Том 88, № 1 (2011)

Цель. Сравнительный анализ видового разнообразия выборки коагулазоотрицательных стафилококков (КОС), изолированных в стационарах различного профиля. Материалы и методы. Для идентификации 102 штаммов КОС использованы биохимические системы НПО «Диагностические системы», VITEK® 2 Compact и BBL™ Crystal™ и секвенирование последовательностей фрагментов генов tuf и gap. Результаты. Показана бóльшая дифференцирующая способность генотипирования в видовой идентификации стафилококков по сравнению с фенотипическими методами. В выборке штаммов КОС выявлены бактерии 6 видов: S.epidermidis, S.haemolyticus, S.hominis, S.warneri, S.capitis и S.pasteuri. Наибольшее видовое разнообразие отмечено для штаммов из родовспомогательных учреждений Нижнего Новгорода и НЦ акушерства, гинекологии и перинатологии. Изоляты, выделенные из крови пациентов в НЦ сердечно-сосудистой хирургии им. А.Н.Бакулева, в основном, представлены S.epidermidis и S.haemolyticus. Прослежено различие в видовом разнообразии КОС, возбудителей конъюнктивита новорожденных и омфалита. Заключение. Два вида КОС: S.epidermidis и S.haemolyticus представляют особую опас- ность как внутрибольничные патогены и в стационарах для взрослых, и в родовспомогательных учреждениях. В отделениях новорожденных, кроме того, необходимо контролировать бактерии видов S.warneri, S.pasteuri, S.capitis.

Цель. Выявление бактериоцинов и фагов у патогенных бактерий рода Burkholderia и определение диапазона их специфичности. Материалы и методы. В работе использовали 60 штаммов B.pseudomallei, 11 штаммов B.mallei, 18 штаммов B.сepacia, 5 штаммов B.thailandensis, 3 штамма B.gladioli. Бактериоцинную активность определяли двуслойным методом. Для накопления бактериоцинов штаммы-продуценты выращивали в питательном бульоне, инактивировали хлороформом и водную фазу наносили на поверхность культур индикаторных штаммов в полужидком агаре. Фаги выделяли методом агаровых слоев по Грациа. Микроскопирование фаговых частиц проводили в электронном микроскопе JEM —100 SX при инструментальном увеличении 50—60 тыс. Результаты. Показано, что все исследованные клинические и музейные штаммы патогенных буркхольдерий — B.pseudomallei, B.сepacia, B.thailandensis, B.gladioli (97 штаммов) продуцируют бактериоцины и бактериофаги. Диапазон их ингибирующей активности включает как штаммы собственных видов, так и гетерологичные буркхольдерии, в том числе B.mallei, которая не имеет ни бактериоцинов, ни фагов. Впервые выявлено наличие бактериоцинов в штаммах B.pseudomallei. Обнаружен фаг B.сepacia В623, эффективно лизирующий B.mallei и не размножающийся на культурах B.pseudomallei, пригодный для дифференциации этих микроорганизмов. Высокая чувствительность к фагам гетерологичных буркхольдерий установлена у B.thailandensis. Набор штаммов этого вида позволяет выявлять фагопродукцию практически у всех лизогенных культур Burkholderia. Заключение. Патогенные буркхольдерии, являющиеся обитателями внешней среды (B.pseudomallei, B. сepacia, B.thailandensis, B.gladioli), обладают факторами антагонизма, утраченными в процессе эволюции B.mallei — строго патогенного вида.

