Том 86, № 2 (2009)

Исследование ультраструктурных изменений клеток гемолитических и энтерогеморрагических кишечных палочек при взаимодействии с метаболитами Lactobacillus fermentum. Материалы и методы. Штаммы патогенных гемолитических (Hly) и энтерогеморрагических Escherichia coli (O157:H7) и симбиотический бактериоциногенный штамм Lactobacillus fermentum 97. Подавление роста жизнеспособных кишечных палочек осуществлено методом отсроченного антагонизма. С помощью электронно-микроскопического исследования проведена оценка ультраструктурных изменений клеток гемолитических и энтерогеморрагических эшерихий под воздействием диффундирующих в МРС-агар метаболитов лактобацилл. Результаты. На ультратонких срезах выявлены изменения, свидетельствующие о глубине протекающих деструктивных процессов в клетках эшерихий. Под действием диффундирующих метаболитов лактобацилл наблюдали дестабилизацию клеточной стенки, расширение периплазматического пространства и появление участков цитоплазмы низкой электронной плотности в полярных отделах клеток с визуализацией хлопьевидного материала. В клетках гемолитических E.coli наблюдали появление вытянутых паракристаллических укладок и филаментозных структур различной длины, требующих специального исследования. Заключение. Бактериоциноподобные вещества лактобацилл при взаимодействии с патогенными эшерихиями вызывают у последних выраженные деструктивные процессы, приводящие к гибели клеток-мишеней.

Цель. Изучить способность полиоксидония влиять на адгезивные свойства С.diphtheriae. Материалы и методы. Исследована способность полиоксидония (ПО) влиять на адгезивные свойства токсигенных и нетоксигенных штаммов С. diphtheriae, выделенных от больных, бактерионосителей, контактных и здоровых при профилактических осмотрах населения в Ростовена-Дону и Ростовской области. Результаты. Установлено, что при добавлении в среду культивирования ПО в 100% случаев подавлял адгезивную активность С.diphtheriae. В опытах по прерыванию адгезии блокирующий эффект ПО на адгезивные свойства дифтерийных бактерий имел дозозависимый характер и был выражен при использовании ПО в концентрации 1200 мкг/ мл. Заключение. Полученные данные свидетельствуют о том, что ПО обладает выраженной антиадгезивной активностью в отношении как токсигенных, так и нетоксигенных штаммов С.diphtheriae, что может быть использовано при лечении дифтерийной инфекции.

Цель . Молекулярный анализ геномов штаммов Streptococcus pyogenes emm1 и emm12 типов на присутствие генов, принадлежащих профаговой ДНК. Материалы и методы. Объектами исследования служили 31 штамм S. pyogenes типа emm1 и 22 штамма типа emm12. Исследование проводили с помощью полимеразной цепной реакции с использованием специфических праймеров для выявления 24 фаговых генов. Результаты . Изучена распространенность фаговых генов среди штаммов разных emm типов. Наиболее часто встречающимися фаговыми генами среди штаммов S.pyogenes были гены speA, speС, ssa для типа emm1 и гены speС и speH для типа emm12. На основании исследования выявлено 19 различных профилей фаговых генов. Заключение . В результате исследования выявлены не только отличия, но и сходства между штаммами emm1 и emm12 типов по набору профаговых генов в бактериальном геноме. Наличие сходства позволяет предположить возможность циркуляции в исследованном регионе сходных или идентичных бактериофагов среди штаммов стрептококков группы А (СГА) различных emm типов.

Цель . Исследовать особенности взаимодействия антиген-антитело при использовании линейных синтетических пептидов и мультипептидного антигена, моделирующих антигенные детерминанты ВГА, и оценить перспективы использования гетерогенных тетрамерных мультипептидных антигенов для выявления серологических маркеров ВГА. Maтeриaлы и мeтoды . Линейные пептиды VP1 и VP3 были синтезированы Fmoc-полиамидным твердофазным методом. MAP 4 (VP1+VP3) был синтезирован согласно 9-флуоренилметилоксикарбонил (Fmoc) стратегии. Взаимодействие этих пептидов с anti-HAV IgM позитивными сыворотками больных ГА было исследовано неконкурентным и конкурентным методами иммуноферментного анализа. Результаты . Методом ИФA показана высокая гетерогенность иммунного ответа у больных ГА (62 и 67% в двух группах). MAP 4 (VP1+VP3) взаимодействовал с anti-HAV IgM в 41 — 45% сывороток, и в то же время МАР 4 не давал ложнопозитивных результатов, в отличие от комбинации линейных пептидов VP1 и VP3. Заключение . Популяция ВГА не столь однородна, как это принято считать. Целесообразно использование при разработке новых тестсистем для диагностики ГА гетерогенных мультипептидных антигенов, в том числе содержащих VP1 (11 — 25 а.о.) и VP3 (110 — 121 а.о.).

