Current data on the circulation of the Q fever pathogen in the Republic of Guinea

Full Text

Введение

Лихорадка Ку, или коксиеллёз, — общее для человека и животных природно-очаговое заболевание, этиологическим агентом которого являются бактерии Coxiella burnetii (семейство Legionellaceae, класс Gammaproteobacteria), характеризующееся полиморфизмом клинической картины у человека и разнообразными механизмами передачи возбудителя. В природных очагах основным переносчиком C. burnetii считаются иксодовые, реже аргасовые клещи, а резервуаром — дикие млекопитающие, среди сельскохозяйственных животных — мелкий (МРС) и крупный рогатый скот (КРС) [1, 2].

Заболевание у людей протекает в виде лихорадки с общетоксическими симптомами с возможным переходом в хроническую форму. В связи с широким распространением инфекции, многообразием путей передачи (контактный, пищевой, воздушно-пылевой) лихорадка Ку представляет важную медико-социальную проблему во всём мире.

Помимо этого данная инфекционная болезнь имеет и важное ветеринарное значение, т. к. вызывает репродуктивные нарушения (аборты и мертворождения) у КРС и МРС, что влечёт значительные экономические потери, особенно в тех регионах, где животноводство является основной отраслью сельскохозяйственного производства [2].

Коксиеллёз является одним из наиболее изученных зоонозов на территории Африки. Появляются новые свидетельства того, что инфицирование C. burnetii является причиной лихорадочных заболеваний, не связанных с малярией, и внебольничной пневмонии во многих африканских странах. Однако современные сведения о заболеваемости лихорадкой Ку и циркуляции C. burnetii на этом континенте являются ограниченными и неоднородными [3].

Имеющиеся публикации о предыдущих исследованиях указывают на достаточно высокий уровень выявления специфических антител к возбудителю у населения некоторых африканских стран [4–9]. Например, при исследовании образцов сывороток крови жителей отдельных населённых пунктов региона Син-Салум (Республика Сенегал) показано, что специфические антитела к C. burnetii были выявлены в 3,7–24,8% образцов (в зависимости от места проживания обследуемых лиц) [5]. Схожие данные получены при проведении иммуносерологического мониторинга в общинах скотоводов в округе Марсабит на севере Кении, когда положительные результаты были получены в 13,2% случаев [6]. Вероятность выявления иммунологических маркеров у мужчин в Кении была значительно выше, чем у женщин [7].

Показано, что племена скотоводов подвержены наиболее высокому риску заражения коксиеллёзом из-за их кочевого образа жизни и хорошо сохранившихся традиций, которые повышают вероятность употребления в пищу некипячёных молочных продуктов и сырого мяса инфицированных животных. Не исключено также, что заражение происходит при контакте с мочой, фекалиями, кровью заражённых животных, а также околоплодными водами после аборта или доношенных родов [6–9].

Известно и то, что лихорадка Ку вызывает значительные потери среди не только сельскохозяйственных, но и диких животных: антилоп, жирафов, львов и гепардов, нанося непоправимый урон численности этих редких млекопитающих [10].

Данная инфекционная болезнь приобретает актуальность и в качестве «болезни путешественников» в связи с популяризацией Африканского континента и стремительно развивающимся туризмом на данной территории. В литературе описана вспышка лихорадки Ку, когда во время сафари в природном парке Кении из 50 участников туристического маршрута 4 (8%) подверглись заражению, что стало причиной завозных случаев на территорию Европы [11].

Большинство опубликованной в открытой печати информации по изучению циркуляции возбудителя лихорадки Ку относится к странам Восточной Африки. О ситуации в западной части континента сведений гораздо меньше. Имеются данные об исследованиях, проводимых в природных очагах коксиеллёза, Гане, Нигерии, Мали [12–14], а также в Сенегале, где в 2023 г. в пробах от мелких млекопитающих были выявлены два новых генотипа Coxiella burnetii, патогенность которых ещё предстоит изучить [15].

Гвинейская Республика расположена в Западной Африке, на побережье Атлантического океана. Население страны, по данным на конец марта 2024 г., составляет около 14,5 млн человек¹. Территория государства на основании географических и природно-климатических признаков условно разделена на 4 ландшафтно-географические зоны: Нижнюю (Приморскую), Среднюю, Верхнюю и Лесную (рисунок) [16].

 

Ландшафтно-географические зоны Гвинейской Республики, где были выявлены маркеры возбудителя лихорадки Ку.

