Том 90, № 5 (2013)

Цель. Характеристика морфо-функциональной реакции бактериальных клеток Listeria monocytogenes на воздействие катионного пептида низина. Материалы и методы. Культуру бактериальных клеток L. monocytogenes 88-BK выращивали в присутствии низина (опыт) и в его отсутствие (контроль). Полученные образцы исследовали методом атомно-силовой микроскопии (АСМ) в контактном режиме с использованием сканирующего зондового микроскопа SMM-2000. Исследование упругих свойств бактериальных клеток проводили с использованием АСМ в режиме силовой спектроскопии. Результаты. Выращенные в присутствии субингибиторных концентраций антибиотика микроорганизмы характеризовались изменением морфологии клеток и механических свойств, что посредством АСМ было зафиксировано как изменение размерных параметров бактерий, визуализированные локальные разрушения поверхности с увеличением ее шероховатости, а также снижение механической прочности клеточной стенки. Заключение. Использование атомно-силовой микроскопии позволяет детализировать механизмы биологической активности катионного пептида низина на грамположительные бактерии, оценить спектр произошедших изменений морфологических и механических параметров клеток, проанализированных в условиях, близких к нативным.

Цель. Молекулярно-генетическая характеристика штаммов M. tuberculosis, выделенных из операционного материала больных туберкулезным спондилитом. Материалы и методы. 107 штаммов M. tuberculosis, выделенных в 2007-2011 гг. от больных туберкулезом позвоночника, исследовали методами сполиготипирования и MIRU-VNTR типирования по 12 и 24 локусам. Результаты. Доминировали штаммы (n=80) генетического семейства Beijing, из них 78% обладали множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ). Также обнаружены штаммы генетических семейств: T, H3 (Ural), LAM, Manu, Н4 и S. Дифференцирование 80 штаммов генотипа Beijing методом МIRU-VNTR по 24 локусам выявило 24 варианта (HGI=0,83), включая 7 кластеров, наиболее крупный из которых 100-32 включал 23 штамма (87% - МЛУ). Заключение. Показана ведущая роль штаммов M. tuberculosis генотипа Beijing в развитии туберкулезного спондилита с множественной лекарственной устойчивостью возбудителя.

Цель. Выявление циркуляции вируса Западного Нила (ВЗН) на территории Саратовской области и предпосылок к формированию природного очага лихорадки Западного Нила (ЛЗН), определение роли ВЗН в инфекционной патологии на территории области. Материалы и методы. Исследованы суспензии органов мелких млекопитающих, птиц, кровососущих членистоногих на наличие маркеров (антигенов и/или РНК) ВЗН. Исследован клинический материал от больных с симптомами, не исключающими ЛЗН. Протестированы сыворотки крови доноров с целью выявления иммунной прослойки к ВЗН у жителей Саратовской области. Результаты. В 2010 г. антигены ВЗН выявлены методом ИФА в 12 пробах (7,1%) суспензий органов млекопитающих. В 2012 г. методами ОТ-ПЦР и ИФА маркеры ВЗН выявлены в 6 пробах суспензий мозга птиц (6,3%) и 1 пробе суспензий органов млекопитающих. Иммунная прослойка населения к ВЗН составила в 2011 г. 4%, в 2012 г. - 2,8%. В 2012 г. у 11 из 27 обследованных пациентов были выявлены IgM к ВЗН в диагностических титрах и/или сероконверсия IgG в парных сыворотках. У 5 человек, кроме этого, была обнаружена РНК вируса в крови. На основании клинических, лабораторных данных и эпидемиологического анамнеза 11 больным поставлен диагноз ЛЗН. Заключение. Полученные результаты свидетельствуют о циркуляции ВЗН на территории Саратовской области в 2010-2012 гг. с развитием осложнений эпидемиологической ситуации по ЛЗН в 2012 г. Произошло расширение ареала ВЗН на территорию области, и идет процесс формирования природных очагов ЛЗН.

