Том 92, № 2 (2015)

Цель. Оценка антибактериального действия миллимолярных концентраций катионов меди и цинка, примененных в виде сульфатов или хлоридов, в культурах S.aureus и P aeruginosa. Материалы и методы. Суспензию бактерий S.aureus или Paeruginosa, содержавшую 108 КОЕ/мл, засевали газоном на чашки Петри с питательным агаром. Спустя 30 мин на поверхность газона с помощью 36-канального штампа-репликатора каплями объемом по 5 мкл наносили солевые растворы меди или цинка с концентрацией по катионам металлов от 10-9 или 10-6 М до 5х10-1 М. Затем чашки с культурой бактерий инкубировали в течение 16 - 18 час при 37°С, после чего определяли диаметр зоны задержки роста бактерий. Для оценки наличия (отсутствия) в зонах задержки роста жизнеспособных бактерий из центра зоны производили посевы материала в пробирки с питательным бульоном, которые термостатировали в течение срока до пяти суток при 37°С, после чего оценивали прозрачность питательного бульона. Результаты. В диапазоне концентраций металлов от 50 до 500 мМ ингибирующее действие сульфата цинка в отношении бактерий S.aureus в 1,3 - 1,6 раза (р<0,001 - 0,05) превосходит эффекты сульфата меди. При концентрациях катионов 100 и 500 мМ действие хлорида цинка в культуре S.aureus в 1,2 - 1,6 раза (р<0,02) превосходит эффекты хлорида меди. В культуре Paeruginosa антибактериальное действие сульфата меди сопоставимо с эффектами сульфата цинка. При концентрации металла 500 мМ действие хлорида меди на клетки Paeruginosa в 1,2 раза (р<0,05) более выражено, чем эффекты хлорида цинка. Посевы материала из зон задержки роста культуры обнаруживают помутнение питательного бульона в пробах с образцами из лунок, обработанных солями цинка, и прозрачность бульона в пробах из лунок, обработанных солями меди. Заключение. В миллимолярных концентрациях катионы меди и цинка обладают выраженным антибактериальным действием в культурах S.aureus и Paeruginosa. Оно реализуется как бактерицидное в присутствии катионов меди и как бактериостатическое - в присутствии катионов цинка. Бактерии S.aureus оказываются более чувствительными к действию катионов цинка, оцениваемому по зонам задержки роста, чем Paeruginosa. Последние проявляют более высокую, чем S.aureus, толерантность к меди и цинку. При этом в отношении катионов меди толерантность P. aeruginosa преодолима.

Цель. Выявление современных особенностей проявления очагов туляремии, определение территории повышенной эпидемической опасности в различных ландшафтных зонах и создание карты очаговых территорий Московской области по выделению культур возбудителя туляремии и регистрируемой заболеваемости людей для обоснованного планирования профилактических мероприятий. Материалы и методы. Использованы отчетные материалы эпизоотологических обследований природных очагов за 1965 - 2013 годы, 156 карт эпидемиологического обследования случаев заболеваний людей туляремией, результаты исследований погадок хищных птиц и помета хищных млекопитающих. С использованием современных ГИС-технологий (программы MapInfo 10.5) на электронную карту Московской области методом значков нанесены регистрируемая заболеваемость и выделение культур возбудителя туляремии с 1965 года по настоящее время. Для поиска базовых точек использовали электронные карты Ingit в масштабе 1:200 000, а также программу Google Earth. Результаты. Анализ заболеваемости выявил структурное изменение заболеваемости людей туляремией - увеличение доли городского населения и уменьшение доли больных среди сельских жителей, болеют в основном не привитые против этой инфекции. Показано, что наличие ДНК возбудителя туляремии в биологических объектах в комплексе с серологическими и бактериологическими исследованиями позволяет выявлять вялотекущие эпизоотии даже при низкой численности грызунов. Заключение. Картографическое отображение регистрируемой заболеваемости и выделения культур возбудителя туляремии позволило показать территории с различной степенью эпизоотической активности и эпидемического проявления. Положительные результаты серологических и молекулярно-генетических исследований объектов окружающей среды свидетельствуют об эпизоотической активности и постоянном риске обострения эпидемической ситуации по этой инфекции.