1 — ДНК в сыворотках крови КРС; 2 — IgG в сыворотках крови КРС; 3 — IgG в сыворотках крови жителей; 4 — ДНК в суспензиях органов рукокрылых; 5 — антигены в суспензиях органов рукокрылых; 6 — случаи заболевания людей; 7 — ДНК в суспензиях иксодовых клещей; 8 — антигены в суспензиях иксодовых клещей; 9 — ДНК в суспензиях органов мелких млекопитающих; 10 — антигены в суспензиях органов мелких млекопитающих.

Landscape and geographical zones of the Republic of Guinea, where markers of the Q fever pathogen were identified.

1 — DNA in blood sera of cattle; 2 — IgG antibodies in blood sera of cattle; 3 — IgG antibodies in blood sera of residents; 4 — DNA in suspensions of bat organs; 5 — antigens in suspensions of bat organs; 6 — cases of human disease; 7 — DNA in suspensions of ixodes ticks; 8 — antigens in suspensions of ixodes ticks; 9 — DNA in suspensions of organs of small mammals; 10 — antigens in suspensions of organs of small mammals.

 

В 1980–1990 гг. на базе Советско-Гвинейской научно-исследовательской вирусологической и микробиологической лаборатории было проведено достаточно большое количество исследований с целью изучения распространения возбудителя лихорадки Ку на территории Гвинейской Республики, в том числе получены данные об иммунной прослойке населения страны и выявлены специфические антитела в сыворотках крови сельскохозяйственных животных [17]. В последующие десятилетия, в силу сложившихся экономических и политических условий, исследования были приостановлены, а значимость лихорадки Ку в общей структуре заболеваемости так и не определена. В 2017 г. в рамках работы Российско-Гвинейского центра эпидемиологии и профилактики инфекционных болезней (далее — Центр), созданном на основании распоряжений Правительства РФ на территории Института прикладной биологии Гвинеи (г. Киндиа), исследования были продолжены [18–20].

Цель работы — получение современных данных о распространении C. burnetii и особенностей природных очагов лихорадки Ку на территории различных ландшафтно-географических зон Гвинеи.

Материалы и методы

Сбор образцов клинического и биологического материала и последующую диагностическую работу проводили на базе лаборатории Центра российские и гвинейские специалисты, руководствуясь требованиями санитарных правил и норм СанПиН 3.3686-21 «Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней».

Сыворотка крови людей

Сыворотка крови практически здоровых людей была собрана в региональных госпиталях Гвинеи местными специалистами. Забор крови производили в утренние часы натощак из локтевой вены в количестве 5–10 мл в одноразовую стерильную вакуумную пробирку с активатором образования сгустка с соблюдением правил асептики.

Далее полученные образцы доставляли в лабораторию Центра с соблюдением правил биологической безопасности и температурного режима. Все образцы сыворотки предварительно исследовали методом иммунохроматографического анализа для обнаружения антигенов малярийных плазмодиев с набором реагентов «SDBIOLINE Malaria Ag P.f./Pan» («Standart Diagnostics, Inc.»). Для исключения вероятности неспецифических реакций образцы, содержащие антигены возбудителей малярии, в последующие исследования не вошли.

Для изучения иммунной прослойки населения Гвинеи к возбудителю лихорадки Ку была составлена панель из 3156 сывороток крови практически здоровых людей, проживающих во всех 4 ландшафтно-географических зонах страны. В работу были включены представители разных возрастных групп: 1519 (48,2%) женщин и 1637 (51,8%) мужчин. Работу проводили методом иммуноферментного анализа (ИФА) c использованием набора реагентов «Тест-система иммуноферментная для выявления антител класса G к антигенам Coxiella burnetii» (НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Пастера, Россия). Сыворотки исследовали в разведении 1 : 100.

Для выяснения возможности заболевания людей лихорадкой Ку были собраны и исследованы 332 сыворотки крови лихорадящих больных, обратившихся за медицинской помощью в региональные госпитали Гвинеи с жалобами на продолжительную лихорадку и другими симптомами, не исключающими коксиеллёз. Сбор материала также проводили гвинейские специалисты по вышеописанной методике. Для проведения исследований молекулярно-генетическими методами кровь также отбирали в количестве 5–10 мл в одноразовую стерильную вакуумную пробирку с 3,8% цитратом натрия.

Образцы исследовали методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с целью выявить ДНК C. burnetii с набором реагентов «АмплиСенс Coxiella burnetii-FL» (ЦНИИ Эпидемиологии, Россия) и ИФА с использованием диагностического препарата «Coxiella burnetii ELISA IgM» («Vircell») для определения антител класса IgM к возбудителю.

