Том 87, № 2 (2010)

Цель. Анализ генетической гетерогенности штаммов Pseudomonas aeruginosa, выделенных из внутри- и внебольничной среды. Материалы и методы. Для исследования генетического разнообразия 36 штаммов P.aeruginosa были использованы плазмидный анализ, амплификация с произвольными праймерами (RAPD) и ПЦР для выявления генов вирулентности algD, lasB, toxA, plcH, plcN, exoS, nan1 и nan2. Результаты. Эпидемически значимые штаммы были найдены среди различных экологических ниш. Показано, что эти факторы вирулентности могут иметь важное значение в патогенезе инфекционного заболевания. Заключение. Метод RAPD оказался эффективным для анализа изолятов P.aeruginosa. Количество исследуемых типируемых полос различалось между родственными изолятами для каждого произвольного праймера.

Цель. Исследовать особенности развития эпидемического процесса стрептококковой группы А инфекции среди детей 12—14 лет в ВДЦ «Орленок» (Туапсе), прибывших из разных регионов России. Материалы и методы . В исследовании использовали эпидемиологический (ретроспективный анализ заболеваемости детей ОРЗ, ангиной и скарлатиной), микробиологический (выделение и идентификация СГА) и молекулярно-биологические (пульс-электрофорез, анализ spe и emm генов) методы. Материалом исследования служили штаммы СГА, выделенные от больных и носителей. Результаты . На основании генотипирования установлено, что заболеваемость стрептококковой группы А инфекцией во вновь организованных детских коллективах была вызвана 2—3 эпидемически значимыми клонами, которые генотипически были гетерогенными. Заключение. Проведенные молекулярно-биологические исследования свидетельствуют о поликлональной структуре стрептококков группы А, обусловливающей особенности механизма развития эпидемического процесса.

Цель. Получение рекомбинантной атоксичной формы экзотоксина A Pseudomonas aeruginosa и оценка его протективных свойств при совместном введении с рекомбинантным белком F в эксперименте. Материалы и методы. Использовали генетические методы для получения делеционного варианта гена экзотоксина А P. aeruginosa, для трансформации — клетки Escherichia coli. Очистку белков осуществляли общепринятым методом. Для иммунизации использовали белых беспородных мышей, воспроизведение экспериментальной инфекции осуществляли при внутрибрюшинном введении живой вирулентной культуры синегнойной палочки штамма РА103. Результаты . Клонирован ген, кодирующий дефектную форму экзотоксина А P.aeruginosa, у которой отсутствовали 106 С-концевых аминокислотных остатков. Синтезированный рекомбинантный белок оказался нетоксичным и иммуногенным. Рекомбинантные варианты анатоксина А и белка F наружной мембраны P.aeruginosa совместно и в отдельности защищали животных от экспериментальной инфекции, вызываемой токсигенным штаммом PA103 синегнойной палочки. При этом наилучший протективный эффект наблюдался при совместной иммунизации обоими белками. Заключение. Исследуемые рекомбинантные анатоксин и OprF могут быть кандидатами для включения в состав вакцины для профилактики синегнойной инфекции.

Цель. Оценка свойств комплексов антигенов вакцинных штаммов Staphylococcus aureus при различных условиях культивирования. Материалы и методы. Вакцинные штаммы S.aureus (№№ 5, 9, 1986, 1991) выращивали в жидких питательных средах — полноценной и полусинтетической, а также на плотной питательной среде. Реакторное культивирование проводили в ферментере АНКУМ-2М. Комплексы антигенов получали методом водной экстракции инактивированной ацетоном биомассы стафилококка и изучали общепринятыми методами по содержанию белка и углевода, специфической активности по минимальной тор- мозящей дозе в РТПГА. Изучение острой токсичности препаратов проводили на беспородных мышах. Результаты. На примере штамма №1991, на основании определения выхода биомассы и полуфабриката антигенного комплекса — ацетонового порошка, а также продуктивности по накоплению биомассы отработана модель процесса реакторного культивирования в полноценной среде с отделением биомассы микрофильтрацией. Изучение комплексов антигенов, полученных из биомассы 4 штаммов при реакторном культивировании, в сравнении с выделенным из культур с плотной среды, выявило увеличение в них содержания белка и уменьшение содержания углевода при одинаковой специфической активности. Показано, что комплексы антигенов, приготовленные из культур, выращенных как в условиях реакторного культивирования, так и на плотной среде, нетоксичны. Заключение. Разработана новая технология получения стафилококкового комплекса антигенов, включающая реакторное культивирование вакцинных штаммов в полноценной среде с последующим выделением комплекса антигенов из биомассы, отделенной микрофильтрацией. Результаты исследования свидетельствуют о возможности использования разработанной технологии как при дальнейших исследованиях, связанных с бесклеточной стафилококковой вакциной, так и для получения стафилококкового компонента «Иммуновак»®