Цель . Изучение хитозана в качестве адъюванта для инактивированных вакцин против вирусов гриппа серотипа А/Н5. Материалы и методы. Вирусы гриппа птиц А/Н5 выращивали в куриных эмбрионах или в линии клеток MDCK, вируссодержащую жидкость инактивировали формалином. Мышей вакцинировали внутримышечно инактивированными препаратами вируса гриппа птиц в смеси с хитозаном и определяли задерживающие гемагглютинацию и нейтрализующие антитела, а также защитную эффективность как в отношении гомологичных, так и дрейфовых штаммов вирусов гриппа птиц А/Н5. Результаты . При иммунизации мышей инактивированными препаратами вирусов гриппа птиц А/Н5 хитозан существенно повышает задерживающие гемагглютинацию и нейтрализацию антитела не только к гомологичному, но также к дрейфовым вариантам вирусов гриппа А/Н5, в том числе содержащим нейраминидазу другого серотипа из штаммов, выделенных на 10—20 лет ранее вируса, использованного для вакцинации. Хитозан существенно повышает защитную эффективность инактивированных препаратов вирусов гриппа птиц не только при заражении мышей гомологичным, но также дрейфовым вариантом вируса. Инактивированные препараты вирусов гриппа птиц А/Н5 при вакцинации вместе с хитозаном индуцируют образование высоких титров антител даже при однократной иммунизации, а также при снижении дозы антигена в 8 раз. Заключение . Хитозан является перспективным адъювантом для инактивированных вакцин против вирусов гриппа птиц и существенно повышает иммунный ответ и защитную эффективность не только к гомологичным, но и дрейфовым вариантам вирусов гриппа птиц А/Н5.

Цель. Оценка влияния вакцинации против пневмококковой и гриппозной инфекций на содержание аутоантител к ДНК, ткани поджелудочной железы и надпочечников, популяций лимфоцитов и уровень иммуноглобулинов у детей и подростков с сахарным диабетом 1 типа (СД1). Материалы и методы. В течение 12 месяцев проводилось наблюдение за 130 детьми и подростками с СД1 в возрасте от 2 до 18 лет. Сто детей были вакцинированы против пневмококковой инфекции. Из них у 28 (28%) пациентов вакцинация препаратом Пневмо 23 сочеталась с субъединичной гриппозной вакциной Гриппол. Вакцинация проводилась на фоне интенсифицированной инсулинотерапии. Группу непривитых составили 30 детей аналогичного возраста. На момент вакцинации 59 (59%) детей находились в фазе компенсации и 41 (41%) ребенок в фазе субкомпенсации. Результаты . Выявлено, что у 5 из 10 детей с высоким уровнем антител к нативной ДНК (н-ДНК) через 1 год после вакцинации препаратом Пневмо 23 АТ регистрировались в нормальных значениях. Из 7 пациентов с высокими значениями АТ к денатурированной ДНК (д-ДНК) у 2 они нормализуются в поствакцинальном периоде. При сочетанной вакцинации нормализация уровня АТ к н-ДНК наблюдали у 2 из 3 пациентов. Важно отметить, что вакцинация детей в фазе субкомпенсации не приводила к изменению уровня аутоантител. Через 1 год после вакцинации отмечается положительная динамика уровней IgG, IgA, IgM в сторону их снижения до нормальных показателей. Отсутствие нарастания содержания HLA-DR и CD16 в поствакцинальном периоде у детей с СД1, вакцинированных даже в фазе субкомпенсации, также косвенно свидетельствует об отсутствии активации аутоиммунного процесса. Заключение . Применение препарата Пневмо 23 или его сочетание с вакциной Гриппол у пациентов с СД1 не приводит к увеличению АТ к н-ДНК, д-ДНК и к ткани поджелудочной железы, не вызывает инициации и прогрессирования заболевания, оказывает благоприятное влияние на иммунный ответ с тенденцией к нормализации определенных звеньев иммунной системы, не вызывая при этом активизации аутоиммунного процесса.