Цель . Оценка генетического разнообразия циркулировавших на территории России вариантов вируса гриппа А/H1N1(sw2009), изучение патогенности вируса для человека и потенциальной чувствительности к противовирусным препаратам. Материалы и методы. Выполнено секвенирование фрагментов ПЦР генома вирусов гриппа, обнаруженных в образцах прижизненного и посмертного материала от 436 пациентов. Получены последовательности 4 полных геномов вирусов гриппа A/H1N1(sw2009). Проведен филогенетический анализ. Результаты. Показана высокая гомология (98,9—100%) вирусов по генам гемагглютинина (HA) и нейраминидазы (NA) и их аминокислотным последовательностям (1,3 и 1,4% соответственно). Различие остальных белков не превышало 1,1%. Зафиксировано разнообразие вирусов в позиции 222 в области связи НА с рецепторами и единичный полиморфизм в ряде внутренних белков. Известные мутации устойчивости к тамифлю и арбидолу обнаружены не были. Все вирусы резистентны к ремантадину. Маркеры высокой патогенности не обнаружены. Заключение. Высокая гомология вирусов гриппа свидетельствует о низком уровне антигенных различий, однако в популяции вирусов имеются варианты с различной степенью приспособленности к организму человека и разным сродством к рецепторам верхних и нижних дыхательных путей, что может обусловливать их различную трансмиссивность.

Цель. Изучение противовирусной активности экстрактов, выделенных из базидиальных грибов, в отношении штаммов вируса гриппа. Материалы и методы. Определяли противовирусную активность экстрактов базидиальных грибов в отношении вируса гриппа A/chicken/Kurgan/05/2005 (H5N1) в экспериментах in vitro. Определяли изменение инфекционности пандемического штамма вируса гриппа А/Moscow/226/2009 (H1N1)v под влиянием экстрактов базидиальных грибов в экспериментах in vitro и in vivo. Результаты. Было исследовано более 70 водных экстрактов базидиальных грибов, 10 из них показали способность подавлять инфекционность штамма вируса гриппа A/chicken/Kurgan/05/2005 (H5N1) в культуре клеток MDCK. Кроме того, некоторые исследованные экстракты уменьшали инфекционность пандемического штамма вируса гриппа А/ Moscow/226/2009 (H1N1)v в клетках MDCK и подавляли его продукцию в легких инфицированных мышей. Заключение. Высокая противовирусная активность экстрактов из базидиальных грибов в отношении вируса гриппа перспективна для разработки препаратов, обладающих профилактическим и лечебным эффектом.

Цель. Экспериментальная оценка протективного эффекта Иммуновак-ВП-4 в отношении вируса гриппа птиц H5N2. Материалы и методы. Иммунизацию мышей проводили поликомпонентной вакциной Иммуновак- ВП-4 подкожно или мукозально (интраназально, перорально и комбинированным назально-пероральным методом). Иммунизированных мышей заражали интраназально вирусом гриппа H5N2, адаптированным для мышей. Учитывали гибель мышей в опытных и контрольных (интактных) группах ежедневно в течение 14 суток. Определяли процент гибели и выживаемость мышей. В сыворотках мышей этих же групп определяли уровень цитокинов иммуноферментным методом. Результаты. При трехкратном подкожном введении вакцины в дозе 20 мкг и последующем интраназальном заражении вирусом гриппа птиц H5N2 выживала половина опытных мышей. При однократной подкожной иммунизации дозой 400 мкг выживало 80±12,6% мышей. После трехкратной интраназальной и комбинированной интраназально-пероральной иммунизации, как и при трехкратной подкожной, выживала половина взятых в опыт мышей. В контрольных группах погибало 90—100% мышей. При этих же методах иммунизации в сыворотке мышей отмечали увеличение количества IL-6, IL-12, IL-5, IFNγ. Заключение. Получены данные о значительном протективном эффекте при иммунизации Иммуновак-ВП-4 в отношении вируса гриппа птиц H5N2 . При интраназальном заражении вирусом гриппа при этих методах введения Иммуновак-ВП-4 активировал назоассоциированную лимфоидную ткань, обеспечивающую первую линию защиты в месте входных ворот гриппозной инфекции, что свидетельствует о необходимости дальнейшего изучения этого препарата при разработке стратегии неспецифической профилактики гриппозной инфекции.

