Том 92, № 4 (2015)

В статье обсуждается новое направление - инфекционная симбиология, изучающее взаимодействия микросимбионтов с хозяином при инфекции в условиях их биокоммуникативных взаимоотношений. Наличие взаимосвязи кишечной микробиоты с нарушениями гомеостаза человека постулирует тезис: организм человека - суперорганизм, включающий множество видов прокариот, где представители нормофлоры микробиоты - основной комплекс экстракорпоральной физиологической системы, работающей в качестве регулятора гомеостаза организма. При изучении межмикробных отношений в микросимбиоценозе определен его системообразующий фактор, включающий базовые универсальные функции микроорганизмов - репродуктивную (рост/размножение) и адаптационную (биопленкообразование и антилизоцимный тест). Показано, что взаимодействие микробов в векторе доминант-ассоциант, обеспечивающее функционирование микросимбиоценоза, реализуется через оппозитный (усиление/подавление) эффект репродуктивной и адаптационной функций микросимбионтов пары доминант-ассоциант, способствующий распознаванию свой-чужой. Межмикробное распознавание микросимбионтов свой-чужой опережает сигналинг адаптивного иммунитета хозяина, способствуя элиминации или сохранению микроба в организме в зависимости от результата идентификации. Отмечено, что микробный фактор, выполняя роль регулятора гомеостаза организма, осуществляет синергидное функционирование доминантной микрофлоры с хозяином. При проникновении чужеродных ассоциантов (патогенов) в организм защита хозяина реализуется путем индукции его адаптивного иммунитета через цитокиновую сеть. Ключевыми игроками кишечной микробиоты человека являются бифидобактерии, которые наряду с индукцией адаптивного иммунитета и изменением баланса про- и противовоспалительных цитокинов хозяина непосредственно регулируют микросимбиоценоз, включая систему гормонов и нейромедиаторов.

Цель. Изучение распространенности и выраженности антигемоглобиновой и анти-лактоферриновой активности у энтерококков как представителей симбиотической микрофлоры кишечника и возбудителей инфекционно-воспалительных заболеваний у детей. Материалы и методы. В исследовании использовано 95 штаммов энтерококков, выделенных из кишечника детей при обследовании на дизбиоз, и 34 клинических изолята. Идентификацию штаммов осуществляли с помощью мультиплексной ПЦР. Анти-лактоферриновую и антигемоглобиновую активность определяли по О.В. Бухарину и др. (2005). Результаты. Установлены более высокий уровень распространенности и выраженности антилактоферриновой, антигемоглобиновой активности, а также комбинация данных свойств у клинических изолятов Enterococcus faecalis и E. faecium по сравнению со штаммами, выделенными из кишечника здоровых лиц. Заключение. Изученные свойства могут быть использованы для дифференциации патогенных и непатогенных штаммов энтерококков и при отборе препаратов-ингибиторов, пригодных для терапии энтерококковых инфекций.

Цель. Изучение влияния экзометаболитов ассоциативной микробиоты на суточную динамику функциональных показателей, отражающих патогенные и персистентные свойства грибов и бактерий. Материалы и методы. Для исследования пролиферативной, адгезивной, каталазной, протеазной, фосфолипазной, гемолитической, антилизоцимной, биопленкообразующей активности были взяты клинические изоляты Candida albicans, выделенные из кишечника здоровых и больных кандидозом людей, а также клинические изоляты и музейные штаммы АТСС Staphylococcus aureus 25923, Escherichia coli 35218 и Pseudomonas aeruginosa 27853. Результаты статистически обработаны. Результаты. Выявлено, что изоляты C. albicans, выделенные от здоровых людей, индифферентны к действию бактериальных метаболитов. Хроноинфраструктура биологических свойств грибов изменялась под влиянием метаболитов микробиоты. К воздействию бактериальногрибковых метаболитов госпитальные изоляты S. aureus, E. coli и P. aeruginosa проявляли относительную стабильность физиологических свойств, в отличие от музейных штаммов. Заключение. Выявленные изменения хроноинфраструктуры биологических ритмов микроорганизмов бактериально-грибковыми метаболитами ассоциантов отражают напряженность биологической системы, которая неизбежна в процессе формирования межмикробных взаимоотношений.

Цель. Сравнительная фенотипическая и генетическая оценка патогенного потенциала штаммов Staphylococcus aureus, выделенных от резидентных бактерионосителей, проживающих на территориях с антропогенным загрязнением воздушной среды различной интенсивности. Материалы и методы. Объектом исследования явились S.aureus, выделенные трехкратно со слизистой оболочки переднего отдела носа 210 детей. Антикарнозиновую активность и образование биопленок определяли фотометрическим методом, антибиотикорезистентность - диско-диффузионным методом. Детекцию генов lukS, lukF, sec 3, clfA, clfB, agr и mecA, ассоциируемых с патогенностью S.aureus, осуществляли методом ПЦР. Результаты. Штаммы S.aureus, выделенные от детей, проживающих на территории с высоким уровнем антропогенного загрязнения воздушной среды, характеризовались антибиотикорезистентностью, более высокими значениями антикарнози-новой активности, в 2 раза чаще формировали биопленки с более высокими значениями признака. Гены clfA и clfB, детерминирующие колонизацию слизистых оболочек, и ген agr выявлены у всех исследованных штаммов S.aureus, гены lukF и sec 3 обнаружены у 20 - 40% штаммов, изолированных от детей, проживающих на обеих территориях. Генетические детерминанты mecA и lukS выявлены не были. Заключение. Золотистые стафилококки, выделенные от детей, проживающих на территории с высоким уровнем антропогенного загрязнения воздушной среды, характеризуются более высокими значениями изученных факторов персистенции и устойчивостью к антибиотикам. Генетические детерминанты патогенности выявлены у S.aureus, выделенных от лиц, проживающих на обеих территориях.