Исследование проб клинического и биологического материала от людей проводили при информированном согласии пациентов, для несовершеннолетних — с разрешения родителей (официальных представителей). Протокол исследования одобрен решением Национального этического комитета Министерства здравоохранения Гвинейской Республики (протокол № 129/CNERS/16 от 31.08.2015).

Сыворотка крови сельскохозяйственных животных

Образцы крови получали на скотобойнях, используя общепринятую методику, от взрослых животных (возраст более 1,5 года) без признаков инфекционных заболеваний после их осмотра ветеринарным врачом. Всего для работы была сформирована панель из 1074 образцов крови КРС. Полученные сыворотки тестировали методами ИФА и ПЦР с использованием наборов реагентов для выявления специфических антител класса IgG к C. burnetii «ID Screen Q Fever Indirect Multi-species» («ID Screen»), который рекомендован в качестве ветеринарного препарата, и ДНК C. burnetii — «АмплиСенс Coxiella burnetii-FL» (ЦНИИ Эпидемиологии, Россия).

Суспензии клещей

Сбор иксодовых клещей осуществляли на территории всех 4 ландшафтно-географических зон Гвинеи. Эктопаразитов снимали вручную, используя средства индивидуальной защиты, с людей, сельскохозяйственных животных, домашних и безнадзорных собак и кошек, мелких млекопитающих, рептилий. Всего за время проведения исследований было собрано 4709 экземпляров клещей, которых на основании морфологических признаков отнесли к 11 видам: Amblyomma variegatum Fabricius, 1794; Haemaphysalis leachi Audouin, 1826; Hyalomma rufipes Koch, 1844; Hyalomma truncatum Koch, 1844; Rhipicephalus (Boophilus) decoloratus Koch, 1844; Rhipicephalus (Boophilus) geigyi Aeschliman & Morel, 1965; Rhipicephalus (Boophilus) annulatus Say, 1821; Rhipicephalus (Boophilus) microplus Canestrini, 1888; Rhipicephalus lunulatus Neumann, 1907; Rhipicephalus sanguineus Latreille, 1806; Rhipicephalus senegalensis Koch, 1844, согласно определителю [21]. Далее с учётом вида, пола, фазы развития и упитанности отдельных особей клещей, а также мест сбора эктопаразитов, было сформировано 1648 пулов. Эктопаразитов дважды отмывали 70% этанолом для удаления внешних загрязнений и наружной микрофлоры. Подготовку проб для исследования проводили с использованием лабораторного гомогенизатора «TissueLyser II» («Qiagen») в 500 мкл стерильного фосфатно-солевого буферного раствора.

Полученный материал был протестирован методами ПЦР и ИФА с использованием набора реагентов «АмплиСенс Coxiella burnetii-FL» (ЦНИИ Эпидемиологии) и тест-системы иммуноферментной для выявления антигенов коксиелл Бернета «ИФА-Ку-антиген (комплект N1)» (НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Пастера) соответственно. Часть проб, содержащих и ДНК, и антигены C. burnetii, исследованы с использованием высокопроизводительного секвенирования на платформе «Ion S5» («Thermo Scientific»), далее прочтения картировались на последовательность 16S рРНК из базы NCBI GenBank с помощью алгоритма BWA [22]. Изучен также плазмидный профиль со специфическими праймерами к локусам плазмид QpH1, QpRS и QpDV.

Суспензии органов мелких млекопитающих

При проведении эпизоотологического мониторинга на территории Гвинеи отловлено 319 экземпляров мелких млекопитающих (Rodentia, Eulipotyphla). Видовой спектр грызунов представлен 13 видами: Arvicanthis ansorgei Thomas, 1910 (суданская травяная мышь); Heliosciurus gambianus Ogibly, 1835 (гамбийская белка); Cricetomys gambianus Waterhouse, 1840 (гамбийская хомяковидная крыса); Lemniscomys striatus Linnaeus, 1758 (полосатая мышь); Lophuromys sikapusi Temminck, 1853 (ржавобрюхая жесткошёрстная мышь); Mastomys erythroleucus Temminck, 1853 (гвинейская многососковая мышь); Mastomys natalensis A. Smith, 1834 (натальская мышь); Mus minutoides A. Smith, 1834 (карликовая мышь); Mus musculoides Temminck, 1853 (Темминкова мышь); Praomys daltoni Thomas, 1892 (мышь Дальтона); Rattus rattus Linnaeus, 1758 (чёрная крыса); Crocidura olivieri Lesson, 1827 (африканская гигантская белозубка); Crocidura sp. Wagler, 1832 (белозубки) [23–26].