Цель. Получение моноклональных антител (МКА) к гликопротеину Е1 вируса краснухи, оценка иммунохимических свойств и возможности использования флуоресцирующих МКА для быстрой идентификации вируса краснухи. Материалы и методы. Использованы штаммы вируса краснухи С-74 (Москва), вакцинные штаммы «Орлов» (С.-Петербург), Wistar RA 27/3 (США), а также штамм Judith (Германия). Вирусные антигены получали, применяя диплоидные клетки Л-68 и клеточные линии ВНК-21-F и Vero E6. МКА получали общепринятым методом и определяли их изотип. Проводили иммуноблоттинг, ИФА, РТГА и реакцию иммунофлуоресценции. Результаты. Получено 5 МКА: Кх-252.1, Кх-347.2, Кх-183.3, Кх-214.4, Кх-187.5 к антигенам штамма С-74 вируса краснухи. Определён изотип полученных МКА и охарактеризована их иммунореактивность с нативными и денатурированными антигенами других штаммов: «Орлов», Wistar Ra 27/3, Judith. По данным ИФА все МКА имели высокие титры взаимодействия с гликопротеином Е 1 вируса краснухи от 1/1600 до 1/200 000. По данным иммуноблоттинга — только 4 МКА (Кх-252.1, Кх-347.2, Кх-183.3, Кх-214.4). В РТГА МКА ингибировали гемагглютинирующую активность штамма Judith в титре от 1/16 до 1/1024. ФИТЦ коньюгат МКА Кх-347.2 (наиболее чувствительный вариант) позволяет выявлять антиген вируса краснухи в инфицированных клетках Vero E6 через 24 часа с момента инфицирования, а ФИТЦ коньюгаты трёх МКА (Кх-183.3, Кх-214.4, Кх-187.5) — через 72 часа. Заключение. Перспективно использовать ФИТЦ коньюгаты МКА для индикации гликопротеина Е1 вируса краснухи в инфицированных клеточных культурах и назофарингеальных мазках.

Цель. Выявление с помощью ПЦР генов вирулентности у клинических штаммов Escherichia coli O1. Материалы и методы. Исследованы 120 штаммов E.coli O1, выделенных из испражнений пациентов с ОКИ (45) и практически здоровых лиц (75). Использован метод ПЦР с праймерами к rfb и fliC генам, контролирующим синтез О- и Н-антигенов эшерихий соответственно, а также к 14 генам патогенности: pap, aaf, sfa, afa, eaeА, bfpA, ial, hly, cnf, stx1, stx2, lt, st и aer. К1-антиген определяли набором Пасторекс Менинго В/E.coli O1 (Bio-Rad). Результаты. У всех штаммов обнаружен rfb ген, контролирующий синтез О-антигена серогруппы О1, fliC ген, контролирующий синтез Н7 и К1 антигенов. Антигенная структура включала E. coli О1:К1:Н-:F7. Не были выявлены гены aaf1, sfa, afa, eaeА, bfpA, ial, hly, cnf, stx1, stx2, lt, st. Гены pap и aer обнаружены у всех штаммов, независимо от наличия ОКИ. Заключение. Показано, что штаммы E.coli О1:К1:Н-:F7 не имеют генов патогенности, присущих диареегенным эшерихиям. По на- личию генов pap и aer они могут быть отнесены к уропатогенным (UPEC) или патогенным для птиц (APEC). Факторы вирулентности необходимо определять при анализе этиологической роли эшерихий как возбудителей кишечных инфекций.

Цель. Оценить уровень продукции коклюшного токсина (КТ) вакцинными и выделенными от больных коклюшем штаммами Bordetella pertussis. Материалы и методы. Содержание КТ в супернатантах культур микробных клеток 3 вакцинных штаммов и 25 штаммов Bordetella pertussis, выделенных от больных коклюшем в 2001—2005 гг., оценивали в иммуноферментном анализе с гамма-глобулиновыми фракциями сывороток кроликов к КТ в качестве иммуносорбента и в составе пероксидазных коньюгатов. Результаты. Уровень продукции КТ выделенными от больных штаммами варьировал от 3±0,5 до 64,8±12,2 нг/МОЕ/мл: у 9 штаммов в диапазоне от 3±0,5 до 9,4±2,1 нг/МОЕ/мл, у 7 штаммов в диапазоне от 10,5±1,8 до 18,4±2,6 нг/МОЕ/мл и у 9 штаммов в диапазоне от 23,6±4,5 до 64,8±12,2 нг/МОЕ/мл. Заключение. Выделенные от больных штаммы коклюшного микроба гетерогенны по уровню продукции КТ. Различия между штаммами по экспрессии КТ достигали 20-кратного уровня. Относительно низкие, средние и высокие уровни продукции КТ имели соответственно 9 (36%), 7 (28%) и 9 (36%) из 25 исследованных штаммов. Три вакцинных штамма имели близкие показатели токсинообразования, приближающиеся к показателям свежевыделенных штаммов с условно средним уровнем продукции КТ.

