Journal of microbiology, epidemiology and immunobiologyJournal of microbiology, epidemiology and immunobiologyЖурнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии0372-93112686-7613Central Research Institute for Epidemiology13574ArticlesСтатьиResearch ArticleDEVELOPMENT OF STAPHYLOCOCCUS HAEMOLYTICUS MULTILOCUS SEQUENCING SCHEME AND ITS USE FOR MOLECULAR-EPIDEMIOLOGIC ANALYSIS OF STRAINS ISOLATED IN HOSPITALS IN RUSSIAN FEDERATION IN 2009-2010РАЗРАБОТКА СХЕМЫ МУЛЬТИЛОКУСНОГО СЕКВЕНИРОВАНИЯ STAPHYLOCOCCUS HAEMOLYTICUS И ЕЕ ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ МОЛЕКУЛЯРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО АНАЛИЗА ШТАММОВ, ВЫДЕЛЕННЫХ В СТАЦИОНАРАХ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ В 2009-2010 ГГVoroninaO. LВоронинаО. ЛKundaM. SКундаМ. СDmitrenkoO. AДмитренкоО. АLuninV. GЛунинВ. ГGintsburgA. LГинцбургА. ЛGamaleya Research Institute of Epidemiology and Microbiology, Moscow, RussiaНИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи, Москва15102011885NO5 (2011)№5 (2011)626709062023Copyright ©; 2011, Voronina O.L., Kunda M.S., Dmitrenko O.A., Lunin V.G., Gintsburg A.L.Copyright ©; 2011, Воронина О.Л., Кунда М.С., Дмитренко О.А., Лунин В.Г., Гинцбург А.Л.2011Voronina O.L., Kunda M.S., Dmitrenko O.A., Lunin V.G., Gintsburg A.L.Воронина О.Л., Кунда М.С., Дмитренко О.А., Лунин В.Г., Гинцбург А.Л.https://creativecommons.org/licenses/by/4.0https://microbiol.crie.ru/jour/article/view/13574

Aim. Development of Staphylococcus haemolyticus strain typing method based on multilocus sequencing for resolving problems of molecular epidemiology. Materials and methods. 102 strains of coagulase negative staphylococci (CNS) isolated in hospitals of various specialization in N.Novgorod and Moscow were studied. Species identification of strain was performed by using tuf gene fragment sequencing, S.haemolyticus strain differentiation - by MLST results. eBURST approach was used for cluster analysis of MLST data; structural changes in tagatose-6-phosphate kinase were studied by using InterProScan platform and SWISS-MODEL site programs; MLST scheme gene allele variability analysis was performed by using MEGA 4.0 program package. Results. In the 102 strains sampled CNS was detected in 28 strains of the S.haemolyticus species. The MLST scheme developed for the first time for S.haemolyticus including mvaK, rphE, tphK, gtr, arcC, triA, aroE genes allowed the differentiation of the sampled strains by 11 genotypes. Strains with ST 3, 8, 6, 1, 4, 5 and 11 differed by highest epidemiologic significance. Cluster and phylogenetic analysis of the data obtained showed a high adaptive ability of the nosocomial S.haemolyticus strains. Multiresistance to antibacterial preparations was detected in the analyzed strains. Conclusion. The MLST method developed was effective in the differentiation of S.haemolyticus strains that circulate in hospitals and threaten both neonates and hospitalized adult patients.

