cholerae неО1/неО139, вызвавших заболевания людей на территории Ростовской области с 2000 по 2009 гг. Материалы и методы. Объектами исследования служили 15 клинических штаммов V.cholerae неO1/неO139. Серотипирование проводили с использованием набора моноспецифических типирующих сывороток против холерных вибрионов О2-О84 серогрупп, полученных на базе Ростовского НИПЧИ, ПЦР- и VNTR-генотипирование - c помощью описанных в литературе и сконструированных нами специфических праймеров. Результаты. Показано, что штаммы-возбудители крайне разнообразны по серологическим признакам и содержат разные сочетания генов факторов патогенности, которые являются, по-видимому, взаимозаменяемыми. Сходная картина гетерогенности штаммов наблюдалась и при VNTR-генотипировании. Распределение исследованных штаммов по VNTR-генотипам не коррелировало ни с данными ПЦР-генотипирования и серотипирования, ни с местом и временем выделения. Заключение. Полученные данные указывают на отсутствие общих источников заражения людей даже в одной и той же местности в один и тот же период времени. С другой стороны, серологические и генотипические свойства V. chole- rae неO1/неO139 могут претерпевать изменения в процессе пребывания в макроорганизме либо во внешней среде за счет высокой пластичности их геномов.

Цель . Изучение возможности существования сочетанных природных очагов спирохетозов (иксодовых клещевых боррелиозов и лептоспирозов) в типичных таежных лесах, а также их этиологической и резервуарно-хозяинной структуры. Материалы и методы. Мелкие млекопитающие 19 видов были отловлены в 1992-2010 гг. на стационаре в низкогорных южнотаежных лесах Чусовского района Пермского края. Боррелии выделяли путем посева биоптатов мочевого пузыря или ушных биоптатов в среду BSK II, а лептоспиры - путем посевов взвеси почечной ткани в среду Фервоорт-Вольфа. Всего посевом на зараженность боррелиями было исследовано 1350, а на лептоспирами - 1077 животных. Из них 287 мелких млекопитающих 6 видов одновременно исследованы на зараженность боррелиями и лептоспирами. Изоляты боррелий идентифицировали методами ПЦР и полиморфизма длины фрагментов рестрикции, а лептоспир - с помощью стандартного набора диагностических агглютинирующих сывороток. Для выявления антител к лептоспирам в реакции микроагглютинации исследована кровь 2893 грызунов 12 видов и насекомоядных 7 видов. Результаты. Выявлена зараженность Borrelia garinii и Borrelia afzelii или лептоспирами серогруппы Grippotyphosa 6 наиболее многочисленных видов лесных мелких млекопитающих. Одновременно инфицированными и боррелиями, и лептоспирами оказались 3 полевки-экономки и 1 рыжая полевка. От двух полевок-экономок одновременно изолированы B. garinii и лептоспиры серогруппы Grippotyphosa, а от одной - B.garinii и Leptospira interrogans серогруппы Javanica. Рыжая полевка оказалась зараженной B. afzelii и лептоспирами серогруппы Javanica. Микст-зараженные зверьки составляли 1,4% всех параллельно исследованных животных фоновых видов. Заключение . Полученные данные свидетельствуют о существовании в южнотаежных лесах Предуралья природных очагов лептоспирозов. Они подтверждают представления, согласно которым в европейских лесных экосистемах распространены преимущественно очаги с возбудителем L.interrogans серогруппы Grippotyphosa, а основной носитель этих лептоспир - рыжая полевка. Выявлены сочетанные природные очаги спирохетозов двух групп: иксодовых клещевых боррелиозов и лептоспирозов.