За период 2001-2011 гг. были проведены зоологические и эпизоотологические исследования в более чем 100 пунктах северо-западного Кавказа включая территории Краснодарского края и республики Адыгея. Было отловлено и обследовано 8723 экземпляра мелких млекопитающий, представленных 20 видами грызунов и 7 видами насекомоядных. Органы и кровь от 5057 экз. зверьков были исследованы на инфицированность хантавирусами. Установлено существование природных очагов циркуляции хантавирусов двух видов: Добрава/Белград и Тула. К первому виду относятся вирусы Сочи и, предположительно, Куркино с основными природными хозяевами - кавказской лесной и полевой мышами. Ко второму виду относятся вирусы Тула и Адлер с основными хозяевами - полевками из рода Microtus. Получены количественные характеристики инфицирован-ности мелких млекопитающих различных видов в разные сезоны и годы на обследованных территориях, что позволило создать карту размещения различающихся по структуре очагов циркуляции хантавирусов.

Цель. Изучение внутривидовой иммуногенной активности антигенных белковополисахаридных компонентов S. pneumoniae. Материалы и методы. Антигенные компоненты штаммов S. pneumoniae серотипов 3, 6А, 6В, 14, 10А, 18А, 19А, 19F, 23F и бескапсульного штамма получали методом водной экстракции. В качестве референс-препарата использовали синтетический гексасахарид, отвечающий структуре фрагмента цепи повторяющегося звена капсульного полисахарида S. pneumoniae серотипа 14. Молекулярную массу антигенных компонентов определяли в SDS-электрофорезе. Титры антител в сыворотках крови иммунизированных мышей оценивали методом твердофазного ИФА. Протективную активность препаратов исследовали на мышах после 2-кратной иммунизации с последующим заражением вирулентными штаммами S. pneumoniae серотипов 3 и 6В. Результаты. Препараты из штаммов серотипов 6А, 6В, 14, 19А, 19F, 23F в реакции с антимикробными сыворотками характеризовались перекрестной серологической активностью (титр IgG 1200 - 12 800). Наименьшая серологическая активность выявлена у препаратов S. pneumoniae серотипа 3 и бескапсульного штамма. Конъюгат синтетического гексасахарида и бычьего сывороточного альбумина взаимодействовал только с гомологичной антимикробной сывороткой до титра (600±89,4) и не реагировал с сыворотками к серотипам 19А и 19F. Перекрестная серологическая активность препаратов, вероятно, обусловлена присутствием белоксодержащих фракций, наличие которых выявлено в SDS-электрофорезе. Это подтверждается высокой внутривидовой перекрестной протективной активностью препаратов из штаммов серотипов 6В и 10А, защищающих от заражения гетерологичными штаммами S. pneumoniae 90 - 100% мышей. Заключение. Целесообразно использовать штаммы с перекрестной антигенной и протективной активностью для получения иммуногенных белоксодержащих фракций с целью усиления и расширения спектра защитной активности вакцинных препаратов, конструируемых на основе капсульных полисахаридов S. pneumoniae.

Цель. Сконструировать рецептуру поликомпонентного пробиотика на основе супернатанта культуральной жидкости (КЖ) лактобацилл. Материалы и методы. Видовую принадлежность штаммов лактобацилл уточняли с помощью анализа нуклеотидных последовательностей генов 16S рРНК. Для сравнения пробиотического эффекта КЖ, супернатанта и ультрафильтрата консорциума штаммов лактобацилл проводили исследования спектра содержащихся в них пептидов, амино- и других органических кислот, а также профиль бактерицидной и фунгицидности активности. Результаты. Разработана технология получения безмикробного пробиотического средства на основе КЖ консорциума штаммов лактобацилл. При определении концентрации метаболитов белковой природы была показана аналогичность показателей в супернатанте КЖ и нативных культурах лактобацилл. Также было зафиксировано, что как в испытуемых супернатантах, так и в КЖ присутствовал одинаковый набор органических кислот. При сравнении антибактериальной и антикандидозной активности нативной культуры и супернатанта КЖ лактобацилл в отношении тест-штаммов Staphylococcus aureus 209, Enterococcus faecalis 1154 и Candida albicans 5 был показан равнозначный эффект обоих образцов. Заключение. Поликомпонентный метаболитный пробиотик на основе супернатанта КЖ штаммов Lactobacillus helveticus NKJC, Lactobacillus helveticus JCH и Lactobacillus casei КАА полностью сохраняет бактерицидную и фунгицидную активность нативной культуры консорциума штаммов и при этом лишен недостатков композиций, содержащих живые микроорганизмы.

