Том 95, № 4 (2018)

Цель. Оценить метаболическую активность высокоантагонистических штаммов лактобацилл, выделенных из полости рта и кишечника здоровых людей. Материалы и методы. В исследование включены 9 высокоантагонистически активных штамма лактобацилл, выделенных из зубного налета и кишечника здоровых людей разных возрастных групп от 8 до 35 лет. У лактобацилл были изучены ферменты патогенности, кислотообразование, газовые сигнальные молекулы (CH₄, CO₂, C₂H₆, CO и NH₃), а также степень чувствительности к соляной кислоте, желчи. Результаты. Все исследуемые штаммы лактобацилл были генетически идентифицированы по гену 16S РНК и отнесены к 4 видам: L.fermentum, L.rhamnosus, L.plantarum и L.casei. Они оказались апатогенными, вырабатывали широкий спектр метаболитов разной степени выраженности: молочную кислоту и простые газовые сигнальные молекулы, CH₄, CO₂, C₂H₆, CO и NH₃. Кишечные штаммы лактобацилл были в большей степени устойчивы к соляной кислоте и желчи, чем лактобациллы, выделенные из полости рта. Заключение. Высокоантагонистические штаммы лактобацилл имеют широкий спектр пробиотических факторов, синтезируют кислоты и газообразные молекулы, выживают в присутствии соляной кислоты и желчи, и поэтому могут быть рассмотрены для конструирования новых пробиотиков и функциональных продуктов питания.

Цель. Оценка влияния метаболитов вагинальных лактобацилл на ферментативную и бактерицидную активность лизоцима. Материалы и методы. Изучали изменение ферментативной и бактерицидной активности лизоцима после его обработки бесклеточными супернатантами лактобацилл, содержащих сурфактанты, пероксид водорода или их комбинацию. Ферментативную активность оценивали по скорости лизиса Micrococcus luteus, бактерицидность для тест-штаммов Escherichia coli и Lactobacillus acidophilus - по результатам высева. Результаты. Ферментативную активность лизоцима снижали как сурфактанты, так и Н₂О₂. Под влиянием сурфактантов бактерицидная активность лизоцима снижалась и в отношении L. acidophilus, и E. coli. Под влиянием пероксида водорода и его сочетаний с сурфактантами бактерицидная активность лизоцима в отношении L. acidophilus снижалась, а в отношении E. coli повышалась. Низкие концентрации сурфактантов потенцировали влияние Н₂О₂ на антибактериальную активность лизоцима. Заключение. Делается вывод о том, что метаболиты нормальной микрофлоры являются инструментом модификации факторов защиты хозяина с целью создания благоприятных условий собственного существования и препятствия интродукции чужеродных видов.

Цель. Конструирование рекомбинантных бактерий B. pertussis генотипа ptxP3 и характеристика их генетической и биологической стабильности. Материалы и методы. В качестве реципиента при конструировании аттенуированных бактерий генотипа ptxP3 использованы вирулентные бактерии B. pertussis 475 генотипа ptxР1, применяемые для производства вакцины АКДС в Российской Федерации. Мутантные бактерии B. pertussis 475 получены в результате аллельного обмена между нативной копией целевой последовательности в составе хромосомы и ее мутантной копией в рекомбинантной суицидной плазмиде, переданной в реципиентную бактерию с помощью коньюгации. Конструирование рекомбинантных плазмид осуществлено стандартными методами генетической инженерии. Структура модифицированных участков хромосомы аттенуированных бактерий определена с помощью ПЦР и секвенирования фрагментов амплификации. Стабильность структуры и свойств аттенуированных бактерий определена после 15 пассажей бактерий на питательной среде и 5 - в организме мышей. Результаты. Сконструированы изогенные аттенуированные бактерии РtxP1 B. pertussis 4M и РtxP3 B. pertussis 4М^, продуцирующие коклюшный токсин (КТ), лишенный ферментативной токсической активности, и не продуцирующие дермонекротический токсин. Промоторная область оперона ptx аттенуированных бактерий РtxP3 B. pertussis 4М^ содержит мутацию, характерную для «нового» генотипа циркулирующих в настоящее время вирулентных бактерий B. pertussis и увеличивающую продукцию КТ. Структура модифицированных фрагментов ДНК и свойства аттенуированных бактерий не изменяются при хранении и пассажах на питательной среде и в организме мышей. Заключение. Сконструированы рекомбинантные аттенуированные бактерии B. pertussis 4М^ «нового» генотипа ptx*P3 и показана перспективность направленной генноинженерной модификации изогенных бактерий B. pertussis для создания инновационных препаратов для профилактики коклюша.