Цель. Оценка результатов вакцинации против кори и эпидемического паротита часто болеющих детей. Материалы и методы. Определяли содержание антител класса G к вирусам кори и эпидемического паротита с помощью наборов для ИФА. Всего было оттитровано 212 сывороток крови из 6 групп детей по 20—45 человек (мальчиков и девочек). В каждой группе были дети различного возраста. Кроме того, всем детям проводили исследования иммунологического статуса. Результаты. Установлено, что средние титры антител к антигенам вирусов кори и эпидемического паротита не изменялись в течение 10 лет. Более чем у 50% детей обнаружена корреляция между высокими или низкими титрами антител различной специфичности. Заключение. Частые заболевания детей обусловливают сложную регуляцию процесса превращения клеток памяти в продуценты антител против вирусов кори и эпидемического паротита.

Цель. Оценить антивирусную активность продуктов синтеза спорообразующего штамма Bacillus pumilus «Пашков» на модели энтеровирусной инфекции in vitro. Материалы и методы. Штамм В.pumilus «Пашков», выделенный из окружающей среды и идентифицированный общепринятыми методами. Клеточные культу- ры: Vero-к, Vero-ECC и Vero-E6. Энтеровирусы: полиовирус 1 типа, Коксаки В (1—6), ECHO-3 и ECHO-6. Определение инфекционной активности вируса проводили методом предельных разведений на культуре клеток Vero-E6 по цитопатогенному действию. Исследуемую культуральную жидкость (КЖ) получали путем центрифугирования и стерилизующей фильтрации биомассы штамма B.pumilus «Пашков», полученной при его выращивании в течение 72 часов на оптимизированной питательной среде. Цитотоксичность КЖ (хроническую, острую) и максимально переносимую дозу определяли по влиянию на жизнеспособность клеток Vero-E6, которую оценивали методом исключения витального красителя трипанового синего. Для определения антивирусной активности (АВ-активность) использовали две схемы воздействия: лечебную и профилактическую. Результаты. Наиболее чувствительными клеточными культурами оказались клетки Vero-ECС и Vero-E6. При определении АВ-активности защитный эффект выявлен во всех разведениях КЖ (сохранялся в течение 7 суток с момента инфицирования использованными дозами вируса). КЖ не обладала острой и хронической цитотоксичностью. Исследованный материал in vitro в клетках Vero-E6, инфицированных 4 типами энтеровирусов, оказывал антивирусную защиту и обладал профилактическим действием. Степень выраженности показателей зависела от типа энтеровируса, использованной дозы и разведения КЖ. Заключение. Впервые показана эффективная антивирусная активность КЖ штамма B.pumilus «Пашков», обладающая низкой цитотоксичностью в отношении клеточной культуры Vero-Е6 in vitro. Полученные данные открывают перспективу для создания лекарственного средства против энтеровирусных инфекций.

Цель. Клонировать в клетки Escherichia coli последовательность ДНК, кодирующую консервативный домен белка LigA Leptospira interrogans, и изучить антигенные свойства полученного химерного белка. Материалы и методы . Использовали штамм E.coli М15 [рREP4], рекомбинантную плазмиду pTT10, кодирующую целлюлозосвязывающий домен (CBD), эндонуклеазы рестрикции BamHI, BglI, BglII, XbaI, T4 ДНК-лигазу, РНКазу. Проводили молекулярное клонирование интересующего фрагмента гена ligA по стандартным протоколам, экспрессию гибридных генов в соответствии с протоколами фирмы «QIAGEN». Выделение и очистку белков проводили по оригинальной методике. Результаты. В клетки E.coli клонирован фрагмент, кодирующий иммуноглобулиноподобный домен 5 LigA. Получен эффективный штамм-продуцент химерного белка D5-CBD, состоящего из иммуноглобулиноподобного домена 5 LigA, глицинсеринового спейсера и целлюлозосвязывающего домена (CBD). Методом одностадийной очистки на целлюлозе получен высокоочищенный препарат белка D5-CBD. Изучена антигенная специфичность полученного химерного белка, показана возможность его использования в качестве маркера для разработки диагностической тест-системы на основе непрямого ИФА (нИФА). Заключение . При синтезе в клетках E.coli в составе химерного белка рекомбинантный домен LigA сохраняет антигенные свойства, присущие нативному белку. Полученные результаты подтверждают возможность использования рекомбинантного антигена D5-CBD в качестве маркера для разработки диагностических тест-систем на основе нИФА.

