Том 86, № 3 (2009)

Aim. To study main biologic characteristics of C.diphtheriae strains circulating in North-West Region of Russia for the last 15 years. Materials and methods. Six hundred and fifty strains of C.diphtheriae isolated from ill persons and carriers in Saint-Petersburg, Leningrad region and Vologda region at various periods of time were studied. Identification of an infectious agent was performed according to methodic guidelines MU 4.2698-98. IHA-chromatographic test (ICS-test) on the basis of MKA, polymerase chain reaction, determination of adhesive activity and susceptibility to antibiotics were performed. Results. In recent years, circulation of C.diphtheriae strains with biologic characteristics similar to that observed in strains isolated during diphtheria epidemic and differed from that observed in strains isolated during the period of low incidence. Proportion of strains with «silent» gene between non-toxic in Elek-test C.diphtheriae increased. Decreasing of susceptibility to the range of antibiotics is observed in recent years. Conclusion. Revealed features of biologic characteristics of diphtheria agent circulating in post-epidemic period should be accounted during epidemiologic surveillance for diphtheria and choice of treatment of the infection.

Цель. Изучение эффективности современных фторхинолонов при экстренной профилактике и лечении экспериментального сапа. Материалы и методы. Золотистых хомячков обоего пола массой 80 — 100 г подкожно заражали двухсуточной агаровой культурой Burkholderia mallei (штамм Ц-5) в дозе 100 ЛД 50. Коммерческие препараты фторхинолонов 2 — 4 поколений: спарфлоксацин (Спарфло, Индия), гемифлоксацин (Фактив, Россия), моксифлоксацин (Авелокс, Германия), пефлоксацин (Абактал, Словения), левофлоксацин (Таваник, Германия), левофлоксацин (Элефлокс, Индия), ломефлоксацин (Ломефлокс, Индия), офлоксацин (Россия). Экстренная профилактика — через 3 часа после заражения в течение 10 суток, лечение — через 24 часа, продолжительность — 15 суток. Суточную дозу пефлоксацина, ципрофлоксацина, офлоксацина вводили в 2 приема через 12 часов, остальные препараты — 1 раз в сутки. Результаты. Все исследованные препараты, за исключением ломефлоксацина, высокоэффективны при экстренной профилактике и лечении экспериментальной сапной инфекции и обеспечивают 80 — 100% защиты. Заключение. Фторхинолоны: спарфлоксацин, левофлоксацин, моксифлоксацин, гемифлоксацин высоко эффективны в опытах in vivo в отношении возбудителя сапа. Они перспективны для разработки схем экстренной профилактики и лечения сапной инфекции у человека.

Цель. Изучение влияния доступности кислорода, наличия в ростовой среде глюкозы на адгезивные и инвазивные свойства бактерий псевдотуберкулеза, а также их устойчивости к тепловому шоку при резком повышении температуры от 8 до 37°С. Материалы и методы. Yersinia pseudotuberculosis выращивали на питательном бульоне с или без глюкозы при 8°C и двух режимах аэрации — при интенсивном перемешивании (180 об./мин) и в стационарных условиях (без перемешивания). Адгезивную и инвазивную активность бактерий изучали на модели культуры клеток человека HeLa. Влияние температурного стресса на рост бактерий определяли из кривых роста, построенных по количеству колониеобразующих клеток. Морфологию исследовали с помощью электронной микроскопии. Результаты. Показано, что культивирование Y.pseudotuberculosis при 8°C в условиях низкой аэрации увеличивает их адгезивную и инвазивную активность, а также повышает устойчивость бактерий к тепловому стрессу. Добавление глюкозы в ростовую среду независимо от режима аэрации уменьшает инвазивность бактерий псевдотуберкулеза. Заключение. Недостаток кислорода при низкой температуре роста способствует увеличению патогенного потенциала Y.pseudotuberculosis. Полученные данные представляют интерес для решения практических задач, связанных с разработкой мер профилактики псевдотуберкулеза, а также с переработкой и хранением пищевых продуктов.

