Том 92, № 6 (2015)

Цель. Изучить спектр резистентности к антибиотикам и его изменчивость у Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa и Вurkholderia cepacia complex ^сс), персистирующих в легких больных МВ. Материалы и методы. Исследовали 312 штаммов S. aureus, 213 штаммов P аeruginosa, 186 штаммов Bcc. Мониторинг антибиотикочувствительности проводили у штаммов, выделенных от 30 больных с хронической S. aureus инфекцией, от 22 больных с хронической Всс инфекцией и от 21 больных с хронической синегнойной инфекцией. Интервал мониторинга составил от 14 дней до 5 лет 7 месяцев. Результаты. Исследование штаммов S. aureus, P aeruginosa и Всс показало, что 35 и 33,3% случаев стафилококковой инфекции, 37 и 46% синегнойной инфекции у детей и взрослых соответственно, 100% Всс инфекций были обусловлены мультирезистентными клонами. Исследование генотипически идентичных штаммов, выделенных от одного больного на разных этапах, показало изменение антибиотикочувствительности в результате персистенции. Заключение. Персистентная инфекция легких у больных МВ обусловлена меняющимися клонами с различной антибиотикочувствительностью или длительной циркуляцией одного клона с высокой степенью фенотипической и генотипической изменчивости, которые определяют чередование высева чувствительных и резистентных штаммов от одного больного при мониторинге. Это подтверждает необходимость исследования антибиотикочувствительности штаммов для назначения антибактериальной терапии.

Цель. Выявление бактерицидного действия импульсно-периодического коронного разряда (ИПКР) на клетки и биопленки Escherichia rali М17. Материалы и методы. Создано газоразрядное устройство на основе ИПКР в воздухе с параметрами питания: амплитудным значением напряжения 30 - 60 кВ, частотой следования импульсов 250 - 400 кГц. Ультраструктурные изменения в клетках и биопленках Exoli M17, подвергнутых воздействию ИПКР, генерируемого в воздухе, исследовали различными методами трансмиссионной электронной микроскопии. Результаты. Выявлены нарушения целостности поверхностных и глубинных структур биопленок, а также изменения морфологических свойств клеток Exoli M17, характерные для сублетального теплового воздействия. Деструктивные изменения бактериальных клеток проявлялись в образовании фокальных нарушений цитоплазматической мембраны, расширении периплазматического пространства, образовании характерных для теплового воздействия глобулярных структур и разрушении цитоплазмы. Заключение. Показан бактерицидный эффект ИПКР на клетки E. rati M17 в составе биопленок. Впервые на электронно-микроскопическом уровне выявлены деструктивные морфологические изменения в клетках и биопленках Exoli M17 после воздействия ИПКР.

Цель. Создание классификационной модели сероваров Leptospira spp. с помощью программного обеспечения ClinProTools 3.0 и оценка использования MALDI-TOF MS в качестве метода контроля качества референсных штаммов лептоспир. Материалы и методы. В исследовании использовали десять референсных штаммов Leptospira spp. согласно реакции микроскопической агглютинации из коллекции НИИЭМ им. Пастера. Все штаммы культивировали в течение 10 дней в среде Терских при 28°С. Экстракты клеток были получены этанол/муравьино-кислотным методом. Раствор а-циано-4-гидро-ксикоричной кислоты использовали в качестве матрицы. Масс-спектры были получены на Microflex масс-спектрометре (Bruker Daltonics, Германия). Внешняя валидация тестмодели была проведена с помощью новых спектров каждого референс-штамма при их повторном пересеве. Результаты. Значения кросс-валидации и подтверждающей способности оптимальной модели, построенной на генетическом алгоритме, составили 99,14 и 100% соответственно. Эта модель содержала 11 биомаркерных пиков ( m/z 2959, 3447, 3548,3764, 3895, 5221,5917,6173,6701,7013, 8364) для классификации сероваров. Результаты внешней валидации показали 100% правильную классификацию в классах сероваров в Sejroe, Ballum, Tarassovi, Copenhageni, Mozdoc, Grippotyphosa и Patoc, что указывает на высокую прогностическую способность модели в этих классах. Однако данные верификационной матрицы показали, что 50% из спектров от сероваров Canicola и Pomona были классифицированы как класс Patoc, что, возможно, связано с перекрестной серологической реактивностью L.biflexa серовара Patoc с патогенными лептоспирами. Заключение. Метод MALDI-TOF масс-спектрометрии в сочетании с построением и использованием классификационной модели может быть полезным инструментом для внутрилабораторного контроля пересева лептоспир.

