Том 89, № 6 (2012)

Цель. Исследование состояния плотных контактов и ультраструктурных изменений энтероцитов тощей и колоноцитов толстой кишки крыс под влиянием холерогена и протамина. Материалы и методы. В работе использовали холероген (cholera toxin) (Sigma-Aldrich, Германия) и протамин-сульфат (Россия). Исследования проводили на крысах линии Wistar. Воздействие холерного токсина и протамина на эпителиоциты кишки крыс проводили, инкубируя сегменты кишечника в соответствующих растворах. Об ультраструктурных изменениях, вызываемых холерогеном и протамином в энтероцитах и колоноцитах крыс, судили на основе анализа ультратонких срезов при трансмиссионной электронной микроскопии самих клеток и плотных контактов между ними по сравнению с контролем. Результаты. Воздействие холерогена на эпителиоциты слизитой оболочки кишки проявлялось в изменении ультраструктуры клеток, форма которых трансформировалась в результате увеличения межклеточного пространства без деструкции плотных контактов. Отмечали исчезновение складчатости латеральной области плазматической мембраны клеток и сокращение числа микроворсинок. Увеличение ядер наблюдали только в отдельных клетках. Воздействие протамина на ультраструктуру эпителиального пласта клеток существенно отличалось от действия холерогена. Характерным действием для протамина было повышение складчатости латеральных участков плазматической мембраны и значительное увеличение размеров ядер, которые смещались в центральную часть клеток, достигая ее апикального конца. Поверхность части эпителиоцитов лишалась микроворсинок с одновременным разрушением структуры плотных контактов. Протамин индуцировал увеличение складчатости только в толстой кишке, не затрагивая тощую. В то же время, оба эти вещества вызывали увеличение межклеточного пространства в эпителии тощей и толстой кишки. Заключение. Выявлены различия в ультратонком строении плотных контактов эпителиоцитов слизистой оболочки тонкой и толстой кишки крыс при действии холерогена и протамина

Цель. Исследовать взаимодействие вагинальных коринебактерий и лактобацилл в реализации окислительного механизма антагонистических отношений бактерий. Материалы и методы. Изучали влияние супернатантов коринебактерий, ингибирующих каталазу, на антагонизм перекись продуцирующих лактобацилл к Staphylococcus aureus. Результаты. Установлена высокая частота (55,5-72,7%) потенцирования антагонизма лактобацилл со средним и высоким уровнем продукции перекиси водорода под влиянием супернатантов коринебактерий, ингибирующих каталазу. Частота потенцирования антагонизма лактобацилл и коринебактерий зависела от выраженности продукции перекиси водорода и от способности коринебактерий подавлять каталазу стафилококков. Заключение. Потенцирование антагонизма в отношении S. aureus перекись продуцирующих лактобацилл и коринебактерий с ингибиторами каталазы свидетельствует о реализации окислительного бактериального механизма колонизационной резистентности организма человека.

Цель. Паспортизация штаммов V. cholerae, находящихся на хранении в Государственной коллекции патогенных микроорганизмов и клеточных культур ГКПМ - Оболенск. Материалы и методы. Исследовано 50 штаммов V. cholerae. Использован метод ПЦР в реальном времени с праймерами к генам - ctxA, ctxB, ace, zot, tсpА, toxR, hlyA, rtxC, rfbO1, ompU, ompW. Результаты. Молекулярно-биологическими методами подтверждена принадлежность исследованных штаммов к виду V. cholerae. К серогруппе О1 относятся 46 штаммов, из них - 42 токсигенных Эль-Тор, имеющих все гены, контролирующие вирулентность, и четыре нетоксигенных штамма. У одного штамма обнаружены гены ace, zot, tсpA, toxR, rtxC, hlyA, ompU. У двух штаммов присутствуют гены ace, toxR, rtxC, hlyA; у одного штамма выявлен только ген toxR, который является глобальным регуляторным геном. Два из четырех штаммов серогруппы не О1 являются токсигенными, имеющими все гены, контролирующие вирулентность (ctxA, ctxB, ace, zot, tсpA, toxR, rtxC, hlyA, ompU). Один нетоксигенный штамм имеет гены ace, zot, toxR, hlyA, ompU, а второй штамм - гены toxR, hlyA. Заключение. Составлены геномные паспорта для всех штаммов V. cholerae, хранящихся в Государственной коллекции патогенных микроорганизмов и клеточных культур ГКПМ - Оболенск. Определены маркеры эпидемической опасности - ctxA, ctxB, tcpA, toxR и дополнительные гены вирулентности.

