Том 96, № 4 (2019)

Цель. Сравнить частоту определения ВИЧ-инфекции у пациентов крупных многопрофильных стационаров по оказанию экстренной и плановой медицинской помощи и оценить значение многолетней динамики этого показателя в качестве количественной характеристики эпидемического процесса ВИЧ-инфекции. Материалы и методы. Ретроспективно проанализированы результаты освидетельствования на ВИЧ-инфекцию пациентов в НИИ СП им. Н.В. Склифосовского (НИИ СП) и МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского за 2008-2017 гг. Многолетнюю динамику показателей выявляемости ВИЧ-инфекции анализировали с помощью расчета величины тенденции методом наименьших квадратов. Выраженность тенденций (рост/снижение) оценивали по критериям, предложенным В.Д. Беляковым с соавт. (1981). Результаты. За исследованный период в НИИ СП и МОНИКИ на ВИЧ-инфекцию освидетельствованы 251 213 и 165 194 человек, соответственно. За десять лет количество госпитализаций ВИЧ-инфицированных пациентов в НИИ СП увеличилось в 1,7 раза, в МОНИКИ — в 3,1 раза. Выявляемость ВИЧ-инфекции у пациентов НИИ СП превышала показатели МОНИКИ от 3,2 до 6,0 раз. При этом в МОНИКИ отмечена статистически значимая тенденция к росту госпитализаций ВИЧ-инфицированных граждан (R2=0,8049, p=0,0004) с выраженным среднегодовым темпом прироста 9,6% в год. Заключение. Полученные нами данные свидетельствует о наличии тенденции к увеличению числа обращений за медицинской помощью ВИЧ-инфицированных граждан в многопрофильные общесоматические стационары Москвы и Московской обл. Наиболее существенные темпы прироста зафиксированы в отделениях реанимационного (Т=14,2%) и хирургического (Т=9,8%) профиля МОНИКИ. Индикаторными группами высокого риска инфицирования ВИЧ-инфекцией в Московском регионе необходимо рассматривать пациентов с экстренной хирургической патологией, острыми экзогенными отравлениями химической этиологии, а также лиц, страдающих психическими расстройствами.

Цель. Создание базы данных масс-спектров штаммов Yersinia pestis, позволяющей дифференцировать штаммы основного и кавказского подвидов возбудителя чумы методом MALDI-TOF MS. Материалы и методы. Методом MALDI-TOF масс-спектрометрии было исследовано 50 штаммов Yersinia pestis, выделенных на территории 7 природных очагов чумы Кавказа и Закавказья в период 1950-2012 г. Снятие масс-спектров экстрактов клеток Y. pestis проводили с использованием масс-спектрометра Microflex LT «Bruker Daltonics». Результаты обрабатывали и анализировали в программах «FlexAnalysis» и MALDI Biotyper v. 3.0. Результаты. Показано, что масс-спектры имеют характерные особенности, позволяющие дифференцировать штаммы основного (pestis) и неосновного подвидов. Выявлены пики, характерные для каждого подвида, наличие у Y. Pestis подвида caucasica пиков, характерных для предковой формы — Y. pseudotuberculosis указывает на древнее происхождение этой группы, что согласуется в данными молекулярно-генетического и WGS анализа, приведенными в публикациях отечественных и зарубежных авторов. Заключение. Показана возможность применения метода MALDI-TOF масс-спектрометрии для быстрой дифференциации штаммов чумы основного и неосновного подвида, имеющих разное значение в развитии и поддержании эпизоотического процесса в природных очагах чумы, а также разную вирулентность для человека. Идентификация штамма до уровня подвида требует проведения культуральных и биохимических тестов, которые могут занять несколько суток. Предлагаемый метод позволяет провести дифференциацию и получить результат уже через полчаса после получения чистой культуры.

Цель. Сравнительный анализ серологических методов выявления возбудителя туляремии и их оценка. Материалы и методы. Использованы экспериментальные диагностические наборы и тест-системы для постановки серологических методов: реакции непрямой гемагглютинации (РНГА); реакции иммунофлуоресценции (РИФ); иммуноферментного анализа (ИФА) традиционного с использованием микропланшет; ИФА после селективного концентрирования возбудителя туляремии на магноиммуносорбенте (МИС); реакции микрогравиметрического анализа (МГА) на основе пьезобиосенсоров (ПБ) и поверхностного плазмонного резонанса (ППР). Эксперименты проводили с гомологичными штаммами туляремийного микроба (тест-штаммами) и со штаммами гетерологичных микроорганизмов в модельных опытах на водопроводной воде, контаминированной различной концентрацией патогена. Результаты. Определены параметры каждого диагностического метода и дана оценка по показателям: чувствительности (при работе с чистыми культурами (тест-штаммами), загрязненными пробами больших объемов), специфичности, времени постановки и учета результатов, информативности, определения режимов постановки и учета. Заключение. Вышеперечисленные методы диагностики имеют свои достоинства и недостатки, поэтому при выборе того или иного метода исследователь должен руководствоваться своими целями. Так, для скрининговых исследований целесообразно проводить постановку ИФА, РИФ, РНГА; при выявлении возбудителя в больших объемах и загрязненных пробах эффективно применение селективного концентрирования на МИС с последующей постановкой ИФА; для выявления незначительных объемов проб и учета реакции в реальном времени возможно применение МГА и ППР.

