Том 86, № 5 (2009)

Цель. Выявление с помощью ПЦР маркеров вирулентности у клинических штаммов Escherichia coli, продуцирующих шига-подобный токсин. Материалы и методы. Исследовано 34 штамма STEC, изолированных при острой кишечной инфекции. Использован метод ПЦР с праймерами к 10 генам патогенности: rfbЕ, eaeА, iha, saa, stx1, stx2, cdt, subA, ehx и espP. Составлена антибиотикограмма изолятов. Изучено наличие в бактериальных клетках интегронов I класса. Результаты. У 31 из 34 изолятов обнаружен rfbЕ ген, контролирующий синтез антигена серогруппы O157. Типичным набором генов патогенности (rfbE, еаеА, stx1,2, ehx и espP) обладали 23 штамма E.coli О157 (74,2% случаев). У 12 из этих 23 культур (52,2%) выявлена последовательность iha гена. Наличие сdt генов обнаружено только у 2 клинических изолятов серогруппы О157, выделенных в Москве. Два из 11 штаммов, изолированных на территории Тульской области, не имели rfbE и еаеА последовательностей, но обладали saa и subA, отсутствующими у остальных исследуемых штаммов STEC. Гены интегронов I класса не были обнаружены ни у одного из протестированных штаммов, хотя некоторые из них обла д а ли устойчивостью к сульфаниламидам, препаратам групп тетрациклинов и аминогликозидов. Заключение. Показана гетерогенность по составу генов патогенности у штаммов E.coli, продуцирующих шига-подобные токсины, что свидетельствует о циркуляции среди больны х острыми кишечными инфекциями различных культур, в том числе и не относящихся к серогруппе О157, что необходимо учитывать при анализе клинических изолятов.

Цель. Сравнительное изучение образования биопленки у Yersinia pestis основного и неосновных подвидов и Yersinia pseudotuberculosis и исследование влияния различных генов на проявление этого свойства у разных подвидов возбудителя чумы. Материалы и методы . Изучение образования биопленки проводили методом выращивания культур в бульоне LB в полистироловых чашках Петри с последующей окраской образовавшейся на дне чашки биопленки кристаллвиолетом, а также методом электронной микроскопии. Признак пигментосорбции выявляли на цветной дифференциальной среде с Конго красным. Результаты . Показано, что большинство штаммов Y.pestis и все штаммы Y.pseudotuberculosis образуют на абиотической поверхности хорошо выраженную биопленку. У штаммов Y.pestis формирование биопленки четко коррелирует со способностью образовывать пигментированные колонии на плотной среде с красителем. В геноме неосновных подвидов выявлены гены, которые, по литературным данным, необходимы для формирования биопленки у возбудителей чумы и псевдотуберкулеза. Заключение. Установлена способность штаммов Y.pestis основного и неосновных подвидов образовывать биопленку на абиотической поверхности.

Цель. Выявление клинико-эпидемиологических особенностей парентеральных гепатитов (ГВ и ГС) и герпесвирусных инфекций (цитомегаловирусной инфекции, ЦМВИ и вируса простого герпеса, ВПГ) у беременных женщин. Материалы и методы . Обследованы 200 беременных женщин, в качестве группы сравнения 150 женщин — доноров крови (Чебоксары, Чувашская Республика). В группах обследованных не было лиц, вакцинированных против гепатита В. Для диагностики ГВ и ГС определяли методом ИФА — HBsAg, анти-HBs, анти-НВс IgM и IgG, анти-ВГС; для диагностики ЦМВИ и ВПГ — антитела классов M и G; методом ПЦР — ДНК ВГВ и РНК ВГС. Результаты. Установлено умеренное распространение маркеров ГВ и ГС в группе беременных (31 и 3%) и доноров (34 и 2%) и широкое распространение маркеров герпесвирусных инфекций (ЦМВ, ВПГ) у обследуемых групп женщин (от 71 до 94,5%) На момент наблюдения у обследованных женщин не отмечалось манифестных клинических проявлений гепатитов В и С, ЦМВИ, ВПГ. Показано наличие осложнений беременности в зависимости от выявленных маркеров ГВ и ГС, герпесвирусных инфекций по триместрам; частота выявления маркеров ВГВ и ВГС в сочетании с маркерами инфекций ВПГ и ЦМВ у беременных женщин; осложнения течения беременности в зависимости от выявления сочетания маркеров ГВ и ГС и герпесвирусных инфекций. Заключени е. Показано, что беременные женщины с наличием маркеров изученных инфекций являются группой риска по развитию угрозы невынашивания беременности, воспалительным процессам в плаценте и околоплодных оболочках, задержке внутриутробного развития плода.