Добыто 298 экземпляров рукокрылых (Chiroptera) 14 видов: Eidolon helvum Kerr, 1792 (пальмовый крылан); Epomophorus gambianus Ogilby, 1835 (большой эполетовый крылан); Lissonycteris angolensis Bocage, 1898 (ангольская летучая собака); Rousettus aegyptiacus E. Geoffroy, 1810 (египетская летучая собака); Chaerephon pumillus Cretzschmar, 1830 (карликовый складчатогуб); Mops condylurus A. Smith, 1833 (ангольский складчатогуб); Hipposideros caffer Sundevall, 1846 (южноафриканский листонос); Hipposideros jonesi Hayman, 1947 (листонос Джонса); Hipposideros ruber Noack, 1893 (красный листонос); Nycteris hispida Schreber, 1775 (мохнатый щелеморд); Neoromicia guineensis Bocage, 1889 (гвинейский кожан); Scotophilus dinganii A. Smith, 1833 (африканский гладконос); Scotophilus leucogaster Cretzschmar, 1830 (белобрюхий домовый гладконос); Rhinolophus alcyone Temminck, 1853 (ганский подковонос) [23–26].

Млекопитающих вскрывали с соблюдением правил биологической безопасности не позднее чем через 3 ч после отлова. При отсутствии такой возможности тушки животных замораживали при –20ºС и доставляли в лабораторию, где в последующем вскрывали и отбирали образцы органов. В качестве материала для работы служили объединённые суспензии лёгких и почек, в которых проводили поиск маркеров возбудителя коксиеллёза (ДНК и антигенов) с упомянутыми выше наборами реагентов.

Авторы подтверждают соблюдение институциональных и национальных стандартов по использованию лабораторных животных в соответствии с «Consensus author guidelines for animal use» (IAVES 23 July 2010). Исследование одобрено комиссией по биоэтике Российского противочумного института «Микроб» (протокол № 8 от 21.11.2023).

При статистической обработке материала рассчитывали долю выявленных маркеров возбудителей в каждой выборке, 95% доверительные интервалы (ДИ) для долей по методу Уилсона.

Результаты и обсуждение

Выявление случая заболеваний людей лихорадкой Ку в Гвинее

До настоящего времени выявление больных с подозрением на лихорадку Ку на территории Гвинеи не проводилось. Это можно объяснить тем, что отсутствует настороженность медицинских работников в местных госпиталях в отношении данной инфекционной болезни. В связи с этим большой интерес представляет случай заболевания, впервые зарегистрированный на территории страны.

Пациентка Д., 28 лет, проживающая в г. Маму (Средняя Гвинея), поступила в инфекционное отделение регионального госпиталя. При госпитализации у больной отмечались затяжная (более 1 мес) субфебрильная лихорадка, мышечные и суставные боли, затруднённое дыхание. Результаты анализа на выявление возбудителей малярии, проведённого методами иммунохроматографического анализа и микроскопии, были отрицательными.

Для проведения дальнейшей дифференциальной диагностики сыворотка крови больной направлена в лабораторию Центра. Полученный материал исследовали методом ПЦР с обратной транскрипцией с целью выявления РНК вирусов Эбола, жёлтой лихорадки, Западного Нила, денге, Зика, Крымской-Конго геморрагической лихорадки, гепатита С, 16S РНК возбудителей лептоспироза, ДНК вируса гепатита В, возбудителей лихорадки Ку и риккетсиозов. По результатам работы в сыворотке крови пациентки обнаружена ДНК C. burnetii. Также материал протестирован с использованием ИФА, выявлены специфические антитела класса IgM к коксиеллам в титре 1 : 400. В последующем полученный образец крови использовали для определения нуклеотидной последовательности ДНК возбудителя лихорадки Ку. При проведении частичного секвенирования со специфическими праймерами выявлена 99% идентичность исследуемого образца с геномом C. burnetii. Филогенетический анализ с помощью алгоритма BLAST² показал 96% гомологии со штаммами, выделенными в Намибии.

При опросе больная Д. упоминала тесный контакт с сельскохозяйственными животными, в частности с КРС, находящимся в собственности, а также указала, что в деревне, где проживала пациентка, были отмечены случаи спонтанных абортов у МРС.

В остальных пробах сывороток крови от лихорадящих больных, доставленных из госпиталей Гвинеи, ни генетические маркеры C. burnetii, ни специфические антитела класса IgM к коксиеллам не выявлены.

