Том 91, № 6 (2014)

Цель. Анализ встречаемости эффекторов секреторной системы третьего типа (TTSS) у клинических штаммов P. aeruginosa. Материалы и методы. Изучены внутрибольничные (n=164) и внебольничные (n=30) штаммы P. aeruginosa. Детекцию генов exoS и exoU осуществляли методом ПЦР на термоциклере DNA Engine Dyad Thermal Cycler («Bio-Rad», США). Продуценты металло-бета-лактамаз (МБЛ) выявляли по присутствию blavm^-гена. Результаты. Скрининг внутри- и внебольничных штаммов на наличие генов, кодирующих ExoS и ExoU, показал, что в геноме клинических изолятов exoS детектируются в 59,8%, а exoU - в 31,1% случаев. При этом штаммы с генотипом exoS -/exoU+ преобладали в ОРИТ (ф=0,466; p=0,0000). Достоверной связи между присутствием соответствующих эффекторов и материалом выделения штаммов не выявлено. Ген exoU чаще обнаруживали в составе генома продуцентов МБЛ (ф=0,784; p=0,0004). Заключение. Сильная связь между exoU и bla VIM-2 может объясняться клональным распространением P. aeruginosa ST235 VIM-2, циркуляция которых отмечена на всей территории России. Как правило, ExoU продуцируют высоковирулентные полиантибиотикорезистентные госпитальные изоляты, обусловливающие неблагоприятные исходы синегнойной инфекции.

Цель. Изучение основных параметров поверхности фрезерованных полиакриловых материалов с помощью атомно-силовой микроскопии и первичной микробной адгезии бактерий пародонтопатогенной группы и грибов Candida a1bicans с учетом способа полировки образцов. Материалы и методы. Исследованы образцы: обработанные фрезой без полировки (контроль); полированные в эргобоксе; полированные в условиях зуботехнической лаборатории; полированные резиновой щеткой в кабинете врача-стоматолога. Для постановки эксперимента моделирования первичной адгезии микробов к образцам материалов использовали штаммы микробов, относящихся к пародонтопатогенным видам (клинические изоляты), которые были выделенны из пародонтальных карманов больных пародонтитом: Porphyromonas gingiva1is, Fusobacterium nuc1eatum, Streptococcus sanguis, грибы C. a1bicans. Результаты. Показано, что наиболее высокой степенью адгезии к полимеру после фрезерования обладает S. sanguis, умеренной - P. gingiva1is, C. a1bicans, низкой - F. nuc1eatum. Существенное снижение адгезии наблюдается при полировке в условиях зуботехнической лаборатории или в эргобоксе, менее значимое - при полировке в стоматологическом кабинете. Заключение. Полученные данные позволяют сделать заключение, что образцы из полимерных материалов для изготовления базисов протезов обладают различной степенью выраженности микробной адгезии представителей паро-донтопатогенной микрофлоры и грибов C. a1bicans, которая зависит от способа полировки, что соответственно определяет различия колонизационной резистентности к формированию микробной биопленки при использовании полимера в клинических условиях.

Цель. Разработка и испытание методики ПЦР в режиме реального времени для выявления ДНК Neisseria meningitidis серогрупп А, B, C и W. Материалы и методы. В исследовании были использованы референсные штаммы и 187 образцов спинномозговой жидкости (СМЖ) от больных менингококковым менингитом. Мультиплексная ПЦР проводилась на приборе с пятью каналами флуоресцентной детекции. Результаты. Проведен анализ специфических серогрупповых локусов генома и дизайн олигонуклеотидов для детекции ДНК всех капсульных менингококков и 4 серогрупп по отдельности. Оптимизированы условия ПЦР; на референсных штаммах показана специфичность и оценена аналитическая чувствительность методики. При исследовании клинических образцов СМЖ обнаружена ДНК следующих серогрупп: А - в 103 образцах (55%), В - в 45 (24%), С - в 30 (16%), W - в 5 (3%). В 4 образцах найдена только ДНК менингококково-го капсульного гена ctrA; предположительно они содержали ДНК других серогрупп. Проведено мультилокусное секвенирование-типирование и выявление антигенных детерминант генов PorA и FetA для 27 образцов ДНК менингококков группы А, а также для ДНК 5 менингококков группы W и 4 негруппируемых. Заключение. Предлагаемая методика позволит проводить серогруппирование не менее 95% штаммов или образцов ДНК, выделенных из СМЖ больных менингококковой инфекцией. В сочетании с другими рекомендованными некультуральными методами генотипирования она должна быть полезной для комплексной характеристики патогенных менингококков.