Цель. Определение частоты выявления маркеров перенесенной и текущей ВГЕ-инфекции среди детей с иммуносупрессией, а также детей с нормальным иммунным статусом. Материалы и методы. На наличие маркеров ВГЕ (анти-ВГЕ IgG и IgM, РНК ВГЕ) исследовали 609 образцов сывороток детей с неврологическими патологиями, 87 образцов - от детей с иммунодефицитами, а также 3122 образца - от условно здоровых детей 6 регионов России. Дети были разделены на 5 возрастных групп. Определение анти-ВГЕ IgG и IgM проводили в ИФА, выявление РНК ВГЕ - методом ОТ-ПЦР Результаты. Частота выявления анамнестических анти-ВГЕ IgG оказалась достоверно выше среди иммунокомпрометированных детей по сравнению со здоровыми детьми (5,7% против 1,4%, p<0,05). Анти-ВГЕ IgM, свидетельствующие о текущей или недавно перенесенной инфекции, также достоверно чаще выявляли среди детей с иммуносупрессией (1,1 - 1,6%) по сравнению со здоровыми детьми (0,25%, p<0,05). У одного иммунокомпрометирован-ного ребенка была выявлена РНК ВГЕ при отсутствии анти-ВГЕ IgM и IgG. Анализ нуклеотидной последовательности ВГЕ подтвердил принадлежность данного изолята вируса к 3 генотипу, распространенному на неэндемичных территориях. Заключение. Полученные данные продемонстрировали, что ВГЕ-инфекция встречается среди детей на территории России и протекает, по-видимому, в большинстве случаев бессимптомно. Иммуносупрессия является фактором повышенного риска инфицирования детей ВГЕ.

Цель. Оценка способности к формированию биопленок у разных М, Т и МТ-типов стрептококка группы А (СГА), а также изучение влияния различных антибиотиков на формирование биопленок. Материалы и методы. Изучено 43 штамма различных М и Т-типов СГА. Культуры выращивали на бульоне Todd-Hewitt c добавлением 0,5% экстракта дрожжей. Сравнительную оценку способности к формированию биопленки проводили с помощью фотометрии. Использованы антибиотики бензилпенициллин, окса-циллин, цефалоспорин, цефуроксим и цефтриаксон в различных концентрациях. Результаты. СГА существенно различаются по способности к формированию биопленок. Наиболее высокая способность отмечена у 8 штаммов 2М, 9М, 12М, 13М, 19М, 30М, 36М типов и типа 6МТ. Одновременное внесение в лунку культур СГА и антибиотиков, за исключением цефтриаксона, приводило к ингибиции роста как планктонных клеток, так и биопленок. Заключение. Способность СГА к формированию биопленки зависит от серотипа стрептококка. При одновременном внесении в лунку СГА с антибиотиком биопленка не образуется.

Цель. Изучение циркуляции респираторных вирусов у детей с внебольничной пневмонией (ВП) в период с октября 2012 по май 2013 гг. Материалы и методы. Обследованы 136 детей с ВП в возрасте от 3 месяцев до 16 лет с симптомами ОРЗ в дебюте заболевания. В мазках из носоглотки выявляли РНК/ДНК вирусов гриппа А, В, парагриппа (ПГ), адено-, рино-, РС-вирусов, корона-, метапневмо- (МПВ) и бокавирусов методом ПЦР с гибридизационно-флюоресцентной детекцией в реальном времени. В парных сыворотках крови методом РТГА определяли антитела к вирусам гриппа A/H1N1/pdm09 Кали-форния/07/09, эпидемическим эталонным штаммам вирусов гриппа A/H1N1/ Брисбен/59/07, A/H3N2/Виктория/З61/2011, B/Висконсия/1/10, к вирусам ПГ 1, 2, 3 типов. Результаты. В феврале-марте 2013 г. снизилось число детей, защищенных антителами к вирусам гриппа, и выявлена циркуляция вирусов гриппа A/H3N2/ и A/H1N1/ pdm09. Риновирусы и вирусы ПГ определяли в течение всего эпидемического сезона, бокавирус и аденовирусы - в осеннее-зимний период, РС-вирус и МПВ - в зимне- весенний. Коронавирус не выявляли. Пик детекции вирусов установлен в феврале, когда был превышен порог заболеваемости гриппом и ОРЗ. Основными патогенами детей первых 3 лет жизни являются риновирусы, РС-вирус, вирусы ПГ и бокавирус. РС-вирусная инфекция в дебюте ВП у детей до 3 лет в 55,5% случаев ассоциируется с развитием бронхообструктивного синдрома. Инфекция бокавирусом в 50% случаев протекает с ларинго-трахеитом и бронхиолитом. Заключение. Доля вирусов в этиологической структуре ОРЗ у детей варьирует в зависимости от иммунной прослойки, сезона и возраста детей. Этиология вирусной инфекции в дебюте заболевания ВП может быть доказана только специальными лабораторными исследованиями.