Цель. Исследование протективной активности рекомбинантной конструкции белка теплового шока с липополисахаридом (ркБТШ-ЛПС) против S.typhimurium: ркБТШ-ЛПС как таковой и ее вариантов, в которых был разрушен белок или связан ЛПС. Планировалось также изучение способности ркБТШ-ЛПС взаимодействовать с TLRs, экспрессированных на перевиваемых клеточных линиях. Материалы и методы. Белым беспородным мышам вводили ркБТШ-ЛПС; конструкцию, обработанную РМВ для связывания ЛПС рк(БТШ-ЛПС)РМВ; конструкцию, в которой белок был подвергнут кипячению в течение 30 минут рк(БТШ-ЛПС)К; ЛПС (E.coli K-235); полимиксин В (РМВ) . Через 24 ч после однократного или последнего введения ркБТШЛПС мышей заражали S.typhimurium 415 внутрибрюшинно в 0,5 мл физиологического раствора в дозе 63 LD 50/мышь. Титр антител к ЛПС S.typhimurium определяли в ИФА. Результаты. Продемонстрировано, что ркБТШ-ЛПС при введении мышам за 24 часа до заражения индуцирует резистентность к S.typhimurium инфекции. Защита формировалась после трехкратного введения 10 мкг/мышь или одной инокуляции 100 мкг/мышь ркБТШ-ЛПС. Иммунизированные мыши выживали в 40 — 80% при 90% гибели в контроле. Разрушение БТШ при кипячении конструкции отменяло протективный эффект. После связывания ЛПС РМВ защитные свойства ркБТШ-ЛПС сохранялись, но выявлялись только при многократном введении 10 мкг/мышь этого препарата. ЛПС Е.coli в дозе 0,0266 мкг/мышь и РМВ не влияли на течение S.typhimurium инфекции у мышей. Заключение. Показано, что ркБТШ-ЛПС эффективно защищает мышей от бактериальной инфекции S.typhimurium с помощью активации врожденного иммунитета; рассмотрен один из возможных механизмов такой защиты через взаимодействие с TLRs 2 и 4. Требует дальнейшего изучения, какие еще механизмы врожденного иммунитета могут активировать ркБТШЛПС.

Цель. Разработка инфекционно-токсической модели чумы мышей и оценка перспектив ее использования для отбора новых вакцинных препаратов. Материалы и методы. Клетки вирулентных штаммов Yersinia pestis 231 и 231 FI с целью их активации инкубировали в гемолизатах эритроцитов крови человека и использовали наряду с суспензиями культур в изотоническом растворе NaСl для подкожного заражения интактных и иммунных мышей. Результаты. Показано, что активированные культуры характеризуются максимальной вирулентностью (ЛД 50=1—3 КОЕ) и вызывают скоротечную инфекцию — средняя продолжительность жизни животных уменьшается на 1 — 3 дня (Р<0,01). Вакцинный штамм EV индуцирует у мышей при традиционной форме заражения (суспензия в изотоническом растворе NaСl) напряженный антибактериальный иммунитет (индекс иммунитета 10 5), однако активированные (в гемолизатах эритроцитов) клетки штамма Y.pestis 231 преодолевали его (индекс иммунитета 10 2). Значения ЛД 5 0 Y.pestis 231 FI на иммунных и интактных животных составляли 3 м.к. (1 КОЕ), свидетельствуя об отсутствии у штамма EV способности создавать в макроорганизме антитоксический иммунитет. Заключение. Использование двух моделей инфекции позволит давать более адекватный прогноз эффективности вакцинных препаратов.