Цель. Генотипирование астровирусов, выявленных у детей с острой кишечной инфекцией на территории Нижнего Новгорода в 2006 - 2011 гг. Материалы и методы. Материалом для исследования служили образцы фекалий детей, госпитализированных в отделение кишечных инфекций одного из инфекционных стационаров Нижнего Новгорода. Астровирусы выявляли методом обратной транскрипции полимеразной цепной реакции. Генотипы астровирусов определяли на основе филогенетического анализа нуклеотидной последовательности фрагмента генома, кодирующего капсидный белок. Результаты. При обследовании 5759 детей с ОКИ в период с июля 2006 г. по июнь 2011 г. астровирусы обнаружены в 2,6% случаев, причем в 2010, 2011 гг. частота выявления астровирусов (5,19%) была достоверно выше, чем в предыдущие эпидсезоны и в среднем за весь период наблюдения. Генотипирование выявленных астровирусов показало, что на территории Н.Новгорода циркулировали астровирусы 1, 2, 3, 4, 5 генотипов с преобладанием генотипа 1. Астровирусы 1 генотипа представлены генетическими линиями 1a, 1b, 1d при доминировании линии 1a. С начала 2010 г. все выявленные изоляты генетической линии 1a принадлежали к одной новой сублинии - 1а-2010. Вторыми по количеству выявленных изолятов были астровирусы 5 генотипа, впервые идентифицированные в Нижнем Новгороде в июле 2010 г. Астровирусы 2, 3 и 4 генотипов выявлены в единичных случаях. Заключение. Активизация циркуляции астровирусов среди населения Нижнего Новгорода, достоверное увеличение частоты их обнаружения у детей с ОКИ в эпидсезон 2010 - 2011 гг., с наибольшей вероятностью, обусловлены появлением астровирусов 5 генотипа, ранее не выявлявшихся на данной территории и на других территориях России.

Цель. Изучение филогенетических взаимосвязей вариантов ВИЧ-1 субтипов А и В, циркулирующих на территории Новосибирской области (НСО). Материалы и методы. Исследованы 268 вариантов ВИЧ-1, выделенных в 2007 - 2010 годах из образцов крови пациентов, инфицированных ВИЧ, в НСО, Самаре, Конго и Москве. Генотипирование вариантов ВИЧ-1 проводили путем анализа нуклеотидных последовательностей участка гена pol длиной 1,3 тыс. нуклеотидных остатков. Филогенетический анализ нуклеотидных последовательностей выполняли с помощью программы Mega версия 4.1 путем построения филогенетических деревьев методом ближайших соседей. Нуклеотидные дистанции рассчитывали по методу Кимуры. Результаты. Исследованные варианты ВИЧ-1 субтипа В формируют отдельные филогенетические группы с низкой степенью гомологии нуклеотидных последовательностей ВИЧ-1, объединенные по территориальному принципу и/или по времени инфицирования ВИЧ на одной территории, но не имеющие взаимосвязи с конкретными группами риска населения. ВИЧ-1 субтипа А представляют собой достаточно однородную монофилетическую группу. Не было выявлено филогенетических различий при исследовании ВИЧ-1, выделенных от пациентов из групп риска потребителей инъекционных наркотиков и лиц, инфицированных при половых контактах. Варианты ВИЧ, выделенные от пациентов, инфицированных в Москве и в Самаре, в основном группировались с вариантами ВИЧ, циркулирующими в европейской части России. Заключение. На территории сибирского региона наблюдается независимая циркуляция генетически обособленных групп ВИЧ-1 субтипа В, являющаяся результатом множественных независимых заносов отдаленных вариантов вируса. Подтвержденная ограниченность распространения данного генетического варианта ВИЧ-1 с вытекающей территориальной обособленностью создают возможность для формирования генетически отличающихся вирусных популяций. Проведенные исследования вирусов субтипа А подтверждают выявленную ранее для других территорий России высокую степень гомогенности ВИЧ-1, относящихся к данному генетическому варианту. Монофилетичность вариантов ВИЧ субтипа А объясняется наложением двух факторов - территориальной мобильностью населения внутри страны и отсутствием специфических путей передачи ВИЧ-1 субтипа А.