Цель. Определить функциональный статус нейтрофилов цервикального секрета у женщин в 1 триместре беременности в зависимости от видового состава лактофлоры. Материалы и методы. У обследованных 40 беременных женщин проводили масс-спектрометрическую видовую идентификацию влагалищных лактобацилл, оценивали их способность к образованию биопленок, изучали жизнеспособность, лизосомальную активность, спонтанный и индуцированный НСТ-тест, способность к поглощению частиц латекса нейтрофилами цервикальной слизи. Выделенные штаммы были разделены на 3 группы в зависимости от наличия или отсутствия инфекционного процесса влагалища и/или цервикального канала. Результаты. Среди выделенных 40 штаммов лактобацилл было идентифицировано 5 видов: L.jensenii, L. mispatus, L. аcidophilus, L.gasseri, L. delbrueckii. В условиях нормоценоза показана различная интенсивность фагоцитоза частиц латекса нейтрофилами цервикального секрета в зависимости от доминирующего вида: при доминировании L. crispatus отмечена наименьшая интенсивность фагоцитоза, по сравнению с L. acidophilus и L.jensenii. При наличии генитальной инфекции лактобациллы способны интенсивно секретировать биоматрикс, блокируя свой антигенный потенциал, что сопровождается отсутствием НСТ-редуцирующей способности нейтрофильных гранулоцитов и снижением антимикробной защиты слизистой оболочки генитального тракта беременной женщины. Заключение. Показатели функционального статуса нейтрофилов цервикального секрета зависят от доминирующего вида лактобацилл влагалища у беременных женщин в I триместре.

Цель. Оценить структуру микробного консорциума кишечника и уровень окситоцина в плазме крови в контексте выраженной социальной недостаточности у детей с расстройствами аутистического спектра. Материалы и методы. Обследованы 44 ребенка с расстройствами аутистического спектра, которые были поделены на две группы: 23 ребенка с отсутствием признаков социального контакта и 21 человек с сохраненным социальным контактом. Группу сравнения составили 39 типично развивающихся детей соответствующего пола и возраста. Структуру и количество микроорганизмов тонкого кишечника определяли с помощью специфических липидных маркеров в периферической крови методом газовой хромато-масс спектрометрии микробных маркеров. Концентрацию окситоцина оценивали в плазме крови методом твердофазного иммуноферментного анализа. Результаты. Биохимические сигналы экологической системы - хозяин-ассоциированного микробного консорциума (липидом) и хозяина (нейропептид-окситоцин), при балансе отношений между ними - здоровье, работают в общем контексте - социализации метаорганизма, однако контекст может меняться при дисбалансе системы - болезнь (расстройства аутистического спектра), что способно привести к социальной недостаточности. Заключение. Исследования в данном направлении помогут, как мы полагаем, приблизиться к пониманию механизмов, лежащих в основе социальных дефицитов при аутизме, что позволит определить пути их коррекции.

Цель. Изучить зависимость выявления маркеров оппортунистических инфекций (ОИ) от приверженности АРВТ у детей, рожденных ВИЧ-инфицированными матерями, на примере герпесвирусных инфекций (ГВИ) и пневмоцистоза. Материалы и методы. Были исследованы образцы биологического материала (сыворотки крови и клетки крови) от 66 детей с ВИЧ-инфекцией в возрасте от 1 месяца до 15 лет, находившихся на лечении в Детском боксированном отделении ИКБ №2, с диагнозами «неокончательный тест на ВИЧ» и «ВИЧ-инфекция». Для определения IgM и IgG к герпесвирусам и пневмоцисте был использован метод иммуноферментного анализа; непрямая реакция иммунофлюоресценции для выявления в клетках крови герпесвирусов и их антигенов. Ранние антигены и репродукцию вирусов определяли быстрым культуральным методом. Результаты. Антиретровирусную терапию в полном объеме получили 56,0% обследуемых детей, в неполном - 16,7%, у 27,3% детей приверженность к АРВТ отсутствовала полностью. Несмотря на то, что 100% детей с неокончательным диагнозом ВИЧ-инфекции были охвачены АРВТ за счёт приёма химиопрепаратов их матерями на протяжении беременности, у них всё же определяли маркеры как активных, так и латентных форм ГВИ и пневмоцистоза. У детей с подтвержденной ВИЧ-инфекцией, проживающих как в социальных учреждениях, так и в семьях, маркеры оппортунистических инфекций чаще диагностировали у пациентов, получавших АРВТ в полном и не в полном объеме, чем у детей, которым она не проводилась. Заключение. Выявление маркеров активных форм герпесвирусных инфекций и пневмоцистоза у ВИЧ-положительных детей, не получающих АРВТ, является основанием для её незамедлительного назначения.