Цель. Определить границы природного очага Крымской геморрагической лихорадки (КГЛ) в Российской Федерации на современном этапе, уточнить спектр основных резервуаров и переносчиков возбудителя КГЛ, оценить лоймопотенциал природного очага. Материалы и методы. Использованы материалы эпидемиологического и эпизоотологического мониторинга природного очага КГЛ, методы эпидемиологического и эпизоотологического анализа, молекулярно-генетический и картографический метод. Обработку полученных данных проводили с использованием пакета программ Microsoft Office Excel 2010. Результаты. Научно обоснована единая целостность полупустынно-степного природного очага КГЛ, занимающего на современном этапе обширную территорию юга европейской части России площадью 831 тыс. км2. Четко прослеживается расширение ареала возбудителя КГЛ с вовлечением в эпидемический процесс новых административных районов, выраженная тенденция смещения границ очага в северном направлении. Отмечается рост лоймопотенциала природного очага. Основной резервуар и переносчик вируса Крымской-Конго геморрагической лихорадки — клещ Hyalomma marginatum. В природном очаге преобладающим генотипом является «Европа-1». Заключение. Необходимо совершенствовать тактику эпидемиологического надзора за КГЛ с применением современных научно-обоснованных подходов, одним из которых является автоматизированная прогнозно-моделирующая система, позволяющая на основании многофакторного анализа предикторов, влияющих на интенсивность эпидемических проявлений данной инфекции, количественно прогнозировать эпидемиологическую ситуацию по КГЛ в целом и по отдельным субъектам юга России.

Цель. Оценка популяционного иммунитета к гриппу накануне эпидемического сезона 2017-2018 и характеристика вирусов гриппа, выделенных в данном сезоне от людей с тяжелым течением заболевания и от лиц, привитых осенью 2017. Материалы и методы. Исследование сывороток крови в реакции торможения гемагглютинации. Выделение изолятов вирусов гриппа. Их антигенный и генетический анализ. Результаты. Накануне эпидемического сезона от 33 до 47% сывороток крови, собранных в разных регионах РФ, имели защитные титры антител к вакцинным сезонным штаммам вируса гриппа А. К вирусу В/Victoria защитные титры имели 24-30% обследуемых. В эпидемическом сезоне 2017-2018 нами выделено 87 изолятов вирусов гриппа А и В. Штаммы A(H1N1)pdm09 вошли в кладу 6В.1, штаммы B/Yamagata — в кладу 3, а штаммы B/Victoria — в кладу 1А; по антигенным свойствам они не отличались от вакцинных штаммов соответствующих подтипов. Изоляты A(H3N2) отнесены к кладе 3С.2а, антигенная характеристика которой затруднена. Выявлен один штамм А(H1N1)pdm09 с аминокислотной заменой H275Y в нейраминидазе, резистентный к осельтамивиру. Все остальные штаммы были чувствительны к ингибиторам нейраминидазы. Заключение. Иммунизация от гриппа вакциной эффективной против циркулирующих штаммов и лечение антинейраминидазными препаратами при первых клинических проявлениях заболевания являются эффективными средствами защиты населения.

Цель. Разработка полусинтетической питательной среды, обеспечивающей получение максимального количества капсульного полисахарида (КПС). Материалы и методы. В работе использовали штамм 521 S. pneumoniae серотипа 23F. Культивирование проводили в пробирках с 10 мл полисинтетической питательной среды определенного состава. Количество полисахарида в пробах определялось с помощью ракетного иммуноэлектрофореза. Построение моделей и сравнение влияния различных компонентов осуществлялось согласно методике, указанной в учебном пособии. Расчет коэффициентов уравнения и оценка адекватности самих уравнений проводился с применением пакетов RStudio версии 1.0.153. Результаты. В результате серии экспериментов были вычислены коэффициенты уравнений регрессии, оценена их значимость и построены модели зависимости продукции биомассы и КПС в зависимости от состава питательной среды. Для решения поставленной задачи был проведен эксперимент согласно методу Бокса-Уилсона. В качестве оптимизируемых параметров были выбраны концентрации пептона и глюкозы. Величина шага ΔS_i в направлении увеличения градиента рассчитывалась, исходя из коэффициентов регрессионного уравнения. Одновременно с этим определялся точный характер зависимости. Оптимальные расчетные концентрации пептона и глюкозы, при которых образование КПС максимально, составляют 32,6 и 12,1 г/л соответственно. При этом прогноз выхода полисахарида составляет 239 мг/л. Заключение. С помощью метода дробного факторного эксперимента были получены модели зависимости количества биомассы S. pneumoniae и его капсульного полисахарида от состава питательной среды. Были найдены оптимальные концентрации компонентов среды, которые позволяют увеличить по сравнению со стандартной прописью уровень образования биомассы на 10%, а КПС — в 1,5 — 2 раза.

