Том 92, № 3 (2015)

Цель. Определение чувствительности штаммов V. cholerae О1 серогруппы биовара Эль Тор и О139 серогруппы к антибиотикам и выявление присутствия генов антибиотикорезистентности в их геноме. Материалы и методы. Исследования проведены на 75 штаммах V. cholerae О1 и О139 серогрупп. Чувствительность культур к антибиотикам определяли диско-диффузионным методом. Выделение ДНК осуществляли в присутствии 6М гуанидинтиоцианата. ПЦР проводили на многоканальном амплификаторе Терцик. Результаты. Сконструирована мультиплексная ПЦР, включающая пять пар праймеров для выявления генов резистентности к сульфаметоксазолу, стрептомицину В, тримето-приму вибрионов О1 и О139 серогрупп, наличия SXT элемента, разработана программа амплификации. С помощью созданной ПЦР установлено, что штаммы V. cholerae О1 биовара Эль Тор c множественной лекарственной устойчивостью были завезены в Россию в 1993 г. Именно в данных штаммах, относящихся к токсигенным геновариантам V. cholerae биовара Эль Тор, выявлено присутствие SXT элемента с генами устойчивости одновременно к четырем антибиотикам. Показано, что все штаммы Эль Тор вибрионов, завезенные в последующие годы, стабильно сохраняют SXT элемент, что указывает на его важную роль в биологии холерного вибриона. Выявлены штаммы О139 серогруппы с интактным SXT элементом и имеющим делецию в гене, кодирующим устойчивость к триметоприму. Заключение. Полученные сведения могут быть использованы для установления молекулярногенетических механизмов появления антибиотикорезистентных штаммов холерного вибриона, конструирования новых генодиагностических тест-систем и проведения паспортизации штаммов, хранящихся в Государственной коллекции патогенных бактерий.

Цель. Обоснование использования иммунохроматографического анализа для диагностики пневмококковой пневмонии. Материалы и методы. Изучена чувствительность и специфичность иммунохроматографического метода (тест-система Binax Now) для верификации пневмококковой пневмонии. Проведена апробация данного метода для этиологической расшифровки пневмоний у 260 пациентов, госпитализированных в инфекционный стационар. Результаты. Установлена высокая чувствительность (84,8%) и специфичность (90,5%) иммунохроматографического теста. Антиген Streptococcus pneumoniae в моче у больных с внебольничной пневмонией при использовании иммунохроматографического экспресс-теста определялся в 3,6 раза чаще, чем при бактериологическим исследовании назофарингеального мазка, и в 1,8 раза чаще, чем при бактериологическом исследовании мокроты. Заключение. Применение иммунохроматографического экспресстеста Binax NOW может быть рекомендовано для своевременной верификации пневмококковых пневмоний наряду с бактериологическим методом исследования.

Цель. Оценка противовирусного действия миРНК в составе наночастиц поликатионного соединения к мРНК белка vp16 (генUL48) вируса простого герпеса 2 типа (ВПГ-2) in vitro. Материалы и методы. Использованы: 50% водный раствор поиэтиле-нимина (BDH, Великобритания), хитозан, содержащий около 15% N-ацетилированных глюкозаминовых звеньев (Сонат, Россия), гидразин-гидрат и другие химические реактивы (Химмед, Россия); перевиваемая линия клеток Vero, штамм MS ВПГ-2. Клетки Vero культивировали в среде ДМЕМ с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки при 37°C в атмосфере с 5% СО2. Оценку жизнеспособности клеток проводили с помощью витального красителя Neutral Red и МТТ-теста. Праймеры и зонды для ПЦР-РВ были моделированы в компьютерной программе Vector NTI 8,0 в соответствии с последовательностями мРНК исследуемых генов (последовательности мРНК взяты в GenBank) и синтезированы в фирме Синтол (РФ). РТ ПЦР-тесты ставили с использованием стандартной процедуры. Синтез комплексов ПЕИ-ПГ-хитозан осуществляли по Кривцову Г.Г. и др. (2010). Результаты. Для изучения влияния киРНК на репликацию ВПГ-2 был осуществлен дизайн и синтез нуклеотидных последовательностей, обладающих интерферирующей активностью по отношению к этому вирусу. При одновременном добавлении к клеткам Vero ВПГ-2 и специфических киРНК в культуре клеток наблюдали значительное (на 4 lg) снижение урожая вируса. Был определен уровень экспрессии мРНК UL48 после воздействия различных вариантов киРНК. Показано, что наиболее выраженный вирусингибирующий эффект вызывал вариант S2 киРНК, нацеленный на центр РНК-мишени (уровень экспрессии исследуемого гена снижался на 0,5 lg). Заключение. Установлено, что киРНК в составе комплексов ПЕИ-ПГ-хитозан обладают in vitro выраженной подавляющей репликацию ВПГ-2 активностью. Полученные результаты могут быть использованы при создании новых терапевтических препаратов против герпесвирусов.