Цель. Анализ разнообразия и распространенности мутаций в геноме вируса иммунодефицита человека первого типа (ВИЧ-1), возникающих в ответ на антиретровирусную терапию, выделенных у ВИЧ-инфицированных лиц Новосибирской области в 2010, 2011 гг. Материалы и методы. Выявление мутаций в геноме ВИЧ-1, ответственных за устойчивость к антиретровирусным препаратам (АРВП), проводили путем определения нуклеотидной последовательности гена pol и последующего анализа полученных данных с помощью программы HIVdb: Genotypic Resistance Interpretation Algorithm. Результаты. Мутации устойчивости ВИЧ-1 к антиретровирусным препаратам обнаружены в 23,6% от общего числа исследованных образцов. Наиболее распространенными являются мутации, обусловливающие резистентность к нуклеозидным и ненуклеозидным ингибиторам обратной транскриптазы (M184V, Y181C и K103N). При исследовании ВИЧ-1, выделенных от четырёх пациентов, не получавших антиретровирусную терапию (АРВТ), была выявлена передача ВИЧ-1, устойчивых к разным группам препаратов. Заключение. Выявленные факты циркуляции устойчивых к АРВП ВИЧ-1 среди пациентов, не принимавших АРВТ, и полученные данные по возникающим в ответ на терапию мутациям подчеркивают актуальность назначения исследования профиля резистентности ВИЧ-1 как при снижении эффективности АРВТ, так и первичном назначении терапии инфицированным ВИЧ пациентам.

Цель. Подтверждение иммуностимулирующего действия оригинального низкомолекулярного германий органического соединения (НГОС) при иммунизации мышей вакциной "Ваксигрипп". Материалы и методы. Эксперименты проведены на мышах CBA, разделенных на 4 группы:контрольные, получившие внутрибрюшинно противогриппозную вакцину "Ваксигрипп", получившие внутрибрюшинно НГОС и получившие оба препарата сразу. Эффект введенных препаратоы оценивали методом проточной цитофлуориметрии по изменению содержания в селезенке мышей клеток, экспрессирующих СD3, CD4, CD5, CD8, CD19, CD25, Foxp3, NK1.1, ƒƒT, MHC II, TLR2, TLR4, TLR9. Содержание окрашенных клеток определяли в норме 24 ч и 7 сут после введения препаратов. Статистическую обработку данных проводили при помощи программного пакета Win MD 128. Результаты. Препарат НГОС способен усиливать действие вакцины "Ваксигрипп", что выражается в повышении содержания в селезенке некоторых субпопуляций лимфоцитов через 24 ч и 7 сут после внутрибрюшинного введения. НГОС в ряде случаев повышает содержание некоторых субпопуляций лимфоцитов в селезенке мышей при введении в качестве монопрепарата, т.е. без вакцины. Ни в одном из наблюдений препарат НГОС не подавлял стимулирующее влияние вакцины на содержание в селезенке различных субпопуляций лимфоцитов. Заключение. При помощи цитофлуорометрического метода возможно сформировать представление о повышенной роли разных типов клеток в развитии иммунного ответа на вакцину, а также - о дополнительном усилении этого ответа при введении мышам НГОС. Действие препарата проявляется в течение нескольких дней после его введения. Препарат проявляет адъювантные свойства и после дальнейших исследований может быть предложен для применения в качестве адъюванта.