Цель . Оценить активность и безвредность полученного по стандартной технологии противосибиреязвенного внутривенного иммуноглобулина из плазмы крови человека в эксперименте. Материалы и методы . Плазма крови отобранных доноров, вакцинированных комбинированной сибиреязвенной вакциной, была исследована методом ИФА. Образцы плазмы с повышенным титром противосибиреязвенных антител объединяли в производственную загрузку и фракционировали по стандартной технологии этанолом при отрицательных температурах. Лекарственную форму внутривенного иммуноглобулина получали по стандартной технологии кислотно-ферментативного гидролиза. Результаты . Испытанная медицинская технология фракционирования иммунной плазмы крови доноров обеспечила концентрирование противосибиреязвенных антител в 4 - 8 раз. Целевой продукт содержал 5% белка, был апирогенен, нетоксичен, термостабилен, электрофоретически однороден, имел рН 6,65 и отвечал требованиям, предъявляемым к производственным сериям препарата внутривенного иммуноглобулина человека. Заключение . Защитные свойства экспериментального человеческого противосибиреязвенного иммуноглобулина были сопоставимы с контрольным препаратом - лошадиным противосибиреязвенным внутримышечным иммуноглобулином.

Цель. Сопоставление результатов идентификации микобактерий бактериологическими методами и методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Материалы и методы. Были исследованы 280 культур микобактерий, выделенных из респираторных образцов и идентифицированных бактериологическими методами и ВЭЖХ. Результаты. Установлено, что при использовании ВЭЖХ имела место высокая степень совпадения с результатами микробиологических методов идентификации микобактерий: при определении M.tuberculosis complex - 97,0 %, медленнорастущих нетуберкулезных микобактерий (НТМ) - 95,3%, быстрорастущих НТМ - 96,2% (в целом 96,1%). При этом результаты идентификации микобактерий методом ВЭЖХ удается получить в значительно более короткие сроки (в течении 24 часов). Заключение. Метод ВЭЖХ может быть рекомендован для идентификации микобактерий в бактериологических референс-лабораториях.

Цель . Оценить чувствительность и специфичность фосфоресцентных иммуночипов, разработанных на основе микропланшетного фосфоресцентного анализа (ФОСФАН) для определения IgM и IgG к вирусу клещевого энцефалита (КЭ) в сыворотках крови пациентов, и сравнить показатели ФОСФАН и методов лантанидной иммунофлуоресценции (ЛИФА) и твердофазного иммуноферментного анализа (ТИФА). Материалы и методы . Исследована 261 сыворотка крови, в том числе 155 проб от 74 пациентов с клиническим диагнозом КЭ, подтвержденным серологически выявлением IgM к вирусу КЭ. Сыворотки собраны в 2003 г. в Пермской области от людей, заболевших КЭ, а также от клинически здоровых доноров крови. Фосфоресцентный иммуночип представлял собой 96-луночный микропланшет, на дне лунок которого были сформированы 4 активные микрозоны, позволяющие улавливать специфические IgM или IgG к вирусу КЭ. Иммунореакцию проявляли конъюгатом стрептавидина c Pt копропорфирином. Интенсивность фосфоресценции измеряли при сканировании дна предварительно высушенной микролунки приборомсканером ИФИ-02. Результаты . При выявлении в пробах IgM и IgG к вирусу КЭ продемонстрирована сопоставимая чувствительность и специфичность методов ФОСФАН, ЛИФА и ТИФА. При анализе сывороток с низким титром специфических IgM методы ФОСФАН и ЛИФА были более чувствительными. Заключение . ФОСФАН можно использовать для ранней серологической диагностики острого КЭ, а также для оценки уровня антител при контроле эффективности лечения длительно болеющих пациентов и уровня протективного иммунитета у вакцинированных.

Цель. Разработка ускоренного метода идентификации микобактерий на основе лазерной флюоресценции. Материалы и методы. Исследованы особенности лазерно-индуциро ванной флюоресценции 19 видов бактерий, в том числе 17 видов микобактерий. Идентификация микроорганизмов проведена с помощью измерения спектрально-флюоресцентной характеристики. Результаты. Создана библиотека спектрально-флюоресцентных характеристик микобактерий в различных концентрационных и ассоциативных соотношениях, которая явилась основой базы данных для идентификации микобактерий лазерно-флюоресцентным методом. Разработаны принципы диагностического алгоритма индикации и дифференциации микобактерий на основе этого метода. Для повышения интенсивности флюоресценции микобактерий показан эффект мирамистина, учет рассеивающих характеристик среды для корректировки спектральных характеристик микобактерий и обработка результатов исследования факторным анализом. При этом эффективность метода составляет 80—90%. Заключение. Разработанные принципы ускоренной идентификации микобактерий и их ассоциаций на основе лазерно-флюоресцентного метода экспериментально обоснованы и апробированы на неизвестных культурах микобактерий и объективно доказывают возможность использования этого метода для экспресс-идентификации микобактерий комплекса M.tuberculosis и нетуберкулезных микобактерий.