Цель. Определение модулирующего воздействия кислотно-основного состояния среды культивирования энтеробактерий на активность лизоцима С-типа. Материалы и методы. Материалом для исследования послужили: штамм Escherichia coli BL21(DE3) для экспрессии белков, модельный штамм Escherichia coli K12 MG1655, выделенный из кишечного биотопа штамм Escherichia coli №242; 2 штамма Klebsiella pneumoniae, один из которых содержал плазмидный гомолог гена периплазматического ингибитора лизоцима pliC; 1 типовой штамм Salmonella enterica ATCC 14028 и штамм Micrococcus luteus ATCC 15307 в качестве контроля. Бактерии культивировали в течение суток в 2 мл жидкой среды LB при 37°C, 250 об/мин. Определение антилизоцимной активности (АЛА) проводилось фотонефелометрическим методом по О.В. Бухарину с соавт. (1999) с изменениями. Результаты. Установлено, что все исследуемые микроорганизмы, включая Micrococcus luteus, при указанных условиях через 24 часа культивирования изменяли pH жидкой питательной среды LB с исходного значения 6,6±0,1 до 8,2±0,2 единиц. Определение АЛА в среде культивирования без буферной коррекции сопровождалось падением активности лизоцима на порядок. При проведении измерения АЛА по стандартной методике эффект отсутствовал. Заключение. Локальный сдвиг кислотно-основного состояния биотопа в условиях недостаточности буферных систем приводит к обратимому изменению антимикробной активности мурамидазы, что в числе прочих неспецифических факторов среды определяет фон взаимодействий на уровне ассоциативного симбиоза. Данный аспект необходимо учитывать при разработке моделей, приближенных к условиям реальных микросимбиоценотических взаимодействий.

Представлен обзор работ о пневмококковых биопленках как форме персистенции. Рассмотрены следующие положения: формирование пневмококковой биопленки на абиотических и мукозных поверхностях, патогенетическое значение биопленочных пневмококков, их иммуногенность, а также устойчивость к антибиотикам и неблагоприятным факторам внешней среды. Показаны различия между свойствами биопленок, образованных in vivo и in vitro. Подчеркивается значение образования пневмококковой биопленки как способа выживания в течение длительного времени.

Цель. Оценка микробиологической эффективности использования препарата лонгидазы в лечении активного неспецифического эндометрита у женщин с миомой матки. Материалы и методы. Методом произвольной выборки были сформированы две группы женщин. Первую составили пациентки с активным хроническим эндометритом, получавшие стандартную этиотропную антибактериальную терапию. Во вторую группу включены больные, которым к стандартной терапии дополнительно назначали лонгидазу. Оценку эффективности терапии проводили на основе анализа микробного пейзажа цервикального канала и полости матки через 2 мес. после лечения в I фазу менструального цикла. Результаты. Установлено, что у обследованных женщин как первой, так и второй групп преимущественно встречаются неплазмокоагулирующие стафилококки, энтерококки и анаэробы. Заключение. Применение лонгидазы в сочетании с антибактериальной терапией приводит к наиболее значительному улучшению микробного пейзажа цервикального канала и полости матки.

Цель. Изучить влияние пробиотиков «РиоФлора Иммуно Нео» и «Бифиформ» на состав микрофлоры толстого кишечника в условиях экспериментального дисбиоза у мышей. Материалы и методы. Животным моделировали лекарственный дисбиоз введением гентамицина, по окончанию формирования дисбиоза интрагастрально вводили пробиотики. Количественное и качественное исследование мукозной микрофлоры толстой кишки мышей проводили бактериологическим методом. Результаты. Коррекция дисбиоза пробиотиками привела к коррекции состава кишечной микрофлоры, более выраженном при применении «РиоФлора Иммуно Нео». Заключение. Результаты исследования позволяют рекомендовать использование данных препаратов для избирательной коррекции дисбиоза толстого кишечника.