Цель. Изучение противовирусной эффективности анаферона детского в экспериментах на мышах, инфицированных пандемическим вирусом гриппа А(H1N1/09)v. Материалы и методы. В работе использовали штамм вируса гриппа A/California/07/2009(H1N1)v. Исследовали 3 группы мышей BALB/c, инфицированных интраназально вирусом гриппа. Первой группе перорально вводили раствор анаферона детского в течение 5 сут до и 8 сут после заражения, второй — перорально вводили тамифлю в течение 5 суток после заражения. Животным контрольной группы перорально вводили дистиллированную воду. Результаты. Показано, что анаферон детский при лечебно-профилактическом введении мышам, интраназально зараженным 100% инфицирующей дозой штамма вируса гриппа A/California/07/2009 (H1N1)v, оказывает противовирусное действие, снижая продукцию вируса гриппа в легких инфицированных мышей в 10 раз относительно контрольной группы через 4, 6 и 8 сут после инфицирования. Заключение. Применение анаферона детского до и после заражения вирусом гриппа A(H1N1/09)v было не менее эффективным, чем применение тамифлю после заражения.

Цель. Оценить эффективность терапии с использованием иммуномодулятора Суперлимф при урогенитальных хламидийных и микоплазменных инфекциях. Материалы и методы. Обследованы 50 мужчин и 36 женщин в возрасте 22—47 лет, страдающих хроническими урогенитальными заболеваниями: цервецит и вульвовагинит (женщины), простатит (мужчины). Использованы ПЦР и бактериологический метод для установления диагноза микст-инфекции и состояния микробиоты. Пациенты были разделены на 3 группы с учетом схемы лечения. 20 пациентов (1 группа) — базисная терапия (джозамицин); 48 пациентам назначали перед терапией джозамицином иммуномодулятор (суппозитории) (2 группа); 18 пациентов получали джозамицин и иммуномодулятор одновременно (3 группа). Результаты. До проведения терапии как патогены встречались Chlamydia trachomatis, Ureaplasma urealyticum, Gardnerella vaginalis и Mycoplasma genitalium в различных сочетаниях в 30—35% случаев. После терапии джозамицином (1 группа) и одновременного назначения джозамицина и иммуномодулятора (3 группа) было отмечено значительное подавление роста и элиминация не только основных возбудителей, но и представителей микробиоты. Применение иммуномодулятора (2 группа) в ряде случаев приводило к элиминации не только основных патогенов, но и сопутствующей условно патогенной микрофлоры. Заключение. Микробиологический мониторинг выявил эффективность терапии урогенитальных хламидийных и микоплазменных инфекций, протекающих на фоне дисбиотических нарушений микробиоты УГТ, при назначении иммуномодулятора Суперлимф в 97% случаев.

Стафилококки обладают способностью к формированию хронических (персистентных) инфекций, которые развиваются в нативных тканях и на инвазивных материалах, искусственно внедряемых в организм. Такие инфекции связаны с образованием биопленок. В обзоре дается определение биопленок, описываются факторы, принимающие участие в их формировании, дается характеристика адаптивной устойчивости стафилококковых биопленок, которая обеспечивает их длительное существование в организме хозяина. Описана генетическая организация и регуляция полисахаридных и белковых биопленок стафилококка. Обсуждается стратегия профилактики и лечения стафилококковых биопленочных заболеваний.