Том 91, № 2 (2014)

Цель. Провести сравнительный анализ выживаемости типичных штаммов и геновариантов V. cholerae биовара El Tor, завезенных в разные годы на территорию Российской Федерации, в отсутствие питательных веществ и в условиях температурного стресса. Материалы и методы. Исследовано 24 штамма V. cholerae биовара El Tor, выделенных в 1970 - 2011 гг., 8 из которых относились к типичным изолятам и 16 к генетически измененным вариантам. Выживаемость штаммов изучали в 0,9% растворе хлорида натрия и автоклавированной речной воде при различных температурных режимах (5, 25, 37 и 42°С). Белковый состав и продукцию экзополисахарида определяли методом электрофореза по U.K. Laemmli. Результаты. Показано, что геноварианты, как и типичные штаммы, могут длительное время (до пяти месяцев) существовать в отсутствие питательных веществ при температуре 25°С. Однако в отличие от типичных эльтор вибрионов геноварианты более устойчивы к температурному стрессу. В результате адаптации к высокой температуре (42°С) в клетках геновариантов увеличивается биосинтез белков-поринов внешней мембраны OmpU и/или OmpT, а при понижении (5°С) - экзополисахарида. Заключение. Геноварианты V. cholerae биовара El Tor способны лучше адаптироваться к изменению температуры, что, возможно, способствует их большему выживанию во внешней среде.

Цель. Установление соотношений, которые позволят производить пересчет концентраций микоплазм из КОЕ/мл или ЦОЕ/мл в единицы, получаемые при анализе методом ПЦР - ГЭ/мл. Материалы и методы. Чистые культуры Mycoplasma hominis, Ureaplasma parvum и Ureaplasma urealyticum исследовали культуральным и молекулярно-биологическим методами с количественной оценкой. Проводили исследование как исходных культур, так и серий десятикратных разведений. Всего проведено 32 эксперимента. Результаты. Соотношение между ГЭ/мл и КОЕ/мл для M. hominis составило 3,5; отношение ГЭ/мл и ЦОЕ/мл - 4,4. Отношение между ГЭ/мл и ЦОЕ/мл для U.parvum составило 7,1; для U. urealyticum - 11,2. Заключение. Установлены соотношения между показателями, получаемыми при количественными исследовании чистых культур генитальных микоплазм с использованием двух методов

Цель. Разработка алгоритма идентификации генетически измененных штаммов Vibrio cholerae биовара Эль Тор, обеспечивающего установление серогруппы, серовара и биовара исследуемого изолята на основе фено- и генотипических свойств, выявление генетически измененных штаммов возбудителя холеры Эль Тор, их дифференциацию по эпидемическому потенциалу, а также оценку вариабельности ключевых генов патогенности. Материалы и методы. Комплексный анализ 28 природных штаммов V. cholerae проводили с помощью традиционных микробиологических методов, ПЦР и фрагментарного секвенирования. Результаты. Разработан алгоритм идентификации токсигенных генетически измененных штаммов V. cholerae биовара Эль Тор, включающий 4 этапа: определение серогруппы, серовара и биовара на основе фенотипических свойств, подтверждение серогруппы и биовара на основе молекулярно-генетических свойств, определение принадлежности штаммов к генетически измененным, дифференциация генетически измененных штаммов по их эпидемическому потенциалу и выявление полиморфизма ключевых генов патогенности ctxB и tcpA. Алгоритм основан на использовании традиционных микробиологических методов, ПЦР и секвенирования фрагментов генов. Заключение. Применение разработанного алгоритма повысит эффективность выявления генетически измененных вариантов возбудителя холеры Эль Тор, их дифференциацию по эпидемическому потенциалу и обеспечит установление полиморфизма генов, кодирующих ключевые факторы патогенности, для выяснения источника происхождения штаммов и возможных путей заноса инфекции.

