Том 86, № 1 (2009)

Методами электронной микроскопии сравнивали ультраструктурную организацию микробной пристеночной биопленки толстой кишки иммунодефицитных мышей линии B10hr rhyв норме и после перорального заражения животных энтеропатогенным штаммом Clostridium difficile. Показано, что инфицирование приводит к диспергированию нормальной биопленки на отдельных участках, нарушению в ней естественного соотношения различных бактериальных сообществ. Кроме того, в морфологии грамотрицательных микробов были отмечены явные ультраструктурные признаки инволюции. В сохранившихся участках биопленки плотность бактериальной популяции возрастала. Здесь же происходило массированное проникновение в эпителиоциты микроорганизмов и их локализация в фагосомах, фаголизосомах, а иногда и в цитоплазме дегенерирующих эукариотических клеток.

Оценена возможность исследования сточных вод для наблюдения за циркуляцией полиовирусов. Ежемесячно собирали пробы фекалий у детей в доме ребенка. Одновременно собирали пробы сточных вод из коллектора дома ребенка и общего коллектора, принимающего стоки жилого микрорайона, двумя методами - одномоментным и сорбционным. Частота выделения полиои неполиоэнтеровирусов (НПЭВ) из фекалий за 6 месяцев составила 44%, частота выделения вирусов из сточных вод за тот же период была 79% для сорбционного метода и 50% для одномоментного. Среди вирусов, циркулирующих в доме ребенка, преобладали НПЭВ различных серотипов (99 изолятов из 170). Преобладание полиовирусов среди изолятов из сточных вод с помощью сорбционного метода (23 штамма из 32) могло быть связано со свойствами сорбента. Количество штаммов полиовирусов и НПЭВ, выделенных с помощью одномоментного метода, было одинаковым. Сезонные колебания доли проб фекалий и сточных вод, содержащих вирусы, совпадали. Сравнение эффективности методов за весь период наблюдения (14 отборов) не выявило достоверной разницы частоты выделения вирусов (в коллекторе дома ребенка - 72% для сорбционного, 50% для одномоментного; в общем коллекторе - 31% для обоих методов). Обнаружение полиовируса типа 1 с измененными антигенными свойствами в образце фекалий и образце сточной воды свидетельствует о возможности улавливать в стоках незначительное количество вируса, экскретируемое одним человеком. Таким образом, исследования сточных вод дают информацию о вирусах, циркулирующих в детском коллективе. Исследования фекалий выявили высокую частоту выделения полиовирусов (до 32%), в том числе от непривитых детей.

Создана новая отечественная виросомальная расщепленная вакцина против гриппа «Грифор®». Препарат представляет собой смесь высокоочищенных протективных поверхностных и внутренних антигенов вирусов гриппа типа А (H1N1 и H3N2) и типа В. Разработанная технология изготовления препарата позволила обеспечить презентацию поверхностных антигенов вируса гриппа в виде виросом, а презентацию внутренних антигенов вируса гриппа - в виде мицелл с максимальным сохранением их антигенной активности. С помощью электронной микроскопии, электрофореза в 10% полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия и полимеразной цепной реакции изучены морфологические и биохимические свойства вакцины. Проведено доклиническое исследование, включающее оценку антигенных свойств вакцины «Грифор®» в сравнении с коммерческой вакциной «Ваксигрип» (Франция). Установлено, что введение препарата не приводило к гибели экспериментальных животных, снижению массы тела, развитию патологических, в том числе воспалительных, дистрофических и некробиотических изменений во внутренних органах, не оказывало негативного влияния на гематологические и биохимические показатели крови и иммунную систему. Препарат не обладал пирогенностью, местно раздражающим действием и аллергенностью. Полученные результаты послужили обоснованием целесообразности проведения клинических исследований вакцины «Грифор®» на ограниченном контингенте добровольцев.