Цель . Серологическое обследование на лептоспироз домашних и некоторых видов диких животных на территории Монголии. Материалы и методы. Сбор материала от домашних и диких животных проводили в 2009- 2010 гг. на территории 7 аймаков (областей) Восточной, Центральной и Южной Монголии. Проведено серологическое исследование в реакции микроагглютинаци (РМА) лептоспир с 13 референтными штаммами проб крови, высушенных на фильтровальной бумаге, от 51 головы крупного и мелкого рогатого скота, верблюдов, а также 545 особей грызунов 4 видов. Результаты . Полученные данные свидетельствуют о наличии в некоторых регионах Монголии антропургических очагов лептоспирозной инфекции, в том числе в аридных зонах, где экологические условия развитию эпизоотического процесса не благоприятствуют. Результаты исследований указывают на эпизоотическую значимость лептоспир серо- группы Tarassovi среди крупного рогатого скота и серогруппы Sejroe (предположительно серовара hardjo) среди коз, овец и верблюдов. Данные серологического исследования пустынных и степных представителей дикой фауны Монголии указывают на возможность циркуляции лептоспир в природных очагах. Заключение. Обнаружение в значительном проценте случаев в сыворотках крови тарбаганов и длиннохвостых сусликов агглютининов к лептоспирам Pomona (mozdok) при отрицательных результатах РМА со штаммом Pomonа (рomona) свидетельствует о наличии возбудителя ранее неизвестного серовара. Тем не менее, окончательные выводы можно сделать только после выделения культур возбудителя и их идентификации.

Цель. Сравнительное изучение иммуногенности экспериментальных вакцин, полученных на основе пептидных фрагментов нейраминидазы (НА) A/Aichi/2/68 и на основе выращенных в культуре клеток MDCK вакцинных штаммов вирусов гриппа А и В. Материалы и методы. Определение антигемагглютинирующей и вируснейтрализующей активности мышиных сывороток проводили в РТГА и РН в соответствии с рекомендациями ВОЗ. Результаты. Сыворотки к пептидам 136-147 и 154-164 из вариабельных сайтов, а также к пептиду 314-328 из консервативной области тяжелой цепи НА вируса гриппа A/ Aichi/2/68 проявили отчетливые антигемагглютинирующую и нейтрализующую активность в отношении гомологичного вируса. Сыворотка анти-(314-328) была активна в РТГА и РН также в отношении других штаммов подтипа H3N2. Сочетанное применение пептидных образцов с иммуномодулятором (иммуномаксом) повышает их иммуногенность до уровня иммуногенности культуральных образцов, полученных на основе штаммов вируса гриппа А. Заключение. Результаты свидетельствуют о более высокой иммуногенности культуральных вакцин, полученных на основе вирусов гриппа, в сравнении с пептидными образцами. Показана возможность усиления иммуногенности пептидных вакцин за счет сочетанного применения с иммуномодулятором.

Цель . Изучить влияние фактора, ингибирующего миграцию макрофагов (MIF), при интрацеребральном введении на течение экспериментальной инфекции, вызванной у мышей вирусом клещевого энцефалита (ВКЭ), а также изучить влияние полипренилфосфата натрия (ППФ) и/или антител к MIF на течение данного заболевания на фоне введения MIF. Материалы и методы . В качестве источника ППФ использовали препарат фоспренил. ППФ вводили интрацеребрально. MIF - рекомбинантный человеческий фирмы «R&D» (США); мыши - линии BALB/c. Результаты . В сыворотках крови мышей, инфицированных ВКЭ, выявляли стимуляцию продукции MIF с 8 по 10 сутки после инфицирования - на фоне проявления клинических признаков клещевого энцефалита (КЕ). Введение инфицированным мышам ППФ, напротив, приводило к подавлению продукции MIF в указанные сроки. При введении мышам MIF в дозе 20 нг, летальность на 40% увеличилась, а средняя продолжительность жизни (СПЖ), сократилась на 2,3 сут. Таким образом, MIF в высоких дозах вызывал утяжеление течения инфекции, вызванной ВКЭ у мышей, а введение ППФ в дозе 60 мкг приводило к защите от инфекции в 100% случаев. Интрацеребральное введение антител к MIF мышам приводило к снижению показателя летальности до 26% по сравнению с контролем и увеличению СПЖ на 5,5 сут. При одновременном введении в мозг зараженных мышей MIF, ППФ и антител к MIF регистрировали предотвращение MIF-индуцированного утяжеления течения КЭ. Заключение . Полученные данные позволяют сделать вывод, что MIF может служить показателем тяжести течения КЭ, а также - возможным прогностическим показателем развития менинго-энцефалитической формы КЭ у людей.