Цель. Исследование изменений уровня экспрессии генов TLR9, NF-κB, ФНОα в слизистой цервикального канала женщин с физиологически протекающей беременностью и беременных с герпесвирусной инфекцией. Материалы и методы. С использованием разработанных ранее систем полимеразной цепной реакции в реальном времени был оценен количественный уровень экспрессии генов, белковые продукты которых играют значительную роль в TLR9зависимом сигнальном пути (TLR9, NF-κB, ФНОα). Результаты. При герпесвирусной инфекции у беременных было выявлено увеличение экспрессии генов TLR9 в 2 раза, NF-κB в 4,4 раза, ФНОα в 3 раза по сравнению с теми же показателями у женщин с физиологически протекающей беременностью. Заключение. Полученные результаты свидетельствуют об активации TLRопосредованных механизмов врожденного иммунитета на уровне слизистой цервикального канала при беременности, осложненной урогенитальной инфекцией вирусного генеза.

Цель. Изучение роли нейтрализующих антител (НА) на модели SHIV-инфекции макаков лапундеров, иммунизированных различными методами. Материалы и методы. Титры НА были определены с использованием клеток TZM-bl. Титры сывороток, соответствующие 50% нейтрализации, были определены при учете их разведения и результатов относительной люминесценции. Предложено использовать показатель интегральной нейтрализующей активности, который математически выражается как интеграл нейтрализационной функции в интервале разведений сывороток от единицы (или первого используемого разведения) до того значения, которое дает выбранный титр (нами выбрана 50% нейтрализация). Результаты. На основании анализа данных SHIV-инфекции предварительно иммунизированных обезьян заключили, что существует более четкая корреляция между результатами инфекции и интегральной нейтрализующей активностью сывороток по сравнению с 50% титрами НА. Заключение . Предложенный метод может быть полезен для анализа эффективности иммунизации против HIV-инфекции.

Цель. Оценка эффективности применения методики количественного определения легионелл в объектах окружающей среды на основе технологии ПЦР в реальном времени. Материалы и методы. Для разработки тестсистемы использовали родоспецифические праймеры из последовательности гена, кодирующего 16S рРНК, и видоспецифические для выявления Legionella pneumophila на основе последовательностей гена mip. Для количественного определения L.pneumophila использовали калибровочные образцы плазмиды рGEM,содержащей фрагмент гена miр с известными концентрациями. Исследовали образцы воды и биопленок, полученные из градирен промышленных предприятий, систем автономного водоснабжения, блоков увлажнения централизованной системы кондиционирования. Результаты. Показана корреляция результатов применения ПЦР и бактериологического метода при мониторинге потенциально опасных водных систем и во время эпидемической вспышки легионеллезной инфекции. Отмечена важность этапа подготовки проб, в ходе которых возможны значительные потери ДНК и ингибирование реакции. Проведение дезинфекционных мероприятий на исследуемых объектах существенно влияет на результаты исследования с помощью ПЦР в реальном времени и может привести к ложно положительным результатам. Заключение. Полученные результаты подтверждают перспективность обследования потенциально опасных водных объектов на наличие легионелл, основанного на предварительном скрининге с помощью ПЦР в реальном времени в течении 24 часов и последующем бак териологическом исследовании образцов в течении 8—12 суток.

Цель . Выбор пробиотика, содержащего лактобациллы, при комплексной терапии клебсиеллезной острой кишечной инфекции у детей грудного возраста. Материалы и методы. На основании данных бактериологического анализа отобрана группа, состоящая из 40 детей грудного возраста, страдающих клебсиеллезной острой кишечной инфекцией. Проведена оценка эффективности трех пробиотических препаратов: Лактобактерина, Витафлора и Биобактона в зависимости от биологических особенностей возбудителя и численности лактобацилл и бифидобактерий в составе облигатной микрофлоры кишечника. Исследованы внутривидовые антагонистические свойства производственных штаммов лактобацилл в отношении 9 клинических изолятов K.pneumoniae, 8 штаммов индигенной лактофлоры и межвидовой контрантагонизм клебсиелл к пробиотическим и индигенным штаммам лактофлоры. Результаты . Показано, что комплексная терапия клебсиеллезной инфекции у грудных детей с использованием Витафлора или Биобактона способствовала элиминации K.pneumoniae и восстановлению индигенной микрофлоры в виде достоверного повышения титра лактобацилл. In vitro максимальный антагонизм к K.pneumoniae отмечен у Витафлора, Лактобактерина и гетероферментативных аутоштаммов лактофлоры больных детей. Контрантагонизм к лактофлоре был характерен для медленнорастущих штаммов клебсиелл. Заключение . В начальной фазе острой клебсиеллезной инфекции терапевтически оправдано назначение Витафлора, способствующего быстрой элиминации возбудителя, а в фазе реконвалесценции — Биобактона, повышающего титры индигенной лактофлоры.