Цель. Изучение генетического разнообразия штаммов Pseudomonas aeruginosa, циркулирующих в отделении реанимации и интенсивной терапии (ОРИТ), выявление происхождения этих штаммов и установление длительности циркуляции эпидемически значимого клона в стационаре. Материалы и методы. Было проведено генотипирование 106 изолятов P.aeruginosa, выделенных от пациентов, из клинического материа л а и объ ек тов ок ру ж ающей среды, методом RAPD-ПЦР (random ampliphied polymorphic DNA) с олигонуклеотидным праймером размером 10 нуклеотидов Sh1. Результаты. Из 106 изолятов P.aeruginosa 72,6% принадлежали к одному генотипу, который доминировал в ОРИТ в течение наблюдаемого периода. Установлено, что 58,3% из обследованных нами пациентов были колонизированы идентичными штаммами, принадлежащими к этому генотипу, что указывает на внутрибольничную диссеминацию эпидемического штамма. Заключение. Полученные данные показывают, что на протяжении периода наблюдения (15 мес) в ОРИТ доминировал один клон P. aeruginosa, который характеризовался множественной резистентностью к антибиотикам и был причиной развития внутрибольничной инфекции (ВБИ) у 58,3% пациентов. Это подтверждает необходимость постоянного молекулярномикробиологического мониторинга больничной микрофлоры с целью заблаговременного выявления потенциально опасных эпидемических госпитальных штаммов, способных вызвать ВБИ.

Цель . Изучить токсичность липоолигосахаридов (ЛОС) одного из нетипируемых штаммов Haemophilus influenzae (NTHi) и продуктов его детоксикации, полученных с использованием различных реагентов. Материалы и методы. ЛОС получали из нетипируемого штамма H.influenzae, выращенного на плотной сердечномозговой питательной среде, с помощью описанной ранее методики выделения и очистки ЛПС. Полученный препарат ЛОС подвергали действию трех детоксицирующих агентов: безводного гидрозина (БГ), щелочи (NaOH) и солянокислого гидроксиламина (ГА) в одинаковых условиях. Токсичность ЛОС и его детоксицированных производных определяли на беспородных мышах, которым за день до иммунизации внутрибрюшинно вводили по 0,5 мл актиномицина Д. Гибель животных учитывали на 2 сутки после иммунизации. Для изучения влияния детоксицирующих агентов на физико-химические свойства ЛОС использовали электрофорез в полиакриламидном геле. Результаты . В результате обработки ЛОС NTHi № 45 различными детоксицирующими агентами были получены три препарата детоксицированных ЛОС (д-ЛОС) и три из осадков (нд-ЛОС). Наименее токсичным оказался препарат д-ЛОС БГ. Достоверно не изменились токсические свойства препарата ндЛОС Г А. В электрофорезе в ПААГ практически все детоксицированные препараты показали более быструю миграцию липоолигосахаридных ком- понентов, по сравнению с исходным препаратом ЛОС NTHi № 45, что указывает на уменьшение молекулярного веса ЛОС после обработки их детоксицирующими агентами, связанное с удалением высших жирных кислот липида А. Заключение . Анализ результатов действия детоксицирующих агентов указывает на необходимость подбора индивидуальных условий для воздействия каждого из них.

Цель. Оценка степени охвата прививками против полиомиелита и напряженность поствакцинального иммунитета у детей сахарным диабетом 1 типа (СД 1 типа) и ревматическими заболеваниями. Материалы и методы. Исследован прививочный статус 299 детей с СД 1 типа и 136 детей с ревматическими заболеваниями. Серологическому обследованию с использованием реакции нейтрализации подвергнут 31 ребенок с СД 1 типа и 29 детей с ревматическими заболеваниями. В группу сравнения включены 380 здоровых детей в возрасте от 3 до 14 лет. Все дети ранее были привиты оральной противополиомиелитной вакциной. Результаты . В поствакцинальном периоде у детей с СД 1 типа и ревматической патологией не выявлено декомпенсации основного заболевания. Серонегативных ко всем типам полиовирусов не выявлено. Число серонегативных к двум серотипам составило у детей с СД 1 типа и ревматическими заболеваниями 12,9 и 13,8% соответственно. Доля серопозитивных ко всем трем типам полиовирусов у детей с СД 1 типа составила 54,8%, что меньше, чем в популяции (р<0,01), а у детей с ревматическими заболеваниями — 75,8%. У детей с СД 1 типа для вирусов 1 и 2 типов показатели истинной иммунной прослойки соответствуют нормативам и составляют 94,9 и 82,0% соответственно, в то время как для 3 типа полиовирусов — 49,7%. У детей с ревматическими заболеваниями показатели истинной иммунной прослойки для вирусов 1 и 2 типов соответствуют нормативу, а для 3 типа — 72,4%. Заключение . Разработаны алгоритмы обследования пациентов с СД 1 типа и ревматическими заболеваниями, позволяющие целенаправленно проводить серологическое обследование, и рекомендации о дополнительных прививках против полиомиелита.