Для разработки живой гриппозной вакцины (ЖГВ) против вирусов гриппа, обладающих пандемическим потенциалом, использован метод классической генетической реассортац и и донора аттенуации А/Ленинград/134/17/57(H2N2) [Лен/17] с апатогенными вирусами гриппа птиц различных подтипов. В исследовании изучен реассортантный штамм с формулой генома 6:2, содержащий HA и NA от апатогенного птичьего вируса А/дикая утка/Нидерланды/12/00(H7N3) [H7N3-дт], а 6 остальных генов — от Лен/17. Реассортантный штамм А/17/ дикая утка/Нидерланды/00/84(H7N3) [Лен17/ H7] проявлял tsи caфенотип, присущий холодоадаптированным штаммам. По антигенному профилю реассортант был идентичен родительскому птичьему вирусу H7N3-дт. Лен17/H7 был аттенуированным для кур, подобно холодоадаптированному донорскому штамму Лен/17, в то время как «дикий» родительский штамм вызыв а л 60% летальность при внутривенном введении. Реассортантный штамм Лен17/H7 был аттенуированным при интраназальном введении белым мышам в дозе 6 ЭИД 50, что подтверждено отсутствием выделения вируса из легких; активно репродуцировался в носовых ходах мышей и вызывал образование специфических сывороточных и локальных антител.

Проведено экспериментальное изучение адъювантного действия рекомбинантного микобактериального белка теплового шока (rHSP70) на иммунный ответ к антигенам условно патогенных микроорганизмов. В качестве бактериальных антигенов использована терапевтическая поликомпонентная вакцина Иммуновак-ВП-4, содержащая лиганды для связывания с TLR 2,4,9. Полученные данные свидетельствуют о том, что rHSP70 в смеси с бактериальными антигенами условно патогенных микроорганизмов приводит к созреванию дендритных клеток, полученных из костномозговых предшественников мыши, повышению экспрессии на их мембране TLR2, 4, 9, выработке цитокинов IL-1β, IL-6, IL-10, TNFα, а также активирует врожденный иммунитет в опытах in vivo, повышая резистентность мышей при экспериментальной сальмонеллезной инфекции. Одновременное введение rHSP70 с бактериальными антигенами повышало титры антител к антигенным компонентам вакцины в РПГА. Таким образом, на данной модели подтверждено адъювантное действие rHSP70 и показано усиление стимуляции врожденного и адаптивного иммунитета.

Представлены результаты экспериментального изучения регуляторного влияния нейтрофилокинов, индуцированных вакцинным штаммом Yersinia pestis EV, на популяционный и субпопуляционный состав лимфоцитов и их функциональную активность в процессе формирования иммунитета против чумы. Установлено, что эти нейтрофилокины стимулируют CD4 +и ингибируют CD8 +Т-лимфоциты. Хелперный эффект нейтрофилокинов на функциональную активность лимфоцитов более выражен при вторичном, чем при первичном иммунном ответе.

Раздел «ПЦР-выявление ВГС», посвященный выявлению РНК вируса гепатита С (ВГС) методом ПЦР, функционирует в Федеральной системе внешней оценки качества клинических лабораторных исследований (ФСВОК) с 2000 года. В 2005, 2006 и 2007 гг. в разделе приняли участие соответственно 90, 98 и 112 лабораторий из более чем 50 регионов РФ. Анализ результатов исследования контрольных образцов участниками раздела показал возрастание доли метода амплификации в присутствии флуоресцентно меченных зондов как в режиме реального времени, так и по конечной точке. В этих условиях отмечено достоверное увеличение специфичности и чувствительности исследований. В 2007 г. доля правильных результатов, полученных участниками раздела при исследовании отрицательных контрольных образцов, составила 96-97%, при выявлении РНК ВГС в концентрации 10 3МЕ/мл - 80-83%. Существенная доля лабораторий, не выявивших РНК ВГС в концентрации 10 3МЕ/мл, свидетельствует о необходимости работы по повышению чувствительности этого важного метода лабораторных исследований.