Цель. Изучение влияния стафилококковой вакцины на функциональную активность антигенпрезентирующих клеток. Материалы и методы. Мышам вводили по 500 мкг вну-трибрюшинно вакцину «Стафиловак». Через различные интервалы времени у животных определяли фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов по отношению к Staphylococcus aureus 1991. Рассчитывали фагоцитарный индекс (ФИ) и фагоцитарное число (ФЧ) в мазках, сделанных после 30 и 60 мин инкубации. Дендритные клетки (ДК) получали из костномозговых предшественников при культивировании с 20 нг/мл GM-CSF и 20 нг/мл IL-4 (BioSource International Inc., Бельгия). На 6 сутки инкубации к незрелым клеткам добавляли стафилококковую вакцину (50 мкг/мл) для индукции созревания ДК. Оценку фенотипа ДК осуществляли методом проточной цитометрии с применением моноклональных антител против клеточных антигенов (Beckman Culter, США). Результаты. ФИ при 30 и 60 мин инкубации повышался в 0,12 - 1,4 раза и 1,11 - 1,52 раза соответственно по сравнению с контролем. ФЧ при 30 мин инкубации клеток с микробной суспензией возрастало с 8,6 до 11,4% против 5,9% в контроле, при 60 мин инкубации - с 7.7 до 8,1% против 5,1% в контроле. В культуре ДК при инкубации их с вакциной увеличивалось содержание клеток с экспрессией маркеров межклеточной адгезии CD38, маркера антигенного представления MHCII и маркера терминальной дифференцировки ДК CD83. Также отмечена экспрессия СD34 и CD14, что может свидетельствовать о частичной направленности дифференцировки клеток в сторону макрофагов. Заключение. Вакцина «Стафиловак» при внутрибрюшинном введении мышам оказывала активирующее влияние на функциональную активность антигенпрезентирующих клеток и перитонеальных макрофагов.

Цель. Исследование действия гидроксида алюминия на молекулярно-клеточные механизмы активации врожденного иммунитета и его адъювантное действие на иммуногенность природных бактериальных и синтетических антигенов пневмококка. Материалы и методы. Определяли поверхностные маркеры дендритных клеток (ДК), мононуклеарных лейкоцитов (МЛ) и уровень цитокинов методом проточной цитометрии; титр IgG - методом ИФА. Протективную активность оценивали в опытах активной защиты мышей от заражения вирулентными штаммами пневмококка. Результаты. Гидроксид алюминия повышал содержание МЛ селезенки мышей, экспрессирующих TLR2 и TLR4. Прибавление его в культуру незрелых ДК индуцировало появление популяции клеток с маркерами зрелых ДК - CD83, CD80, CD86, хотя уровень недифференцированных клеток (CD34) и клеток с молекулами адгезии (CD11^ CD38) не изменялся. ДК продуцировали в среду культивирования IL-ф, IL-5, IL-10, IFNy. Увеличение продукции цитокинов происходило через 2 ч после однократного введения мышам и сохранялось в течение срока наблюдения (24 ч). Выработка Th1 (IFNy, TNFa) и Th2 (IL-5, IL-10, GM-CSF) цитокинов свидетельствовала о поляризации иммунного ответа по Th1/ Th2 типу После двукратного введения гидроксида алюминия мышам повышалось число МЛ с маркерами CD19+, CD5+, NK1.1+, CD25+, MHCII+ при снижении CD3+, CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов. Активация адаптивного иммунитета характеризовалась высоким титром IgG к капсульному полисахариду пневмококка и защитой 90 - 100% мышей от заражения летальными дозами штаммов S. pneumoniae, выявлена при двукратной иммунизации мышей конъюгатами синтетических олигосахаридов пневмококка с БСА, сорбированными на гидрооксиде алюминия, тогда как природные бактериальные антигены обеспечивали 90 - 100% выживаемость животных при иммунизации без адъюванта. Заключение. Представлены данные о действии гидроксида алюминия на ключевые эффекторы врожденного иммунитета: ДК, NK, TLRs и продукцию цитокинов. Показано, что этот адъювант целесообразно вводить в ассоциации с конъюгатами синтетических олигосахаридов пневмококка с белком-носителем.