Цель. Определение влияния термолабильного энтеротоксина E.cloacae на уровень каспаз 3, 7, 10 в эксперименте. Материалы и методы. Апоптоз определяли у спленоцитов и клеток перитонеального экссудата мышей. Экспериментальную инфекцию создавали внутрибрюшинным введением живых бактерий и культуральной жидкости энтеротоксинпродуцирующего штамма Enterobacter cloacae. Результаты. В ходе исследования нами выявлено, что термолабильный энтеротоксин E.cloacae не одинаково влияет на процесс апоптоза указанных клеток: замедляет апоптоз спленоцитов и практически не влияет на перитонеальные фагоциты. Заключение. Апоптоз инфицированных клеток — это защитная реакция макроорганизма на появление инфекционного агента. Гибель клеток способствует быстрой элиминации возбудителя. Кроме того, гибель клеток путем апоптоза, а не некроза более благоприятна для бактерий, так как в этом случае не запускаются воспалительные реакции. В наших опытах термолабильный энтеротоксин E.cloacae оказывал антиапоптогенное действие на спленоциты мышей, что может быть ключевым звеном в патогенезе заболеваний, вызванных энтеротоксинпродуцирующими штаммами Enterobacter.

Цель . Изучение влияния экзометаболитов морских микроводорослей на размножение патогенных бактерий. Материалы и методы. Исследования проводили с альгологически чистыми культурами морских микроводорослей Phaeodactylum tricornutum, Chlorella minutissima, Chroomonas salina. В качестве модельных бактерий использовали штаммы Listeria monocytogenes 4b, Staphylococcus aureus, Salmonella typhimurium, характеризующиеся типичными культурально-морфологическими, биохимическими и антигенными свойствами. Культивиро- вание микроводорослей проводили в искусственной и естественной морской воде (соленость 32 0/ 00). Водоросли выращивали на модифицированной среде Гольдберга. Естественную морскую воду брали в разные сезоны года. Экзометаболиты были получены экстракцией культуральной жидкости, в которой росли микроводоросли, растворителями в порядке возрастания их полярности (гексан, бензол, этилацетат) в виде соответствующих фракций (ГФ, БФ, ЭАФ). Результаты . Полученные фракции собственных экзометаболитов морских микроводорослей, выращиваемых в искусственной морской воде, оказывали слабое влияние на размножение патогенных бактерий, которое по-разному проявлялось в зависимости от вида микроводоросли и вида тест-микроорганизмов. Однако при культивировании этих же микроводорослей в естественной морской воде (особенно взятой в летний период времени) экзометаболиты ЭАФ P.tricornutum значительно стимулировали рост всех взятых в эксперимент тест-микроорганизмов. Заключение . Вероятно, стимуляция роста патогенных бактерий может быть обусловлена либо изменением состава среды (и следовательно, появлением иных, чем в искусственной морской воде, метаболитов), либо усилением действия собственных метаболитов микроводоросли метаболитами естественной морской воды, в которой присутствует огромное множество органических веществ, выделяемых многочисленными обитателями моря.

Несмотря на многочисленные способы защиты организма от вирусной инфекции, опосредованные реакциями врожденного и адаптивного иммунитета, вирусы уклоняются от иммунного надзора, взаимодействуя с рецепторными молекулами иммунной системы для проникновения в клетку и активации синтетических процессов в ней для реализации ранних этапов репликации вируса. Относительно недавно появились данные о сигнальных рецепторах врожденного иммунитета — Toll-подобных рецепторах (TLRs), которые участвуют в распознавании консервативных молекул, патогенных микроорганизмов, в том числе вирусов. В обзоре пред- ставлены некоторые варианты действия вирусов (парамиксовируса, ЦМВ, вирусов оспы, кори и других) на TLR-опосредованные механизмы врожденного иммунитета. Полученные данные могут быть в дальнейшем использованы для разработки новых противовирусных лекарственных средств, а также вакцин.

Обсуждаются два широко известных антипрививочных вымысла: «вакцинация сопровождается побочными эффектами, которые по чрезмерной частоте и тяжести превосходят осложнения соответствующих инфекций» и «вакцины представляют собой чудовищный конгломерат высокотоксичных веществ, который противоестественно вводить детям». Проанализирована информационная и психологическая природа распространения этих вымыслов. На основе данных литературы последних лет сделан вывод о реальном отсутствии токсичности (в том числе нейротоксичности), канцерогенности, аллергенности и аутопатогенности фенола, формальдегида, гидроксида алюминия, Твина 80, сквалена (MF59) и этилртутьтиосалицилата натрия в концентрациях, содержащихся в вакцинах национального календаря.