Цель. Исследование роли продукции отдельных цитокинов макрофагами и нейтрофилами в эксперименте. Материалы и методы. Определяли продукцию цитокинов — интерлейкина-2, 4, 6, 10, 12, 15; интерферона γ, фактора некроза опухоли α, трансформирующего фактора роста β макрофагами и нейтрофилами в эксперименте на лабораторных мышах, зараженных энтеротоксигенным штаммом Enterobacter cloacae. Экспрессию цитокинов определяли с использованием ОТ-ПЦР и дот-гибридизации на основе специально синтезированных нуклеотидных последовательностей. Результаты. В макрофагах опытных групп животных, зараженных энтеротоксином штамма E.сloacae, обнаружена повышенная продукция ТФР-β, ИФН-γ и подавления ФНО-α. Через 24 ч после заражения у макрофагов и нейтрофилов опытных групп животных определена транскрипция мРНК ИЛ-15 и ИЛ-6. Транскрипция мРНК и ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-10 ни у макрофагов, ни у нейтрофилов не обнаружена. Заключение. Термолабильный энтеротоксин E.сloacae оказывает иммунокомпрометирующее действие на ИФН-γ , способствует повышенной экспрессии ТФР-β и подавляет синтез ИЛ-2, 4, 10. Отсутствие в нейтрофилах экспрессии мРНК ключевых цитокинов указывает на то, что действие термолабильного энтеротоксина бактерий рода Enterobacter выключает его из цитокиновой регуляции иммунного ответа при инфекционном процессе.

Цель. Исследовать диагностическую ценность разработанного антигенного Крым-Конго полимерного диагностикума при эпидемиологическом надзоре в природных очагах КГЛ Южного федерального округа. Материалы и методы. На основе полимерных микросфер разработан новый антигенный Крым-Конго диагностикум для реакции объемной агломерации (РАО). Препарат предназначен для обнаружения вирусоспецифических антител в сыворотках крови человека и сыворотках сельскохозяйственных животных. Результаты. Лабораторные и полевые испытания показали его высокие диагностические возможности, этот препарат включен в методические рекомендации «Организация и проведение мероприятий против Крымской геморрагической лихорадки на территории природных очагов России». Использование антигенного полимерного Крым-Конго препарата в эпидемиологическом надзоре позволяет составить целостное и системное представление об эпидемическом процессе при КГЛ. Заключение. В настоящее время наряду с иммуноферментным анализом и полимеразной цепной реакцией антигенный полимерный диагностикум успешно используется на различных уровнях эпидемиологического надзора за КГЛ в Ростовской области.

Цель. Исследование динамики заживления кожных ран, обработанных ИЛ-1β, у мышей на фоне иммуносупрессии методом электронной микроскопии. Материалы и методы. В качестве биологической модели использовали 45 белых беспородных мышей-самцов. Иммуносупрессию моделировали введением гидрокортизона. Животным на нижней части спины с помощью ножей biopsy punch («Stiefel») наносили 2 раны с контролем глубины до поверхностной фасции мышц диаметром 4 мм. Динамику изменений в регенерирующем эпидермисе и выявление микробных сообществ проводили электронно-микроскопическим методом ультратонких срезов. Для оценки скорости регенерации кожной раны использовали фотометрический анализ. Фотометрию раневого участка проводили непосредственно после нанесения ран, а также на 3, 8 и 14 сутки эксперимента. Результаты. Электронно-микроскопический анализ показал, что ИЛ-1β способствовал ускорению процессов клеточной дифференцировки, о чем свидетельствовало более раннее развитие белок-синтезирующего аппарата клеток новообразованного шиповатого слоя и формирование зернистого слоя с большим количеством межклеточных контактов. Наиболее значимые различия в регенерации раны наблюдали при анализе материала, взятого на 8 и 14 сутки эксперимента. Заключение. Применение ИЛ-1β способствует ускорению регенерации кожной раны на фоне иммуносупрессии и более интенсивному очищению раны от микроорганизмов, предотвращая рост грамположительной, грамотрицательной микрофлоры и развитие мицелиальных форм микромицетов.

В обзоре анализируется эволюция взглядов на легионеллез: от особо опасной редкой инфекции до достаточно широко распространенной тяжелой пневмонии, возникновение которой обусловлено особенностями экологии и распространения природного водного микроорганизма в потенциально опасных водных системах, созданных человеком. Рассматриваются особенности эпидемиологии 3 основных групп легионеллезной инфекции по характеру приобретения: спорадический (внебольничный) легионеллез; нозокомиальный легионеллез; легионеллез, связанный с поездками, путешествиями. Обсуждаются современные принципы организации эпидемиологического надзора за легионеллезной инфекцией, основанные на мониторинге заболеваемости, наблюдении за циркуляцией возбудителя в потенциально опасных водных системах, проведении профилактических мероприятий, направленных на предупреждение спорадических случаев и эпидемических вспышек. Организация эпидемиологического надзора за легионеллезной инфекцией в Российской Федерации в настоящее время строится с учетом международных стандартов, рекомендаций ВОЗ и собственного практического опыта по ликвидации эпидемических вспышек легионеллеза, результатов выделения возбудителя из потенциально опасных водных объектов на территории России.

В обзоре представлены современные сведения о механизмах иммунной защиты при сальмонеллезной инфекции, способности сальмонелл противостоять этим механизмам. Основной акцент сделан на реакции системы цитокинов врожденного и приобретенного иммунитета, описанной в экспериментальных и клинических исследованиях.