Цель . Разработка метода типирования штаммов S.haemolyticus на основе мультилокусного секвенирования для решения задач молекулярной эпидемиологии. Материалы и методы. Изучали 102 штамма коагулазоотрицательных стафилококков (КОС), выделенных в стационарах различного профиля Н.Новгорода и Москвы. Видовую идентификацию штаммов проводили на основе секвенирования последовательностей фрагмента гена tuf, дифференциацию штаммов S.haemolyticus - по результатам MLST. Для кластерного анализа данных MLST использован подход eBURST; изучение структурных изменений в тагатозо-6-фосфат киназе проведено с помощью платформы InterProScan и программ сайта SWISS-MODEL; анализ изменчивости аллелей генов схемы MLST выполнен на основе пакета программ MEGA 4.0. Результаты. В выборке 102 штаммов КОС выявлено 28 штаммов вида S.haemolyticus. Разработанная впервые схема MLST для S. haemolyticus, включающая гены mvaK, rphE, tphK, gtr, arcC, tpiA, aroE, позволила дифференцировать выборку штаммов по 11 генотипам. Штаммы с ST 3, 8, 6, 1, 4, 5 и 11 отличались наибольшей эпидемиологической значимостью. Кластерный и филогенетический анализ полученных данных показал высокую адаптационную способность внутрибольничных штаммов S.haemolyticus. У проанализированных штаммов выявлена мультирезистентность к антибактериальным препаратам. Заключение. Разработанный метод MLST эффективен в дифференциации штаммов S.haemolyticus, циркулирующих в стационарах и представляющих опасность как для новорожденных, так и для госпитализированных взрослых пациентов.

MLSThemolytic staphylococciMLSTmultiresistance to antibioticsгемолитические стафилококкимультирезистентность к антибиотикамАкатов А.К., Зуева В.С. Стафилококки. М., Медицина, 1983.Воронина О.Л., Кунда М.С., Дмитренко О.А. и др. Оценка видового разнообразия коагулазоотрицательных стафилококков, выделенных в стационарах Российской Федерации в 2009-2010 гг. Журн. микробиол. 2011, 1: 3-8.МУК 4.2.1890-04. Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам. М., 2004.Correa J.E., DePaulis A., Predari S. et al. First report of qacG, qacH and qacJ genes in Staphylococcus haemolyticus human clinical isolates. J. Antimicrob. Chemother. 2008, 62: 956-960.Diekema D.J., Pfaller M.A., Schmitz F.J. et al. Survey of infections due to Staphylococcus species: frequency of occurrence and antimicrobial susceptibility of isolates collected in the United States, Canada, Latin America, Europe, and the Western Pacific region for the SENTRY Antimicrobial Surveillance Program, 1997-1999. Clin. Infect. Dis. 2001, 32 (2): S114-S132.Falcone M., Giannella M., Raponi G. et al. Teicoplanin use and emergence of Staphylococcus haemolyticus: is there a link. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 2005, 12: 96-98.Hanssen A.M., Ericson Sollid J.U. SCC mec in staphylococci: genes on the move. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2006, 46: 8-20.Hunter P.R, Gaston M.A. Numerical index of the discriminatory ability of typing systems: an application of Simpson’s index of diversity. J. Clin. Microbiol. 1988, 26: 2465-2466.Kloos W.E., Bannerman T.L. Update on clinical significance of coagulase-negative staphylococci. Clin. Microbiol. Rev. 1994, 7: 117-140.Low D.E., Schmidt B.K., Kirpalani H.M. et al. An endemic strain of Staphylococcus haemolyticus colonizing and causing bacteremia in neonatal intensive care unit patients. Pediatrics. 1992, 89 (4 Pt2): 696-700.Maiden M.C.J., Bygraves J.A., Feil E. et al. Multilocus sequence typing: a portable approach to the identification of clones within populations of pathogenic microorganisms. Microbiology. 1998, 95: 3140-3145.Metha G., Kumari S. Multi-resistant Staphylococcus haemolyticus in neonatal unit in New Delhi. Ann. Trop. Pediatr. 1997, 17 (1): 15-20.Ruppe´ E., Barbier F., Mesli Y. et al. Diversity of staphylococcal cassette chromosome mec structures in methicillin-resistant Staphylococcus epidermidis and Staphylococcus haemolyticus strains among outpatients from four countries. Antimicrob. Agents Chemother. 2009, 53 (2): 442-449.Thomas J.C., Vargas M.R., Miragaia M. et al. Improved multilocus sequence typing scheme for Staphylococcus epidermidis. J. Clin. Microbiol. 2007, 45: 616-619.