Цель. Разработка праймеров для выявления лептоспир в клиническом материале, в том числе в моче. Материалы и методы . Проведено исследование чувствительности и специфичности праймеров, комплементарных гену colA, в стандартной ПЦР с использованием препаратов ДНК культур патогенных и сапрофитных лептоспир, биологического материала от здоровых людей и собак, в том числе контаминированного культурой патогенных лептоспир. Результаты . Было установлено специфическое взаимодействие данных праймеров с ДНК патогенных лептоспир 14 серогрупп. Чувствительность методики составила 50 клеток на 1 мл образца. Заключение. Описанные праймеры удовлетворяют требованиям чувствительности и специфичности и могут быть рекомендованы для применения с целью детекции лептоспир как в сыворотке, так и в моче.

Цель. Определить антибактериальную активность кислоторастворимого хитозана при терапии бактериального вагиноза у женщин репродуктивного возраста и сравнить результаты терапии по традиционной схеме и после местного применения кислоторастворимого хитозана. Материалы и методы. Микрофлора влагалища 76 пациенток гинекологического и акушерского профиля в возрасте 18 - 43 лет с диагнозом бактериального вагиноза исследована бактериологическим методом. В группу контроля вошли 30 практически здоровых женщин. Методом диффузии в агар определяли чувствительность к 2% раствору кислоторастворимого хитозана молекулярной массы 200 - 250 кДа 145 штаммов бактерий, относящихся к 14 родам. Результаты. При бактериальном вагинозе на фоне снижения количества лактобацилл доминировали представители родов Gardnerella, Mobiluncus и Bacteroides. Наблюдали также увеличение популяционного уровня представителей родов Staphylococcus, Enterococcus, Prevotella, Porphyromonas, Peptostreptococcus и грибов рода Candida. Установлено, что все микроорганизмы чувствительны к 2% раствору хитозана. Mycoplasma и Ureaplasma spp. были чувствительны к хитозану в 82% случаев. Использование хитозана для местного лечения вагиноза приводило к подавлению условно патогенных микроорганизмов и клиническому эффекту с отсутствием побочных эффектов. Заключение. Показана перспективность местного применения хитозана при бактериальном вагинозе.

Цель . Установление наличия пародонтопатогенных микроорганизмов в атеросклеротической бляшке и окружающих тканях, а также возможной связи развития атеросклероза и Asp299Gly полиморфизма гена TLR4 у больных ишемической болезнью сердца (ИБС). Материалы и методы . Изучены образцы коронарных сосудов, полученные при аутопсии 31 умершего от ИБС, и 5 людей, умерших от причин, не связанных с ИБС. Определение ДНК микроорганизмов проводили методом ПЦР. Поли- морфный участок Asp299Gly гена TLR4 амплифицировали с использованием специфических праймеров. Результаты . При исследовании атеросклеротических бляшек коронарных артерий обнаружено наличие пародонтопатогенных микроорганизмов в 83,9%. Наиболее часто выявлялись Porphyromonas gingivalis (64,5%), Treponema denticola (41,9%), Actinobacillus actinomycetemcomitans (32,3%), реже Bacteroides forsythus и Prevotella intermedia (12,9 и 6,5% со- ответственно). В 51,6% случаев выявляли 2 и более микроорганизмов. Только в 11,1% образцов коронарных артерий, в бляшках которых присутствовали микроорганизмы, они были обнаружены в неповрежденных тканях. Показа- но, что у больных, умерших от ИБС, достоверно чаще встречался аллель 229Gly гена TLR4. Заключение. Изученные пародонтопатогенные микроорганизмы могут играть важную роль в патогенезе атеросклеротического поражения коронарных артерий при ИБС. Существенный вклад в эти процессы вносит наличие аллеля 299Gly гена TLR4.

В обзоре представлены литературные и собственные материалы, касающиеся новых агонистов рецепторов врожденного иммунитета из морских гидробионтов. Высокоэффективные, малотоксичные биологически активные вещества, выделенные из морских организмов, являются индукторами созревания дендритных клеток, активируют нейтрофилы, моноциты/макрофаги и NK- клетки, обладают антикомплементарным (фукоиданы) и про- и противовоспалительным действием. Защитные свойства биологически активных веществ проявляются при проникновении в организм различных патогенов - бактерий, вирусов, простейших, грибов. Такие соединения могут стать основой для создания новых лекарственных препаратов.

В статье обсуждается эволюция ключевых терминов, используемых в эпидемиологии внутрибольничных инфекций. Представлена современная точка зрения на терминологию, приводится сопоставление отечественных терминов с зарубежными аналогами.