Цель. Изучение влияния серотонина и дофамина на рост штаммов Yersinia pestis и Francisella tularensis, а также способности моноаминов изменять чувствительность экспериментальных животных к чуме. Материалы и методы. Влияние разных доз биогенных аминов на рост Y.pestis и F.tularensis исследовали на биофотометре «BIO-LOG II» (F ISABIO, Франция). При исследовании влияния аминов на показатели LD 5 0 и средней продолжительности жизни серотонин вводили внутрибрюшинно мышам в дозе 25 мг/кг, дофамин в дозе 100 мг/кг до введения животным суспензии штаммов Y.pestis. Результаты. Показано, что однократное добавление серотонина (2,5 — 40,0 мкМ) в среду культивирования штаммов Y.pestis и F.tularensis не оказывало достоверно значимого влияния на рост бактерий ни при температуре культивирования 28°C, ни при 37°С. Дофамин при аналогичной постановке опыта стимулировал рост бактериальных культур, ускоряя наступление экспоненциальной фазы роста культур. Введение серотонина за 1 час до введения мышам клеток штамма Y.pestis EV-76 повышало LD 50 и снижало среднюю продолжительность жизни животных; введение дофамина, напротив, снижало LD 5 0 и повышало среднюю продолжительность жизни животных. Заключение. Данные о стимулирующем действии дофамина на возбудители трансмиссивных инфекций позволяют предположить, что физиологическое состояние организма, а также медикаментозное введение катехоламинов могут влиять на восприимчивость хозяина к инфекции и обусловливать септическое течение заболевания.

Цель. Выявление особенностей, связанных с присутствием в организме женщин вируса папилломы человека. Материалы и методы. Обследованы 250 женщин репродуктивного возраста 18—45 лет (из них 30 человек — практически здоровые). Исследовали соскобы эпителия из урогенитального тракта на наличие урогенитальных инфекций методом полимеразной цепной реакции в реальном времени. Проводилась кольпоскопия, цитологическое исследование, ультразвуковое исследование органов малого таза. Результаты. У 41% обследованных обнаружены вирусы папилломы человека 16 и 18 типов. Из них у 38% выявлена персистирующая форма папилломавирусной инфекции. Выявлены следующие факторы, способствующие формированию персистирующей папилломавирусной инфекции у женщин: возраст до 21 года, наличие воспалительных заболеваний органов малого таза (эндометрит, сальпингоофорит) и цервикальная эктопия, использование внутриматочных средств контрацепции, отягощенная наследственность по онкологическим заболеваниям, наличие остроконечных кондилом. Достоверно чаще при персистирующей папилломавирусной инфекции встречались признаки, характерные для хронического воспалительного процесса шейки матки. Заключение . Определена взаимосвязь между наличием хронических воспалительных процессов репродуктивной системы женщин, связанных с различными неблагоприятными факторами, и возможностью формирования персистенции вируса папилломы человека высокого онкогенного риска в организме женщин.

Врожденный иммунитет является первой линией защиты организма от инфекции, в том числе вызванной вирусами герпеса. Основными патоген-распознающими рецепторами являются Toll-подобные рецепторы (TLR). TLR2 связывается с гликопротеинами оболочки вируса герпеса, внутриклеточные TLR9 распознает неметилированные повторы CpG ДНК вируса герпеса, что приводит к активации сигнальных путей рецепторов и выработке провоспалительных цитокинов, хемокинов, противомикробных пептидов и других молекул, которые участвуют в запуске механизмов врожденного иммунитета. Многие вирусы (вирус кори, цитомегаловирус и др.) активируют экспрессию TLR для более эффективного размножения вируса в клетке.

Обобщены данные литературы о механизмах взаимодействия вирусов и бактерий в условиях ассоциативного симбиоза. Показаны взаимоотношения вирусов гриппа, аденовирусов, вирусов Коксаки с различными таксонами патогенных и условно патогенных видов бактерий. Результаты влияния на факторы патогенности вирусов и бактерий разнонаправленны (усиление, подавление), что может определять течение инфекционного процесса.