Цель. Выявить потенциально патогенных бактерий в планктоне солоноватых рек Приэльтонья методом высокопроизводительного секвенирования участка гена 16S рРНК. Материалы и методы. Образцы воды из солоноватых рек Ланцуг и Чернавка, впадающих в озеро Эльтон, отбирали в объеме 50 мл, фильтровали через мембранные фильтры с диаметром пор 0.22 мкм. Тотальную ДНК выделяли методом фенол-хлороформной экстракции с предварительной гомогенизацией и ферментативным лизисом. ДНК-библиотеки для секвенирования создавали по протоколу Illumina с праймерами к вариабельному участку V3-V4 гена 16S рРНК. Секвенирование проводили на платформе MiSeq («Illumina», США). Результаты. В планктонных образцах солоноватых рек Приэльтонья были обнаружены филотипы потенциально патогенных бактерий филума Proteobacteria из семейств Enterobacteriaceae, Pseudomonadaceae, Campylobacteraceae, Vibrionaceae, Aeromonadaceae, Moraxellaceae, Legionellaceae, Alcaligenaceae, Campylo-bacteraceae, а также филумов Firmicutes, Bacteroidetes, Actinobacteria. Вероятным источником бактериального загрязнения является крупный и мелкий рогатый скот. Заключение. Полученные данные демонстрируют, что солоноватые континентальные водоемы наряду с пресными и морскими выполняют резервуарную функцию для потенциально патогенных микроорганизмов. Высокопроизводительное секвенирование может быть использовано для скрининговой оценки присутствия патогенов в воде.

В экспериментах in situ исследовались сезонные сукцессии цианобактерий, вызывающих «цветение» воды в водоемах бореальной зоны в зависимости от экологических факторов. Установлено, в планктонную стадию развития основными факторами, обусловливающими рост и смену доминирующих форм цианобактерий, являются температура воды, уровень солнечной радиации и выделяемые метаболиты. Наиболее выраженные «цветения» воды с высоким накоплением биомассы и вторичных токсичных метаболитов цианобактерий наблюдаются в годы с антициклональным типом погоды. В такие годы цианобактерии проявляют максимальный рост благодаря выработанному в процессе эволюции сочетанию адаптивных признаков, комбинации которых отсутствуют у партнеров по планктонному сообществу или встречаются лишь по отдельности. Вероятно, что способность цианобактерий занимать различные биотопы в результате высокой устойчивости к климатическим факторам и ожидаемое глобальное потепление будут стимулировать более продолжительные и токсичные «цветения» воды в водоемах бореальной зоны.

Цель. Определить вклад природных вариантов фактора инвазии Listeria monocytogenes InlB в вероятность развития перинатальной инфекции на модели интрагастрального заражения беременных мышей. Материалы и методы. Мышам на 12-16 день беременности интрагастрально вводили 10⁸ КОЕ изогенных рекомбинантных штаммов L. monocytogenes EGDeAinlB::InlB9 и EGDeAinlB::InlB14, экспрессирующих отличающиеся природные варианты InlB9 и InlB14. Через 72 час мышей подвергали эвтаназии, вскрывали и оценивали микробную нагрузку во внутренних органах. Результаты. Перинатальная инфекция наблюдалась только при инфекции штаммом, экспрессирующим InlB14. Также микробная нагрузка этого штамма превышала нагрузку штамма EGDeAinlB::InlB9 в 715, 315 и 70 раз для печени, селезенки и Пейеровых бляшек соответственно (p<0,01). Микробные нагрузки в эпителии тонкого кишечника были сравнимы для двух штаммов. Раздельные высевы плацент и плодов одной мыши, инфицированной EGDeAinlB::InlB14, выявили возбудитель в 5 плацентах и 2 плодах из 9. Заключение. Природные варианты InlB отличаются по своей способности способствовать развитию перинатальной инфекции при интрагастральном пути введения L. monocytogenes.