Цель. Изучение особенностей эпидемического процесса и этиологии групповых заболеваний энтеровирусной экзантемой полости рта и конечностей на ряде территорий северо-запада России. Материалы и методы. Выделение и идентификацию неполиомиелитных энтеровирусов из материала от больных осуществляли в соответствии с рекомендациями ВОЗ. Проведено генотипирование и филогенетический анализ энтеровирусов. Результаты. На трех территориях северо-запада России зарегистрированы групповые заболевания энтеровирусной экзантемой полости рта и конечностей. Показано, что в эпидемический процесс были вовлечены дети до 14 лет, преимущественно дети до 3 лет. Из 27 проб от больных на культурах клеток были выделены и идентифицированы с помощью специфических сывороток энтеровирусы Коксаки А16. В 16 пробах энтеровирусы Коксаки А16 были идентифицированы путем частичного секвенирования области генома VP1. Филогенетический анализ показал, что идентифицированные вирусы Коксаки А16 распределились по двум филогенетическим группам. Заключение. Установлено, что этиологическим фактором групповых заболеваний энтеровирусной экзантемой полости рта и конечностей на трех территориях северо-запада России были энтеровирусы Коксаки А16, ранее не выявлявшиеся в этом регионе. Полученные данные свидетельствуют о необходимости эпидемиологического и вирусологического надзора за энтеровирусной инфекцией в целях получения новой информации о циркуляции неполиомиелитных энтеровирусов среди населения и установления закономерностей развития эпидемического процесса при этой инфекции.

Цель. Генотипирование норовирусов, циркулировавших на территории Нижнего Новгорода в течение шести эпидсезонов (2006 - 2012 гг.), выявление доминирующих геновариантов и анализ их смены. Материалы и методы. Материалом для исследования служили образцы фекалий детей, госпитализированных в отделение кишечных инфекций одного из инфекционных стационаров Нижнего Новгорода. Норовирусы выявляли методом обратной транскрипции полимеразной цепной реакции. Генотипы и геноварианты норовирусов определяли путем анализа нуклеотидных последовательностей участков вирусного генома, кодирующих капсидный белок и РНК-зависимую РНК-полимеразу. Результаты. При обследовании 6589 детей с острой кишечной инфекцией в период с июля 2006 г. по июнь 2012 г. норовирусы обнаружены в 17,55% случаев. Для 114 изолятов норовирусов определены нуклеотидные последовательности участков генов капсидного белка и/или полимеразы. Генотипирование показало, что на территории Нижнего Новгорода циркулировали норовирусы восьми различных генотипов - GII.1, GII.2, GII.3, GII.4, GII.6, GII.7, GII.12, GII.13 при доминировании в течение всего периода наблюдения норовирусов GII.4. Установлена сходная с общемировой динамика смены эпидемических вариантов норовирусов генотипа GII.4, сопровождавшейся ростом частоты обнаружения норовирусов у детей, госпитализированных с острой кишечной инфекцией. Показана также кратковременная циркуляция весной 2008 г. норовируса субварианта GII.4 2006b-NN 2008 и распространение в эпидсезон 2009, 2010 гг. норовируса генотипа GII.12. Заключение. Полученные результаты свидетельствуют о необходимости мониторинга циркуляции норовирусов с целью раннего выявления новых вариантов вируса, которые могут обусловить рост заболеваемости норовирусной инфекцией.

Цель. Исследовать некоторые иммунологические показатели у детей с аллергическими заболеваниями в зависимости от веса тела и клинических проявлений аллергии. Материалы и методы. Проведен корреляционный анализ взаимосвязи показателей естественной резистентности (фагоцитоз, комплемент), уровня иммуноглобулинов и основных популяций лимфоцитов с весом тела у 214 детей 12 - 17 лет с разными аллергическими заболеваниями (ринит/ риноконъюнктивит, атопический дерматит, бронхиальная астма). По индексу массы тела (ИМТ) дети были разделены на группы: 73 (34%) ребенка с нормальным весом, 74 (35%) - с избыточным весом и 67 (31%) - с ожирением. Результаты. Анализ показал, что частота выявления детей с ожирением наиболее высока в возрасте 12 - 14 лет. С увеличением возраста число детей с ожирением снижается (ОШ - 9,0; 95% ДИ: 1,56 - 51,87; р=0,008 и ОШ - 0,27; 95% ДИ: 0,08 - 0,94; р=0,04, соответственно). Обнаружена взаимосвязь ИМТ с клиническими проявлениями аллергии. Из 166 больных аллергическими заболеваниями в сочетании с бронхиальной астмой у 62 (37%) обнаружен избыточный вес, у 57 (34%) - ожирение и у 47 (28%) -нормальный вес. В группе 48 детей с аллергией без астмы избыточный вес отмечен у 12 (25%), ожирение - у 10 (21%) и нормальный вес - у 26 (54%) больных. У детей с бронхиальной астмой почти в 3 раза чаще встречается избыточный вес и ожирение, чем у детей с аллергией без астмы. При сравнении показателей иммунного статуса у детей 3 групп различий обнаружить не удалось, кроме показателей уровня общего IgE и NK клеток. Уровень общего IgE был наиболее высокий у детей с ожирением (2,7 log), существенно отличался от такового у детей с избыточным (2,46 log,) и нормальным весом (2,37 log, r=0,32 р<0,05). Относительное содержание NK клеток в крови детей с ожирением было достоверно выше, чем у детей с нормальным и избыточным весом (r=0,41). Проведенный анализ значимых показателей коэффициентов корреляции выявил коррелятивные связи некоторых иммунологических показателей с ИМТ У детей с избыточным весом обнаружена отрицательная связь между уровнем комплемента и ИМТ (r=-0,61) и положительная связь с показателем фагоцитоза (r=0,58). Заключение. Ожирение у детей с аллергическими заболеваниями ассоциировано с увеличением сопряженности иммунологических показателей, проявляющейся увеличением числа естественных киллеров (NK), показателей фагоцитоза, повышенного уровня общего IgE на фоне отрицательной взаимосвязи с основными популяциями лимфоцитов, что в целом влияет на утяжеление аллергопатологии в виде большей частоты выявления атопической бронхиальной астмы.