Цель. Изучение эпитопной специфичности синтетического дисахарида, повторяющегося звена S. pneumoniae серотипа 3, конъюгированного с бычьим сывороточным альбумином (БСА). Материалы и методы. Конъюгат синтетического дисахарида с БСА получали скваратным методом. Антигенную активность конъюгата исследовали методом конкурентного ИФА. Титр IgG к капсульному полисахариду S. pneumoniae серотипа 3 определяли в ИФА при использовании сывороток мышей, двукратно иммунизированных конъюгатом дисахарида, сорбированным на гидроксиде алюминия. Результаты. Конъюгат дисахарида, использованный в качестве покрывающего лунки антигена (4 мкг/лунка) в ИФА, характеризовался высокой степенью специфичности и взаимодействовал только с IgG к S. pneumoniae серотипа 3 в антимикробных сыворотках животных, не вступая в реакцию с антителами (АТ) к другим серотипам пневмококка (6B, 10A, 19A, 19F, 23F). В реакции конкурентного ИФА выявлено, что дисахарид, конъюгированный с БСА, ингибировал связывание АТ к дисахариду на 78,8%, бактериальный капсульный полисахарид на 56,9%, БСА не ингибировал активность сыворотки. При исследовании сывороток мышей, иммунизированных конъюгатом дисахарида S. pneumoniae серотипа 3 в ИФА, где в качестве сорбированного на планшете антигена использовали капсульный полисахарид, установлено присутствие IgG к капсульному полисахариду в титре 1:1600. Заключение. Дисахарид, являющийся единичным повторяющимся звеном S. pneumoniae серотипа 3, содержит ключевой эпитоп капсульного полисахарида. Синтетический дисахарид может быть использован как компонент мультивалентных конъюгированных пневмококковых вакцин и для разработки диагностических тест-систем.

Aim. Enhancement of tularemia laboratory diagnostics by F. tularensis DNA determination in blood sera of patients using real time polymerase chain reaction (RT-PCR). Materials and methods. 39 blood sera of patients obtained during transmissive epidemic outbreak of tularemia in Khanty-Mansiysk in 2013 were studied in agglutination reaction, passive hemagglutination, RT-PCR. Specific primers and fluorescent probes were used: ISFTu2F/R+ISFTu2P, Tul4GF/R+tul4-PR2. Results. Advantages of using RT-PCR for early diagnostics of tularemia, when specific antibodies are not detected using traditional immunologic methods, were established. Use of a combination of primers and ISFTu2F/R+ISFTu2P probe allowed to detect F. tularensis DNA in 100% of sera, whereas Tul4GF/R+tul4-PR2 combination - 92% ofsera. The data were obtained when DNA was isolated from sera using «Proba Rapid» express method. Clinical-epidemiologic diagnosis oftularemia was confirmed by both immune-serologic and RT-PCR methods when sera were studied 3 - 4 weeks after the onset of the disease. Conclusion. RT-PCR with ISFTu2F/R primers and fluorescent probe ISFTu2P, having high sensitivity and specificity, allows to determine F. tularensis DNA in blood sera of patients at both the early stage and 3 - 4 weeks after the onset of the disease.

Цель. Рассмотреть особенности природных, природно-антропоургических и антропо-ургических очагов геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС) в различных, преимущественно лесных, биотопах типичной степи в связи с отличиями неспецифической профилактикой ГЛПС в очагах разных типов. Материалы и методы. Проанализированы эпизоотологические и эпидемиологические данные с 1998 по 2012 гг., собранные в очагах ГЛПС во всех типах очагов в Саратовском районе Саратовской области (типичная степь). Отработано 14 606 ловушко-ночей и добыто 2669 мелких млекопитающих. Для сравнительного анализа различий трех типов очагов использовались наиболее значимые популяционно-экологические и эколого-эпизоотологические методы и критерии. Результаты. На основе анализа многолетних данных показаны сезонные отличия очагов ГЛПС разных типов по 10 популяционно-экологическим и эколого-эпизоотологическим критериям. Заключение. Полученные результаты позволяют констатировать, что современные средства и методы неспецифической профилактики ГЛПС и других зоонозов в очагах разных типов существенно отличаются. Это позволяет наиболее рационально использовать материальные и финансовые ресурсы.