Цель. Оценить информативность одновременного определения антител (АТ) к экстрацеллюлярным (АТ к стрептолизину-О - АСЛ-О) и клеточным (IgM к А-полисахариду - А-ПСХ) антигенам у больных ангиной и инфекциями мягких тканей, вызванными стрептококком серогруппы А (СГА), и выявить особенности гуморального иммунного ответа на СГА-инфекцию в зависимости от локализации инфекционного процесса. Материалы и методы. Две группы больных с бактериологически подтвержденной СГА-инфекцией (50 случаев ангины - группа 1 и 51 случай инфекции мягких тканей - группа 2) обследованы на наличие АСЛ-О с использованием анализатора "ARCHITECT ci8200" (Abbott, США) и IgM к А-ПСХ СГА методом ИФА. Результаты. Позитивными по уровню АСЛ-О в группе 1 признаны 23 (46%), а в группе 2 - 20 (39%) человек (p>0,05); условно существенное превышение нормальных значений (> чем в 1,5) обнаружено у 25% пациентов каждой группы. Повышенный уровень антител к А-ПСХ СГА был выявлен у 43 (86%) больных из группы 1 и у 30 (59%) больных из группы 2 (р<0,05). В группе 1 отмечено превышение нормальных значений антиА-ПСХ IgM в основном в 1,50,5 раза (74%). В группе 2 у 43% пациентов уровень анти-А-ПСХ IgM был выше нормы более чем в 2 раза и в большинстве случаев при неосложненных вариантах течения болезни. У 45% больных тяжелыми формами инфекции мягких тканей этот показатель не превышал нормальных значений (p<0,05). Заключение. Установлено, что в острый период заболевания при одновременном определении АСЛ-О и IgM к А-ПСХ чувствительность серологической диагностики ангин СГА-этиологии и СГА-инфекций мягких тканей достигает 92 и 72% соответственно, а гуморальный иммунный ответ на клеточные АГ при каждой форме СГА-инфекции имеет особенности.

Цель. Исследование состояния микроэкологии кишечника у больных обтурационной желтухой после декомпрессии желчных протоков и назначения лактулозы. Материалы и методы. Обследовали 58 больных разного пола и возраста, находившихся на лечении в 13 хирургическом отделении ГКБ № 7 по поводу механической желтухи. Оценка назначения лактулозы была проведена в слепом рандомизированном исследовании. Больные были разделены на две группы по 29 человек в каждой: (1) пациенты, подвергнутые оперативному вмешательству без назначения лактулозы (контроль), и (2) пациенты, получавшие сразу после декомпрессии желчных протоков лактулозу по 30 мл в течение одной недели (группа сравнения). Пробы фекалий отбирали с недельным интервалом для бактериологического исследования на дисбактериоз. Результаты. По результатам бактериологического анализа фекалий у всех 58 больных с механической желтухой были выявлены нарушения микроэкологии кишечника различной степени выраженности. В группе больных применение лактулозы в течение 7 дней после декомпрессии желчных протоков была отмечена тенденция к увеличению популяционного уровня бифидобактерий и лактобацилл и снижение численности условно патогенных микроорганизмов различных таксономических групп. Заключение. Назначение больным лактулозы в дозах 30 мл в сутки в течение 7 дней позитивно сказывалось на состоянии микробиоценоза толстой кишки в сторону его нормализации.

Цель. Оценить значение эпителиально-бактериальных взаимодействий для формирования и/или поддержания микробиоценозов. Материалы и методы. Изучено влияние вагинальных эпителиоцитов на ростовые свойства штаммов лактобацилл, полученных из того же биотопа у 16 женщин с нормоценозом влагалища. При проведении интравагинальной пробиотической терапии у 24 женщин с дисбиозом влагалища оценена вероятность колонизации влагалища пробиотическим штаммом в зависимости от результата влияния вагинальных эпителиоцитов на его ростовые свойства. Результаты. Показано, что в условиях нормоценоза экзометаболиты мукозальных эпителиоцитов оказывают стимулирующее воздействие на рост аутоштаммов доминантной микрофлоры, что, вероятно, является основой формирования и/или поддержания микробиоценоза. Выявлено, что стимулирующее влияние экзометаболитов вагинальных эпителиоцитов пациенток на ростовые свойства пробиотического штамма является необходимым условием успешной пробиотической терапии. Заключение. Полученные данные позволяют рассматривать эпителиально-бактериальные взаимодействия как основу формирования микробиоценозов. Оценка этих взаимодействий может быть использована для индивидуального подбора пробиотических штаммов.