Цель. Исследование особенности изменений патогенетических хаpактеpистик инфекции, вызванной вирусом гепатита С (ВГС), у лиц, относящихся к pазным группам высокого риска перантерального инфицирования (ГВРПИ). Материалы и методы. Исследовали 3219 сывоpоток крови, полученные у лиц из пяти pазличных ГВРПИ и 1541 безвозмездных доноpов крови на наличие anti-HCV. Anti-HCV позитивные сыворотки были исследованы с помощью полимеpазной цепной pеакции для выявления РНК ВГС в качественном и количественном варианте. Результаты. С помощью молекуляpно-генетических методов ощеделили РНК вируса гепатита С (ВГС) и ее концешрацию в содеpжащих антитела к ВГС сывоpоток крови, полученных у лиц из пяти pазличных ГВРПИ и гpуппы безвозмездных доноpов, инфициpованных в прошлом ВГС. Установлено, что отличительными особенностями, хаpактеpизующими щоцесс естественной эволюции ВГС-инфекции у лиц из pазных ГВРПИ, являлись более низкая частота спонтанной элиминации вируса и более высокая частота хpонизации остpой инфекции, а также относительно более высокая вкусная нагрузка. Заключение. Выявленные закономерности указывают на более высокую степень эпидемиологической опасности лиц из ГВРПИ.

Цель. Проведение сравнительного протеомного масс-спектрометрического (MS) анализа на основе использования персональной базы данных белковых масс-спектров V. cholerae и генетического VNTR-типирования штаммов возбудителя холеры. Материалы и методы. Штаммы V. cholerae О1 El Tor - 7; VV. cholerae не О1/не О139 - 2. Белковое профилирование и VNTR-генотипирование штаммов проводили соответственно на масс-спектрометре MALDI TOF-MS Autoflex «Bruker Daltonics» и ГИС «Холера-штаммы-VNTR». Результаты. Установленная общность протеомного профиля эпидемических штаммов холерных вибрионов, выделенных в 2010 - 2012 гг. в г. Москва, позволила определить «индийское» происхождение токсигенного штамма, изолированного в г. Таганрог в 2011 г. Идентифицированы m/z белков, отличающие штаммы V. cholerae О1 от не О1/не О139. Протеомный анализ подтверждают результаты VNTR-генотипирования. Заключение. Используя коллекцию масс-спектров V. cholerae , возможно проводить изучение и типирование представителей V cholerae с определением их происхождения и филогенетического родства.

Анализируются основные научно-исследовательские работы, касающиеся белковых бактериальных токсинов наиболее распространенных бактерий, относящихся к роду Staphylococcus spp. и, в частности, наиболее патогенного для человека вида Staphylococcus aureus. Представлены структурные и биологические свойства белковых токсинов, получивших название пирогенных токсинов стафилококка (PTSAg), сведения, касающиеся генетической регуляции секреции и синтеза этих токсинов, и три основные регуляторные генетические системы (agr - accessory gene regulator, xpr - extracellular protein regulator, sar - staphylococcal accessory regulator), которые координируют синтез важнейших для вирулентности белковых токсинов и ферментов S. aureus.