Цель. Изучение эффективности превентивной вакцинопрофилактики ветряной оспы в воинских коллективах. Материалы и методы. В очаге ветряной оспы 200 военнослужащих нового пополнения по призыву были однократно вакцинированы против ветряной оспы; 97 военнослужащим по призыву нового пополнения (группа сравнения) вакцинация не проводилась. Изучались эпидемиологическая и иммунологическая эффективность проведения превентивной вакцинопрофилактики в очаге ветряной оспы. Результаты. В группе из 200 солдат, находящихся в очаге инфекции и однократно вакцинированных против ветряной оспы, были зарегистрированы лишь 2 случая этого заболевания (10%о). В группе сравнения, состоящей из 97 невакцинированных военнослужащих, заболевание ветряной оспой было зарегистрировано у 7 человек (72%о). Эпидемиологическая эффективность превентивной вакцинопрофилактики ветряной оспы составила 86%. Иммунологическая эффективность вакцинации через 2 - 3 недели после прививки была равна 42%, а через два месяца - 44%. У 10% привитых в месте введения препарата отмечали местные реакции в виде гиперемии (до 1,5 см) и отека; у 1,7% - наблюдали общую реакцию в виде повышения температуры до 37,8°С. Поствакцинальных осложнений в группе привитых выявлено не было. Заключение. Превентивная вакцинация военнослужащих позволяет минимизировать распространение ветряной оспы, но при этом не может служить средством полной элиминации инфекции в воинских коллективах.

Цель. Изучение антимикробной активности полимерного соединения - полиазоли-диаммония, модифицированного гидрат-ионами йода. Материалы и методы. Изучена антимикробная активность полиазолидинаммония, модифицированного гидрат-ионами йода, в отношении референс-штаммов и клинических изолятов грамположительных и грамотрицательных бактерий, микроскопических грибов, а также РНК-содержащих вирусов. Результаты. Установлена высокая антибактериальная активность исследуемого соединения, особенно в отношении грамположительных бактерий. Более высокая концентрация препарата (125 - 250 мкг/мл) характеризовалась противогрибковым действием. Отмечена высокая чувствительность к полимеру вируса трансмиссивного гастроэнтерита свиней. Заключение. По результатам исследований полимерное соединение является перспективным антисептическим и этиотропным средством для борьбы с возбудителями инфекционных заболеваний.

Вакцинация является наиболее эффективным методом борьбы с распространением целого ряда инфекций как вирусной, так и бактериальной природы. Многие бактериальные патогены (Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis и Haemophilus influenzae) несут на поверхности полисахаридную капсулу, которая является одним из элементов защиты от иммунной системы организма-хозяина. В то же время, вакцинация экзополисахаридами бактерий (ЭПС) обеспечивает нейтрализацию инфекции. Эффективность такой вакцинопрофилактики ограничена по возрасту вакцинируемого, по напряженности и длительности иммунитета, по развитию вторичного иммунного ответа. Достаточно давно известно, что конъюгация ЭПС с белковыми антигенами обеспечивает активацию Т-клеточного иммунитета к ЭПС и формирование вторичного иммунного ответа. Однако детальное изучение механизма модуляции иммунитета белковым партнером в составе гликоконъюгата не проводилось. Традиционно считалось, что активация Т-лимфоцитов происходит исключительно за счет презентации пептидов, продуктов процессинга белкового компонента конъюгата. В последнее время информация, накопленная в области презентации природных углеводных, гликолипидных и гликопептидных антигенов Т-клеткам, вызвала интерес к изучению механизмов активации клеточного иммунитета конъюгированными вакцинами. Прогресс в данной области, а также развитие новых химических и биохимических, в том числе комбинаторных технологий синтеза и изучения этих молекул, открывает новые возможности для детального понимания механизма действия конъюгированных вакцин и для создания гликоконъюгатов с повышенной эффективностью протективного действия.

В системе мероприятий по профилактике чумы важное место отводится вакцинации контингентов населения, относящихся к группам риска заражения. В создании нового поколения вакцин используется весь арсенал накопленных знаний о структуре, свойствах, молекулярной природе, генетической детерминации, путях синтеза, регуляции и механизмах взаимодействия с макроорганизмом факторов патогенности и иммуногенности возбудителя инфекционного заболевания. Современные технологии - геномика, про-теомика, обратная вакцинология способствуют выявлению протективных антигенов и помогают определить рациональный дизайн вакцин. В обзоре представлены основные тенденции в разработке рекомбинантных живых и химических вакцин для специфической профилактики чумы. Выделены конструктивные подходы, позволяющие получать высокоэффективные и безопасные препараты.