Цель. Оценка безопасности профилактики вирусных геморрагических лихорадок специфическими гетерологичными иммуноглобулинами. Материалы и методы. Провели клинико-лабораторное обследование 24 людей после внутримышечного введения гетерологичного иммуноглобулина Эбола. Анафилактогенность иммуноглобулинов изучали по РД 42-28-8-89 на морских свинках в сравнении с коммерческими препаратами. Результаты. Не отмечено реакций немедленного типа. У лиц с нормальным анамнезом количество местных реакций - 31%, общих в виде легкой сывороточной болезни - 13%. У лиц с неблагоприятным анамнезом на фоне десенсибилизирующей терапии реакций практически не было; при ее отсутствии местные реакции имели место у 50%, сывороточная болезнь легкой степени - у 17%, средней - у 33%. По анафилактогенным свойствам иммуноглобулины против особо опасных вирусных агентов не отличались от коммерческих гетерологичных препаратов. Заключение. Применение специфических иммуноглобулинов из сыворотки крови лошадей (основных средств защиты от опасных и особо опасных экзотических вирусных инфекций) при соблюдении принципа десенсибилизации относительно безопасно. Безопасный уровень сенсибилизирующих свойств характеризуется значением индекса анафилаксии до 3,7 для морских свинок.

Цель. Определение содержания цитокинов в разных участках зубного ряда у пациентов с периимплантитами, ассоциированными с пародонтопатогенными видами бактерий I и II порядка. Материалы и методы. Обследованы 32 пациента с осложнениями, развившимися от 3 мес до 14 лет после установки внутрикостных дентальных имплантатов. С помощью иммуноферментного анализа в твердой фазе определено содержание цитокинов в разных участках зубного ряда у пациентов с развившимися периимплантитами, ассоциированными с пародонтопатогенными видами бактерий I и II порядка. Для определения маркерной ДНК пародонтопатогенных бактерий использовали мультиплексную полимеразную цепную реакцию. Результаты. Маркерная ДНК пародонтопатогенных видов бактерий I порядка - Aggregatibacter (Actinobacillus) actinomycetemcomitans, Tannerella forsythia (Baсteroides forsythus), Porphyromonas gingivalis в перимплантационных тканях при отторжении имплантатов выявлена с частотой 34,4 - 75%, в то время как II порядка (Prevotella intermedia, Treponema denticola, Parvimonas micros (Peptostreptococcus micros), Fusobacterium nucleatum/ periodonticum и др.) - с достоверно меньшей частотой. Суммарная концентрация IL-1ƒ, IL-4, IL-6, IL-8, TNFƒ, IL-17А и INFƒ в содержимом патологических карманов в области имплантатов и уровень каждого из них были статистически достоверно выше, чем в содержимом пародонтальных карманов, участках со стабильными имплантатами и в десневой жидкости из участков со здоровыми зубами. Общее содержание интерлейкинов в содержимом патологических карманов в области отторгнутых имплантатов было достоверно выше, чем в других исследуемых участках. В экссудате пародонтальных карманов сохранившихся зубов оно было в 2,4 раза меньше, в области стабильных имплантатов - в 4,6 раза, а в участках со здоровыми зубами - в 4,8 раз меньше, чем при отторжении имплантатов (р<0,05). Заключение. Результаты проведенной работы позволяют сделать заключение о целесообразности мониторинга при дентальной имплантации динамики пародонтопатогенных видов микроорганизмов и локального цитокинового ответа организма хозяина в целях рациональной профилактики и лечения воспалительных осложнений.