Цель. Разработка мультиплексной ПЦР для индикации и дифференцированного анализа КОЕ в пробиотическом препарате, содержащем три различных вида бифидобактерий (Bifidobacterium bifidum, B. longum, B.adolescentis) и два вида лактобацилл (Lactobacillus acidophilus, L.plantarum). Материалы и методы. Применена мультиплексная ПЦР с праймерами к генам 16S рРНК пяти видов бактерий. Образцы бактериальных колоний снимали с плотной питательной среды и переносили в пробирку для постановки мультиплексной ПЦР. Бактериальные лизаты использовали в качестве матрицы-мишени для амплификации и определения наличия искомых ампликонов. Результаты. Разработана мультиплексная ПЦР для выявления КОЕ каждого штамма бифидобактерий и лактобацилл в образцах 5-компонентного пробиотика с точностью до вида. Отработан набор реагентов и показана высокая воспроизводимость и специфичность метода мультиплексной ПЦР с точностью 90-95% случаев. Заключение. Разработанный метод мультиплексной ПЦР рекомендуется использовать для контроля КОЕ каждого бактериального компонента в комплексном пробиотическом препарате.

Цель. Определение этиологической значимости клинических штаммов E.coli О145:Н28, изолированных из испражнений пациента с гемолитико-уремическим синдромом (ГУС). Материалы и методы. Исследованы 20 штаммов E.coli, выделенные из испражнений пациента с ГУС, развившимся после ОКИ. Определяли антигенную структуру штаммов методом секвенирования rfb и fliC генов; наличие генов вирулентности (pap, aaf, sfa, afa, eaeА, bfpA, ial, hly, cnf, stx1, stx2, LT, ST и aer) в ПЦР; продукцию БЛРС методом двойных дисков, гены БЛРС в ПЦР. Результаты. Штаммы содержали rfb ген, кодирующий О145, fliC ген, кодирующий Н7. Выявлены гены, кодирующие синтез stx2-токсина и интимина (eaeА). Штаммы были резистентны к Р-лактамам за счет продукции БЛРС класса СТХ-М. Заключение. От пациента с ГУС изолирован возбудитель E.coli О145:Н28, продуцирующий stx2-токсин и БЛРС класса СТХ-М, ранее не регистрируемый в РФ.

Рассмотрены современные особенности распределения различных подвидов и биоваров возбудителя чумы по ландшафтно-географическим зонам и поясам гор на территорий России и других стран СНГ. Отмечено, что наиболее широкое распространение в равнинных и горных природных очагах имеют штаммы средневекового биовара основного подвида Yersinia pestis. Штаммы неосновных подвидов Yersinia pestis распространены в горных ландшафтах Алтая, Кавказа, Тянь-Шаня. Отмечено, что смена доминирующих видов грызунов, рассматриваемых в качестве основных носителей чумы, не приводит к изменению генетических и биохимических характеристик штаммов Yersinia pestis. Подчеркнута перспективность изучения феномена «микроочаговости» чумы для расшифровки механизма энзоотии.

Анализ заболеваемости беременных гриппом показывает высокую частоту тяжелых вариантов течения инфекции с фатальным исходом. Наибольшее число осложнений гриппа приходится на женщин в случае инфицированности их в третьем триместре беременности, а также имеющих отягощенный преморбидный фон в виде бронхиальной астмы, ожирения и сахарного диабета. Показано, что здоровые женщины, находящиеся на третьем триместре беременности, имеют такой же риск по тяжелому течению респираторной инфекции, как и небеременные женщины с хронической сопутствующей патологией. Вакцинация против гриппа беременных имеет хорошо доказанную безопасность и эффективность. Использующиеся современные вакцины позволяют с высокой достоверностью уменьшить риск развития акушерской и педиатрической патологии, связанной с перенесенным гриппом.