Разработана мультиплексная ПЦР тестсистема с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени (ПЦР-РВ) для одновременного выявления в клинических образцах основных возбудителей ОРВИ: вирусов гриппа А (ВГА) и В (ВГВ), парагриппа 1, 2, 3, 4 типов (ВПГ 1 — 4), аденовирусов (АДВ), респираторно-синцитиального вируса (РСВ), риновирусов (РВ) и энтеровирусов (ЭВ) в присутствии внутреннего положительного контроля (ВПК), представленного вакцинным штаммом вируса краснухи RA 27/3. Методом мультиплексной ПЦР-РВ в 116 из 226 клинических образцов (мазки из полости носа) от больных с симптомами ОРВИ были выявлены респираторные вирусы: в 68 (58,6%) ВГВ; в 21 (18,1%) ВГА; в 12 (10,3%) РВ; в 6 (5,2%) ВПГ 2; в 4 (3,4%) АДВ; в 3 (2,6%) РСВ; в 2 (1,7%) ЭВ; в 2 (1,7%) ВПГ 4; в 1 (0,9%) ВПГ 3; в 1 (0,9%) ВПГ 1. У 4 (3,4%) пациентов была выявлена смешанная инфекция. ПЦР-анализ позволил выявить различные респираторные вирусы в 51,3% образцов. Параллельно образцы анализировали на наличие 12 респираторных вирусов — ВГА, ВГБ, ВПГ 1—4 РСВ, РВ, метапневмовируса и коронавирусов NL63, 229E и OC43 в присутствии ВПК, представленного вирусом артериита лошадей, при помощи аналогичной ПЦР-тест-системы, переданной из медицинского центра Лейденского университета. Результаты выявления вирусов: ВГБ, ВГА, РСВ, ВПГ 1—4 и РВ, анализированных обеими системами, совпали в 94%. Мультиплексный формат постановки ПЦР-РВ значительно сокращает время и стоимость анализа, что делает его удобным и эффективным инструментом эпидемиологических исследований.

На наличие генов эритрогенных токсинов А, В, С и F с помощью ПЦР исследовали 28 штаммов стрептококков группы А (СГА), выделенных от больных с лакунарной и фибринозно-некротической формами ангины при первичном заболевании или развитии рецидива. Полученные результаты позволяют считать, что клинические особенности болезни (тяжесть, кратность, форма заболевания) могут быть обусловлены токсигенностью СГА. Экспрессидентификация S.pyogenes на основе выявления генов эритрогенных токсинов spe В и spe F (mf) может служить для этиологического подтверждения диагноза, в то время как для прогнозирования течения заболевания рекомендуется выявление генов эритрогенных токсинов spe А и spe С.

Campylobacter fetus подвид fetus является причиной различных акушерско-гинекологических заболеваний. Впервые изучена частота инфицированности кампилобактерами и установлена связь между нею и риском развития хронических гинекологических заболеваний и патологией родов. Бактерии выделены и иден тифицирован ы у 36,0 ± 0,7 % обследованных женщин, поступивших в стационары. Установлено, что Campylobacter fetus подвид fetus может вызывать нарушения функций плаценты и различные воспалительные процессы у беременных.

Гонорея, несмотря на достаточно полную изученность ее этиопатогенеза и наличие средств этиотропной терапии, относится к числу инфекций, не управляемых средствами вакцинопрофилактики, что связано с отсутствием формирования иммунитета при ней. Анализ научных публикаций, статистических материалов и данных ВОЗ показал, что эпидемический процесс гонореи преимущественно зависит от поведения людей, прежде всего сексуального. Современный эпидемический процесс гонореи состоит из нерегулярных подъемов и спадов, имеющих различные причины. Причинами подъемов заболеваемости является одновременное действие ряда биологических и антропогенных факторов. Первые — быстрое нарастание резистентности гонококка к широко применяющимся антибактериальным препаратам, а также синергизм патогенного действия ВИЧ и гонококка. Антропогенные — войны, увеличение групп риска, связанное с урбанизацией, оральными противозачаточными средствами, ростом проституции, миграции, недостаточной доступностью медицинской помощи, обнищанием, интенсификация связей (в том числе гетеро- и гомосексуальных) между людьми, а также демографические изменения — увеличение доли молодежи в населении. Снижению заболеваемости способствуют эти же факторы с обратным знаком, из которых наиболее существенными считают массовое внедрение нового эффективного антимикробного лечебного средства, а также усиление санитарного просвещения, доступность ранней диагностики и лечения, повышение материального и культурного уровня жизни, снижение численности лиц, относящихся к группам риска. Возможности современной науки пока выражаются только в постоянной разработке новых антибактериальных препаратов, активных в отношении циркулирующей популяции гонококка, резистентной к очередному применяемому средству.