Цель. Изучение частоты распространения гемолитических эшерихий в составе микробиоценозов толстой кишки 501 взрослого человека, проживающего в г. Ростов-на-Дону. Материалы и методы. Проведено сопоставление результатов микробиологического исследования количественного и качественного состава микробиоценоза толстой кишки у 248 человек с результатами их УЗИ обследования функционального состояния билиарного тракта. Результаты. Выявлена статистически достоверная зависимость частоты встречаемости гемолитических эшерихий в составе микрофлоры толстой кишки от наличия дисфункциональных нарушений билиарного тракта (дисфункция желчевыводящих путей). Установлено различие в характере микроэкологических изменений в толстой кишке людей с этой патологией и лиц, получавших антибиотики широкого спектра действия. Обнаружено, что основным отличием дисбиоза толстой кишки людей с дисфункцией билиарного тракта является наличие в составе микрофлоры этого отдела значительного количества гемолитических эшерихий. Заключение. Выдвинуто предположение о возможной роли функциональных расстройств билиарного тракта как первопричине микроэкологического дисбаланса.

Цель . Оценка острой хронической токсичности и местно-раздражающего действия субстанции антибактериального пептидного комплекса (АБК), выделенного из препаратов интерферона. Материалы и методы . Доклиническая оценка субстанции АПК проведена в соответствии с «Требованиями к доклиническому изучению общетоксического действия новых фармакологических веществ». Результаты . В серии экспериментов показано, что при однократном введении мышам и длительном (в течение 30 дней) крысам раствора субстанции АПК в максимально возможных дозах внутрижелудочно и ректально гибели животных не наблюдалось, патологических изменений при патоморфологическом и гистологическом исследованиях органов экспериментальных животных не обнаружено. Оценка состояния иммунной системы показала, что введение раствора исследуемой субстанции в течение месяца в дозе, в 25 раз превышающей терапевтическую, приводит к стимуляции фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови. Заключение . Оценка острой и хронической токсичности показали, что субстанция АБК, синтезируемого вирусиндуцированными донорскими лейкоцитами в процессе интерфероногенеза, хорошо переносится экспериментальными животными, не оказывает общетоксического действия на их организм и обладает иммуномодулирующей активностью.

В настоящее время особый интерес представляет новый класс регуляторных молекул - микроРНК. Накоплено много данных о функции этих молекул в регулировании иммунного ответа. В данном обзоре освещены функции некоторых молекул микроРНК (miRNA-146, miRNA-155, miRNA-223), участвующих в регуляции механизмов врожденного иммунитета, таких как передача сигнала с рецепторов и созревание, дифференцировка и пролиферация клеток врожденного иммунитета. Необходимо отметить перспективность этих молекул для создания лекарственных средств для коррекции нарушений врожденного иммунитета.

В 1970-е годы энтеровирус типа 71 (ЭВ71) вызвал несколько эпидемий полиомиелитоподобного заболевания с тяжелыми неврологическими осложнениями. В последние 20 лет ЭВ71 стал причиной ряда крупных вспышек и эпидемий ящуроподобного заболевания с неврологическими осложнениями в странах Юго-Восточной Азии. Последняя эпидемия ЭВ71 инфекции в Китае в 2008 году насчитывала более 60 000 случаев, из них 38 — с летальным исходом. В данном обзоре рассматриваются некоторые аспекты эпидемиологии и лабораторной диагностики заболеваний, вызываемых ЭВ71.