Varicella Zoster Virus (VZV) — высоко контагиозный вирусный агент семейства Herpesviridae, обладающий строгой видовой специфичностью и вызывающий два различных заболевания — ветряную оспу, преимущественно у детей, и опоясывающий герпес — чаще у пожилых людей. Получение дополнительных сведений о жизненном цикле вируса, его биологии, патогенетических особенностях вызываемых им осложнений будет способствовать появлению более совершенных методов диагностики и профилактики, разработке новых экспериментальных подходов, позволяющих изучать врожденные и адаптивные механизмы иммунной защиты при VZV-инфекции.

Во многих странах мира, несмотря на высокий уровень вакцинации населения, увеличилось число вспышек коклюша во всех возрастных группах. MLST, MLVA и CGH исследования выявили несоответствие генотипов циркулирующих штаммов B.pertussis генотипам вакцинных штаммов, вследствие адаптации бактерий к вакцинированному хозяину, что привело к снижению иммунитета и возникновению вспышек заболевания коклюшем. Мутации в генах, кодирующих основные факторы вирулентности, аллельный полиморфизм и редукция генома в циркулирующих штаммах B.pertussis являются основой адаптации патогена к иммунизированной популяции и зависят от типа вакцин, используемых для иммунизации популяции. В странах, использующих бесклеточную коклюшную вакцину, доминируют в настоящее время изоляты, содержащие генотипы: ptxА1-ptxС2- ptxР3-prn2- tcfA2-1-fim3-2 и ptxА1- ptxС2- ptxР3- prnА2- tcfA2- fim2-1- fim3-1, а использующих корпускулярную вакцину, доминируют изоляты генотипов ptxА1-ptxС1- ptxР1-prn1- tcfA2- fim2-2 fim3-1 и ptxА1- ptxС1- ptxР1- prn2- tcfA2- fim2-1- fim3-1. Необходимо проведение постоянного мониторинга генотипов циркулирующих штаммов B.pertussis для своевременного выявления доминирующего генотипа и его использования в иммунизационной программе в сочетании с вакцинными штаммами B.pertussis.

Для межэпидемических периодов природно-очаговых сапронозов характерны различные способы сохранения жизнеспособности возбудителей в наземных паразитарных системах, связанные с различными адаптационными стратегиями, необходимыми для сохранения популяции. В отличие от спорообразующих бактерий, возбудители сапронозов используют устойчивые клеточные формы — жизнеспособное, но некультивируемое состояние (VBNC) и персистенцию. Реализация этих стратегий обусловлена влиянием различных стрессорных факторов среды обитания и характеризуется снижением метаболизма, изменением морфологии и физиологии бактериальной клетки, прекращением ее репликации. Важно, что устойчивые формы клеток сохраняют вирулентность и при наступлении благоприятных условий вновь трансформируются в активные вегетативные формы. Открытие в последние годы генетических модулей бактериальных токсин-антитоксиновых систем позволило раскрыть сложные регуляторные молекулярные механизмы сохранения патогенного потенциала устойчивых форм возбудителей природно-очаговых сапронозов в межэпидемические периоды.

Цель. Получение гибридом, продуцирующих специфические моноклональные антитела к антигенам Burkholderia mallei и Burkholderia pseudomallei. Материалы и методы. В работе использовали микробные культуры из Государственной коллекции микроорганизмов филиала 48 ЦНИИ Минобороны России (г. Киров); мыши линии BALB/c. Гибридизацию В-лимфоцитов и миеломных клеток SP2/0-Ag14 проводили по методике G.Kohler и C.Milstein в модификации De St.Fazekas и D.Scheidegger. Исследование специфической активности иммунных сывороток, супернатантов гибридом и асцитических жидкостей, а также оценку диагностических возможностей моноклональных антител проводили методом иммуноферментного анализа. Результаты. В результате проведенных гибридизаций получены и охарактеризованы гибридомы-продуценты моноклональных антител к специфическим антигенам возбудителей сапа и мелиоидоза. Полученные гибридомы являются активными и стабильными антителопродуцентами при многократном пассировании in vitro и in vivo. Получены асцитические жидкости, из которых выделены иммуноглобулины. Проведен выбор антител, обеспечивающих наибольшую чувствительность и специфичность иммуноферментного анализа. Заключение. Моноклональные антитела, продуцируемые полученными гибридомами, планируется использовать для конструирования иммунобиологических препаратов.