Цель. Мониторинг поствакцинальных осложнений у детей, привитых паротитной вакциной. Материалы и методы. В течение 3 лет осуществлено наблюдение за 198 945 детьми, иммунизированными 16 сериями паротитной вакцины со штаммом Ленинград-3 (Л-3). У детей, у которых в течение 42 дней после вакцинации регистрировались неблагоприятные явления, были собраны парные образцы сывороток и слюны. В сыворотке крови определяли титр специфических IgM и IgG. Проведен анализ нуклеотидных последовательностей генов F, SH и NH РНК вируса паротита из образцов крови или слюны. Результаты. Интенсивный показатель вакцин-ассоциированного асептического менингита в условиях наблюдения составил 0 на 100 000 привитых. Частота возникновения поствакцинального паротита составила 0,06% от числа вакцинированных - было зарегистрировано и лабораторно подтверждено 18 случаев вакцин-ассоциированного паротита. Выявлена значительная разница в специфической активности трех серий вакцины, связанных со случаями развития паротита, относительно таковой в 13 сериях вакцины, после введения которых развитие паротита не было зарегистрировано. Заключение. Проведенное исследование подтвердило низкую нейровирулентность паротитной вакцины со штаммом вируса паротита Л-3, а также низкую степень ее реактогенности. Одной из причин развития поствакцинальных осложнений у части привитых детей может быть относительно высокая прививочная доза применяемой вакцины.

Цель. Исследование влияния осмотического и оксидативного стресса на выживаемость и изменение фенотипических и генетических свойств штаммов геновариантов V. cholerae биовара Эль Тор. Материалы и методы. В работе было использовано 22 штамма V. cholerae биовара Эль Тор. Фенотипические свойства штаммов изучали на среде LB с добавлением соответствующих ингредиентов. Поверхностные структуры клеток исследовали с помощью сканирующего зондового микроскопа «Solver P47-PRO». ПЦР проводили с использованием специфических праймеров на амплификаторе «Терцик». Результаты. Показано, что через 60 мин инкубации в 3 М растворе NaCl и через 6 мин нахождения в 20 мМ растворе перекиси водорода количество выживших клеток геновариантов было соответственно в 3,0 - 25,0 раз и 4,3 - 7,6 раза больше, чем у типичных штаммов. Один из механизмов повышенной устойчивости геновариантов к высоким концентрациям соли связан с продукцией на поверхности клеток дополнительного экзополисахаридного слоя в более ранние сроки, чем у типичных штаммов. Осмотический стресс вызывает обратимое снижение подвижности в штаммах геновариантов V cholerae биовара Эль Тор. Выявлено, что осмотический и оксидативный стресс приводит к утрате ряда мобильных генетических элементов в штаммах геновариантов. Заключение. Геноварианты V cholerae биовара Эль Тор, вызвавшие вспышки холеры в России в 1993 - 2001 гг., в отличие от типичных штаммов, изолированных в 1970 - 1990 гг., более устойчивы к действию осмотического и оксидативного стресса, что, возможно, способствует их лучшей выживаемости как во внешней среде, так и в макроорганизме.

Цель. Оценка роли полиморфизмов генов белков сурфактанта в восприимчивости и тяжести течения гриппозной инфекции у представителей московской популяции. Материалы и методы. В исследование включены 320 больных гриппом, инфицированных различными штаммами вируса гриппа, и 115 здоровых лиц (контрольная группа). Генотипирование образцов ДНК человека для определения полиморфизмов rs1965708 и rs1059046 гена SFTPA2, rs1130866 гена SFTPB проведено с помощью модифицированного метода «примыкающих проб». Результаты. Большинство лиц контрольной группы и больных гриппом являются носителями аллелей и генотипов rs1965708 и rs1059046 гена SFTPA2, rs1130866 гена SFTPB, которые по данным научной литературы показали ассоциацию с тяжелым течением гриппа A(H1N1)pdm09 и другими воспалительными заболеваниями респираторного тракта. В целом, у больных гриппом по сравнению с лицами группы контроля не выявлено достоверных различий в частоте выявления неблагоприятных генотипов СС rs1965708, АА rs1059046 гена SFTPA2 и СС rs1130866 гена SFTPB, что свидетельствует о высокой (от 19 до 51%) распространенности этих генотипов в исследуемой популяции. Аллель С и генотип СС rs1965708 гена SFTPA2, аллель А и генотип АА rs1059046 гена SFTPA2, аллель С и генотип СС rs1130866 гена SFTPB не показали ассоциацию с тяжелым течением гриппа A(H1N1)pdm09. У большинства (88%) больных тяжелой формой гриппа A(H1N1)pdm09 регистрировалась сопутствующая патология: заболевания сердечно-сосудистой (44%), эндокринной (36%) и дыхательной (12%) систем. Заключение. Поскольку у большинства умерших пациентов от тяжелого течения гриппа A(H1N1)pdm09 были выявлены заболевания сердечно-сосудистой, дыхательной и эндокринной систем, а связи неблагоприятного исхода заболевания с исследуемыми генетическими маркерами не выявлено, в изучаемой когорте доминирующим фактором риска развития тяжелого течения и летального исхода при гриппе А(ШШ) pdm09 явилась сопутствующая патология.