Цель. Определение содержания различных цитокинов в копрофильтратах людей с бактериологически подтвержденным дисбактериозом кишечника. Материалы и методы. Изучен качественный и количественный состав микробиоценоза толстой кишки, определено содержание у-ИФН, провоспалительных (ИЛ-2, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-ф) и противовоспалительных (ИЛ-4, ИЛ-10) цитокинов методом ИФА в копрофильтратах 139 людей 18 - 60 лет. Все показатели сопоставлены с цитокиновым индексом (ЦИ). Результаты. Установлено высокое содержание ИЛ-2, ИЛ-4 и ИЛ-10 при нормальных значениях ИЛ-ф, ИЛ-6, ИЛ-8. У людей с разной величиной ЦИ выявлено сравнимое содержание бифидобактерий, лактобацилл и эшерихий; у людей с ЦИ выше 1 у.е. и выше 10 у.е. на фоне пропорционально усиливающейся индукции у-ИФН наблюдается увеличение численности эшерихий со сниженной ферментативной активностью и частое обнаружение условно патогенных энтеробактерий, стафилококков и грибов рода Candida. Заключение. Наличие условно патогенной микрофлоры при низком содержании y-ИНФ с ЦИ менее 1 у.е. можно расценивать как дисбиотическую реакцию, а наличие условно патогенной микрофлоры на фоне высокого содержания y-ИНФ с ЦИ выше 10 у.е. - как развитие системного воспаления вследствие транслокации дисбиозной микрофлоры в кровоток.

Цель. Изучение апоптогенной активности микробов-ассоциантов при Эпштейна-Барр вирусной инфекции (ЭБВИ) на модели перитонеальных макрофагов мышей in vitro. Материалы и методы. Оценку апоптоза, индуцированного бактериями, выделенными от больных ЭБВИ, осуществляли по характерным морфологическим изменениям макрофагов в мазках, окрашенных по Май-Грюнвальду с докрашиванием по Романовскому-Гимзе. Результаты. Установлено, что апоптогенной активностью обладали все микробы-ассоцианты ЭБВИ, однако самый высокий патогенный потенциал был отмечен у Streptococcus pyogenes. Заключение. Наличие апоптогенной активности бактериальной микрофлоры, сопутствующей ЭБВИ, в отношении клеток иммунной системы может служить способом их выживания и явиться патогенетической основой для длительной персистенции в организме.

Цель. Сравнить частоту выделения полиовирусов у детей, проживающих в учреждениях закрытого типа (Домах ребенка) до и после изменения схемы вакцинации против полиомиелита. Материалы и методы. Исследованы пробы фекалий от 207 детей из 5 Домов ребенка в период иммунизации оральной полиомиелитной вакциной (ОПВ) и от 259 детей из 4 Домов ребенка в период вакцинации инактивированной полиомиелитной вакциной (ИПВ). Выделение и идентификацию полиовирусов проводили в соответствии с рекомендациями ВОЗ. Результаты. В Домах ребенка, где дети были привиты оральной вакциной, был изолирован 21 полиовирус. В Домах ребенка, где использовали только инактивированную вакцину, было выделено 10 полиовирусов, наличие полиовирусов в этих учреждениях связано с их заносом извне. Показано, что процент обнаружения по-лиовирусов у детей, привитых ОПВ, составил 16,9+3,4% и был достоверно выше, чем у детей, которых вакцинировали ИПВ (6,1 + 1,9%). Полиовирусы, изолированные от детей, привитых ОПВ, были отнесены к серотипам 1, 2 и 3 в 19,0; 14,3 и 66,7% случаев соответственно. Полиовирусы, обнаруженные у детей, привитых ИПВ, принадлежали к сероти-пам 1, 2 и 3 в 30, 40 и 30% случаев соответственно. Все выделенные полиовирусы оказались вакцинными штаммами Сэбина. Заключение. В целях предотвращения возможности заноса, трансмиссии и циркуляции полиовирусов в Домах ребенка необходимо осуществление строгих профилактических мероприятий. Совершенствование надзора за детьми из учреждений закрытого типа обеспечит поддержание статуса Российской Федерации как страны, свободной от полиомиелита.