Цель. Оценить иммунорегуляторные свойства метаболитов бифидобактерий при эубиозе и дисбиозе толстого кишечника человека. Материалы и методы. Изучена антицитокиновая активность метаболитов клинических штаммов бифидобактерий и их способность влиять на продукцию мононуклеарами периферической крови здорового человека про- и противовоспалительных цитокинов (IL-10) с учетом микроэкологического состояния кишечника человека. Определение конечной концентрации цитокинов в опытных и контрольных пробах проводили в ИФА. Результаты. Выявлены чувствительные параметры, пригодные для оценки стабильности кишечного микросимбиоценоза человека. Для бифидобактерий в условиях эубиоза информативными оказались: уровень микробной обсемененности, концентрация TNF- а и антилизоцимная активность. При формировании дисбиоза 1 - 3 степени значимыми параметрами явилась способность метаболитов бифидофлоры влиять на продукцию провоспалительных цитокинов (INF-y, TNF-а, IL-8) мононуклеарами человека. Заключение. Поддержание физиологического состояния кишечного гомеостаза определяется иммунорегуляторными свойствами метаболитов бифидобактерий, реализуемым через их воздействие как на цитокины (антицитокиновая активность), так и на продукцию цитокинов иммунными клетками (мононуклеарами периферической крови) хозяина.

Цель. Изучить частоту выявления микоплазм и уреаплазм в клиническом материале от больных мочекаменной болезнью. Материалы и методы. Образцы клинического материала (сыворотка крови, моча, мочевые камни) от 31 больного мочекаменной болезнью были получены во время операции по удалению камней. В исследовании использовали культуральный метод, РАГА и ПЦР. Результаты. Изучение клинического материала от 31 больного методом ПЦР показало, что у 25 человек (80,6%) была выявлена ДНК микоплазм и уреаплазм, ДНК микоплазм чаще выявляли в мочевых камнях, реже - в сыворотке крови. ДНК Mycoplasma hominis обнаруживали в клиническом материале значительно большего числа больных. Культуральным методом от 8 пациентов было выделено 23 культуры, идентифицированные методом ПЦР как M. hominis. Все изоляты вырастали в виде «мини-колоний». Даже при многократном пассировании на агаровой среде не было получено реверсии «мини-колоний» в колонии с классической морфологией. Заключение. Установлена высокая частота выявления микоплазм и уреаплазм в клиническом материале больных с мочекаменной болезнью. Выделенные культуры M. hominis росли только в виде «мини-колоний». Обнаруженный феномен может свидетельствовать о высокой вариабельности микоплазм и возможности существования ранее неизвестной формы их персистенции в организме человека.

Цель. Подбор оптимального режима дозирования, продолжительности курса лечения (кратности введения), оценка безопасности, переносимости и клинической эффективности медицинского препарата Фортепрен® у пациентов с хронической рецидивирующей герпесвирусной инфекцией генитальной локализации. Материалы и методы. Клинические исследования проходил лекарственный препарат противовирусного и иммуномодулирующего действия Фортепрен® (натрия полипренилфосфат) раствор для инъекций 4 мг/мл в сочетании с базовым курсом ациклического нуклеозида ацикловир, таблетки по 400 мг. В исследовании приняли участие 40 пациентов мужского и женского пола. После 10-дневного курса ацикловира (400 мг х 3 раза в день) для снятия острой фазы были сформированы 4 группы по 10 человек: 1 - Фортепрен® в/м 5 мл (20 мг) однократно на 13+2 день от начала исследования после окончания лечения острой фазы заболевания; 2 - Фортепрен® в/м 5 мл (20 мг) трехкратно с интервалом в 21 день; 3 - Фортепрен® 2 мл (8 мг) в/м трехкратно с интервалом в 21 день; 4 (контрольная) - плацебо 5 мл в/м на стадии ремиссии трехкратно с интервалом в 21 день. При оценке эффективности учитывали увеличение продолжительности межрецидивного периода, снижение выраженности рецидивов, состояние элементов поражения кожи или слизистой, улучшение иммунологических показателей. Результаты. Показаны значимые отличия частоты рецидивов генитального герпеса за 3 месяца наблюдения в экспериментальных и контрольной группах. Достоверное сокращение частоты рецидивов генитального герпеса с 3,52+0,09 (до лечения) до 2,89+0,08 (после лечения) отмечено у пациентов 3 группы (p<0,001). В контрольной группе частота рецидивов составила 3,84+0,10, что было выше показателей всех экспериментальных групп. Существенное снижение площади высыпаний отмечено в 3 группе, кроме того, обнаружено снижение частоты выявления клинических проявлений генитального герпеса в виде везикулезных элементов во 2 (p=0,02) и 3 группах (p=0,005) после лечения. При оценке местных симптомов установлено, что жжение минимально беспокоило пациентов 3 и 4 групп, зуд и болезненность - пациентов 1 и 3 групп. Наименее выраженные обострения отмечались у пациентов 3 группы. Установлено, что внутримышечное введение препарата Фортепрен® приводит к увеличению титров лейкоцитарного вирус-индуцированного интерферона на всем протяжении лечения. Заключение. За оптимальный режим дозирования принята доза 2 мл (8 мг) внутримышечно на стадии ремиссии трехкратно с интервалом в 21 день после окончания 10-дневного базового курса лечения острой фазы хронической рецидивирующей герпесвирусной инфекции генитальной локализации с применением ацикловира. Анализ полученных результатов показал допустимый профиль безопасности и хороший уровень переносимости препарата Фортепрен®.