Цель. Выявление и идентификация РНК вируса венесуэльского энцефаломиелита лошадей (ВЭЛ) в биологических пробах методами обратной транскрипции-полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР) и ОТ-ПЦР в реальном времени (ОТ-ПЦР-РВ). Материалы и методы. Исследованы вирусы ВЭЛ, Синдбис, Западного Нила, японского и клещевого энцефалита. В экспериментах использовали культуру клеток куриных фибробластов, беспородных мышей и крыс, яванских макаков. Определение биологической активности использованных в экспериментах рабочих культур возбудителей проводили методом негативных колоний на монослойной культуре клеток под агаровым покрытием и с помощью внутримозгового инфицирования мышей. При проведении экспериментов по выявлению РНК вируса ВЭЛ методами ОТ-ПЦР и ОТ-ПЦР-РВ в биологических пробах использовали разработанные в 48 Центральном НИИ и Институте аналитического приборостроения наборы реагентов. Результаты. Выявлен вирус ВЭЛ в биологических пробах различными методами. Данные ОТ-ПЦР и ОТ-ПЦР-РВ согласуются с результатами выявления вируса в пробах с использованием чувствительных животных. Заключение. Использование методов молекулярной диагностики для выявления в биологических пробах возбудителя опасного инфекционного заболевания имеет важное значение для обеспечения биологической безопасности РФ.

Цель. Изучение биологических свойств сальмонелл, выделенных из клинического материала и из воды р. Дон. Материалы и методы. В работе использованы штаммы сальмонелл разных сероваров. Биохимические характеристики изучали общепринятыми методами, антигенные свойства оценивали в реакциях агглютинации, вирулентность определяли по Dlm для лабораторных животных, антибиотикочувствительность проверяли диско-диффузионным методом. Результаты. Показано наличие факторов патогенности у выделенных штаммов: гемолитическая активность - в 64 и 36,8% случаев, ДНКазная активность - в 28 и 26%, соответственно у клинических и диких штаммов. Доза микроорганизмов, вызывающая гибель всех животных (LD100), не зависела от серовара сальмонелл и колебалась от 103 до 1010 КОЕ/мл. Заключение. Установлено, что клинические штаммы обладали более высокой вирулентностью и устойчивостью к антибиотикам, чем штаммы, выделенные из водной среды.

В обзоре представлены материалы по формированию кишечного иммунного гомеостаза при участии бифидобактерий, являющихся ключевым видом микробиоты биотопа толстого кишечника человека. Ключевая функция доминантных микроорганизмов, в частности бифидофлоры, в кишечном биотопе хозяина осуществляется за счет поддержания своих микроорганизмов и выраженного антагонизма в отношении чужих. Реализация этого принципа в межмикробных отношениях позволила разработать алгоритм микробного распознавания свой-чужой в микросимбиоценозе на основе выявленного оппозитного феномена (усиление/по-давление) важнейших физиологических функций выживания (репродукция и адаптация) микросимбионтов пары доминант-ассоциант. Первичная дискриминация чужеродного материала бифидобактериями - инициальный этап последующего «сигналинга» в регуляции иммунного гомеостаза хозяина. Дальнейшие этапы регуляции осуществляются активацией дендритных клеток бифидобактериями с последующим влиянием на дифференцировку ТМ в направлении регуляторных лимфоцитов. Формирование Treg и регуляция иммунного гомеостаза осуществляются бифидобактериями за счет прямой активации дендритных клеток (лиганд-рецепторные взаимодействия) и поддержания оптимального цитокинового баланса.

На фоне массовой вакцинации против коклюша наблюдается рост заболеваемости во многих странах мира. Изменились формы течения болезни. Атипичные формы коклюша встречаются преимущественно у подростков и взрослых. Установлено бессимптомное носительство возбудителя. Инфицирование младенцев бактериями Bordetella pertussis более чем в 90% случаев происходит от родителей и близких родственников. Выявлена длительная персистенция возбудителя. Рост заболеваемости в развитых странах связывают с использованием бесклеточных вакцин, не защищающих от инфекции, но снижающих тяжесть течения заболевания. Повсеместно наблюдается смена генотипов циркулирующих штаммов бактерий. Образование персистирующих форм бактерий B. pertussis возможно в результате обратимой интеграции IS-элементов в оперон bvgАS и другие гены вирулентности. Приведены результаты изучения инвазии и переживания бактерий B. pertussis в эукариотических клетках, изменения популяции бактерий B. pertussis после экспериментального заражения лабораторных мышей и обезьян, выявлено накопление авирулентных инсерционных Вvg мутантов B. pertussis. Полученные результаты согласуются с результатами анализа популяции возбудителя у больных типичными и атипичными формами коклюша у людей. Показано, что более 50% популяции бактерий B. pertussis у практически здоровых носителей представлена авирулентными инсерционными Вvg мутантами. Снижение вирулентности B. pertussis в результате инактивации одного или нескольких генов вирулентности, вероятно, обеспечивает длительную персистенцию бактерий в организме хозяина и формирование практически здоровых носителей. Дальнейшие исследования в этом направлении помогут сформулировать новые подходы к профилактике коклюша и привести к созданию принципиально новых лекарственных препаратов, предотвращающих формирование персистенции.