Цель. Изучение роли P. aeruginosa в развитии остеомиелита грудины и ребер у кардиохирургических больных и анализ основных биологических свойств изолированных штаммов бактерий. Материалы и методы. В течение 2007 - 2013 гг. в результате бактериологического обследования 83 пациентов стационара выделено 132 бактериальные культуры. Материалом для исследования служило отделяемое ран. Забор, посев и идентификацию выделенных культур проводили с использованием соответствующих тест-систем; антибиотикочувствительность изучали диско-диффузионным методом. Результаты. Доля P. aeruginosa составила 10,6% (n=14), что сопоставимо с данными по раневым инфекциям общехирургических стационаров. При оценке вирулентных свойств выделенных штаммов установлена прямая сильная коррелятивная связь (R=0,846, p=0,000132) между гемолитической и фосфолипазной активностью. Степень пленкообразующей способности в значительной мере варьировала от 0,122 до 1,412 ед. ОП; высоко пленкообразующими вариантами были 64,3% изученных культур. Статистически значимой связи между биопленкообразованием и другими изученными признаками не выявлено. Четыре штамма продуцировали металло-беталактамазы VIM2 типа и имели идентичные RAPD-профили. Заключение. Учитывая, что ранее подобные культуры не обнаруживали и все они изолированы в короткий промежуток времени, мы сделали вывод, что, по-видимому, их кратковременная циркуляция связана с заносом, что и стало причиной инфицирования пациентов. Показано, что P. aeruginosa может быть этиопатогеном как ранних, так и поздних осложнений после кардиохирургических вмешательств.

Принцип массового параллельного секвенирования, иначе называемый секвениро-ванием следующего поколения «next-generation sequencing (NGS)», появился в начале 2000-х годов и был воплощен в десятке платформ NGS. Высокая производительность и скорость секвенирования платформ NGS открыли перед учеными широкие горизонты в области геномных исследований, включая метагеномные, связанные, в первую очередь, с изучением структуры различных микробиоценозов. Появились десятки работ, посвященных изучению микробиома и вирома различных биотопов человека в норме и при патологии с использованием платформ NGS, формируя новые представления о патогенезе и эпидемиологии различных инфекционных заболеваний. Значительное снижение стоимости анализа способствует расширению сфер применения технологий NGS не только в области фундаментальных, но и прикладных микробиологических исследований, включая этиологическую диагностику инфекционных заболеваний. В связи с ростом числа случаев инфекционных заболеваний, не имеющих типичной клинической картины, использование метагеномного подхода имеет особое значение, позволяя проводить детекцию широкого спектра возбудителей бактериальных, вирусных и паразитарных инфекций. В обзоре представлены технологические особенности платформ массового параллельного секвенирования, основные методы метагеномных исследований и биоинформационные подходы, применяемые для анализа полученных результатов. Описаны исследования по изучению микробиома здорового человека и при патологиях, рассмотрены возможности и перспективы применения метагеномного подхода в диагностике и системе эпидемиологического надзора за инфекционными заболеваниями.

Проведен анализ международного опыта в обеспечении мер санитарно-эпидемиологического благополучия при проведении Олимпийских игр. Рассмотрены этапы становления системы биологической безопасности при массовых мероприятиях, включающей меры по профилактике вспышек инфекций, использование компьютерных и информационных технологий.

Для совершенствования санитарно-эпидемиологического надзора при проведении Олимпийских игр была разработана система ГИС-мониторинга объектов и ситуаций в регионе г. Сочи. Система разработана на основе программного комплекса ArcGIS, серверная версия 10.2, с Web-интерфейсом, Web-сервер Apach, программное обеспечение разрабатывалось на языке java. В процессе выполнения работы решены задачи: стратификации региона проведения Олимпийских игр по частному и совокупному эпидемиологическому риску ОКИ различной этиологии, ранжированию эпидемически значимых объектов по санитарно-гигиеническому состоянию, мониторинг за инфекционными болезнями (в режиме реального времени по предварительным диагнозам). ГИС-мониторинг показала свою эффективность. Сведения поступали из различных источников, но концентрировались на одном портале. Информация была доступна в режиме реального времени всем специалистам, участвовавшим в обеспечении эпидблагополучия, и использовалась при работе во время проведения Олимпийских игр в г. Сочи.