Цель. Оценка иммунного ответа у мышей на различные L-аспарагиназы и определение их перекрестной иммуногенности. Материалы и методы. Исследования проводили на мышах линии C 57Bl 6j. Исследовали иммуногенность L-аспарагиназ: Escherichia coli II типа (рекомбинантная) (Medak, Германия) (ЕсА); Erwinia carotovora II типа (ErA); Yersinia pseudotuberculosis II типа (YpA); Rhodospirillum rubrum I типа (RrA); Wollinella succinogenes II типа (WsA). Иммунный ответ на введенные антигены определяли в ИФА. Результаты. Наиболее иммуногенной оказалась L-аспарагиназа Y pseudotuberculosis, наименее иммуногенной - E. coli. L-аспарагиназы E. carotovora, R. rubrum, W. succinogenes проявляли промежуточную иммуногенность. По результаам определения перекрестной иммуногенности было установлено, что сыворотки крови мышей, получивших YpA, давали перекрестную реакцию со всеми остальными препаратами L-аспарагиназ, кроме E. carotovora. При иммунизцации L-аспарагиназой E. coli образовавшиеся антитела связывались также с препаратом E. carotovora. Сыворотки от мышей, иммунизированных L-аспарагиназами W. succinogenes, E. carotovora и R. rubrum, давали перекрестную реакцию только с EcA, а с другими препаратами не реагировали. Заключение. Определена перекрестная иммуногенность исследованных L-аспарагиназ. Предложена очередность введения изученных препаратов, которая позволит минимизировать нейтрализацию L-аспарагиназ перекрестно-реагирующими антителами.

Цель. Сравнительная оценка влияния полиоксидония и беталейкина на иммуноген-ную и протективную активность живой чумной вакцины в модельных опытах на животных. Материалы и методы. Использованы чумная вакцина EV, полиоксидоний, беталейкин, эритроцитарный антигенный диагностикум для определения F1 антител и разработанные авторами иммунореагенты для выявления в адгезивном тесте лимфоцитов с рецепторами к F1 (ЛфР). Опыты выполнены на 12 кроликах и 169 морских свинках. Результаты. Иммуномодуляция ускорила появление и исчезновение ЛфР (ранняя фаза) и обеспечила более быстрое и интенсивное образование антител (эффекторная фаза). Активация беталейкином выражена больше, чем полиоксидонием. Чем быстрее и интенсивнее развивалась ранняя фаза, тем эффективнее был антительный ответ на вакцину. Иммуномодуляция в опыте на морских свинках существенно повысила протективную активность вакцины. Заключение. Применение иммуномодуляторов повысило иммуно-генную (как в ранней, так и в эффекторной фазе антигенспецифического ответа) и про-тективную активность вакцины EV. Выявлена связь между ускорением первой фазы анти-генспецифического ответа и общей интенсивностью эффекторной фазы иммунного ответа на вакцину ЕУ

Цель. Использование комплекса методов для этиологической расшифровки острой респираторной инфекции. Материалы и методы. От 35 пациентов с ОРЗ были получены клинические образцы сыворотки крови, смывов из носоглотки и образцы мокроты. Для культивирования M. pneumoniae использовали среду «Difco PPLO Broth». В исследованиях применяли методы РАГА, РИФ, ПЦР, ИФА. Результаты. Результаты исследования показали, что антигены М. рneumoniae в пробах сыворотки крови были обнаружены в РАГА у 32 пациентов, а специфические антитела классов G и M - в 21 и 18 случаях соответственно. Одновременное обнаружение IgG и IgM зарегистрировано у 14 больных. ДНК клеток М. pneumoniae была обнаружена в 10 пробах сыворотки крови из 20. Из сыворотки крови 8 больных (4 с пневмонией, 4 с ОРЗ) были выделены циркулирующие иммунные комплексы и методом прямой РИФ в них были обнаружены антигены М. pneumoniae. Исследование мокроты и мазков из носоглотки в РИФ показало, что из 35 образцов в 29 пробах были обнаружены антигены M.pneumoniae. В 12 образцах мазков из 15 методом ПЦР была обнаружена ДНК M. pneumoniae. В десяти случаях совпали результаты выявления как антигенов в РИФ, так и ДНК в ПЦР. Результаты анализа всего клинического материала показали, что у 33 пациентов из 35 положительные результаты совпадали в двух или трех, а в некоторых случаях и в четырех использованных методах лабораторного исследования. Заключение. Использование комплекса диагностических тестов значительно повышает достоверность результатов исследований, а определение специфических антител дает возможность определить сроки заболевания.