Определение уровня иммунной прослойки жителей Гвинеи к возбудителю лихорадки Ку

В настоящем исследовании сывороток крови людей, проживающих в различных зонах Гвинеи, специфические антитела к возбудителю лихорадки Ку, относящиеся к классу IgG, выявлены во всех возрастных группах, при этом зависимости уровня иммунной прослойки от половой принадлежности обследованных лиц не наблюдалось (табл. 1). В целом по стране специфические иммуноглобулины к C. burnetii были зарегистрированы в 366 из 3156 образцов сыворотки крови, что составило 11,6% (95% ДИ 10,5–12,8).

 

Таблица 1. Выявление специфических антител класса IgG к возбудителю лихорадки Ку в сыворотках крови жителей Гвинеи

Table 1. Identification of specific IgG antibodies to the Q fever pathogen in the blood sera of residents of the Republic of Guinea

Возраст, лет Age, years	Количество образцов | Number of samples
	всего total	мужчины | men			женщины | women
		всего total	положительных positive	% (95% ДИ | 95% CI)	всего total	положительных positive	% (95% ДИ | 95% CI)
< 10	197	108	8	7,4 (3,8–13,9)	89	6	6,7 (3,1–13,9)
10–20	498	275	26	9,4 (6,5–13,4)	223	27	12,1 (8,4–17,0)
20–30	699	340	32	9,4 (6,7–12,9)	359	29	8,1 (5,7–11,4)
30–40	595	300	39	13,0 (9,7–17,3)	295	33	11,2 (8,1–15,3)
40–50	559	285	35	12,3 (8,9–16,6)	277	29	10,5 (7,4–14,6)
50–60	339	230	37	16,1 (11,9–21,4)	109	26	23,8 (16,8–32,6)
> 70	269	102	20	19,6 (13,1–28,3)	167	19	11,4 (7,4–17,1)
Всего | Total	3156	1637	197	12,1 (10,5–13,7)	1519	169	11,3 (9,6–12,8)

 

Определение уровня иммунной прослойки сельскохозяйственных животных к возбудителю лихорадки Ку

Одним из показателей циркуляции возбудителей природно-очаговых инфекционных болезней на определённой территории является выявление специфических иммуноглобулинов класса G в сыворотках крови сельскохозяйственных животных, обитающих в данном регионе.

В результате данной работы антитела к возбудителю лихорадки Ку выявлены в 172 образцах, что составило 16,0% (95% ДИ 13,9–18,3). Положительные результаты зарегистрированы во всех ландшафтно-географических зонах.

Выявление специфических маркеров (ДНК и антигены) возбудителя лихорадки Ку в суспензиях клещей

Методами ПЦР и ИФА исследованы суспензии иксодовых клещей различных видов, являющихся основными переносчиками C. burnetii, которые были собраны во всех ландшафтно-географических зонах Гвинеи. ДНК возбудителя выявлена в 294 (17,9%) пробах, антиген — в 307 (18,7%) (табл. 2). Положительные находки отмечались среди всех видов иксодовых клещей, представленных в работе, но большинство относились к Am. variegatum, Hy. truncatum, Rh. decoloratus (табл. 2).

 

Таблица 2. Выявление маркеров C. burnetii в суспензиях иксодовых клещей разных видов, собранных на территории Гвинеи

Table 2. Identification of C. burnetii markers in suspensions of ixodid ticks of different species collected in the territory of the Republic of Guinea

Вид клещей Tick species	Количество проб (экземпляров) Number of samples (copies)	Количество положительных проб; % (95% ДИ) The number of positive samples; % (95% СI)
		ПЦР | PCR	ИФА | ELISA
Am. variegatum	872 (2493)	159; 18,2 (15,8–20,9)	193; 22,1 (19,5–25,0)
Ha. leachi	16 (56)	0	0
Hy. truncatum	52 (95)	14; 26,9 (16,8–40,3)	16; 30,8 (19,9–44,3)
Rh. annulatus	58 (161)	36; 62,1 (49,2–73,4)	29; 50 (37,5–62,5)
Rh. decoloratus	391 (1104)	47; 12 (9,2–15,6)	37; 9,5 (6,9–12,8)
Rh. geigyi	210 (668)	36; 17,1 (12,7–22,8)	29; 13,8 (9,8–19,1)
Rh. microplus	18 (47)	0	1; 5,6 (1,0–25,8)
Rh. sanguineus	10 (42)	0	1; 10 (1,8–40,4)
Rh. senegalensis	18 (29)	2; 11,1 (3,1–32,8)	1; 5,6 (1,0–25,8)
Rh. lunulatus	2 (11)	0	0
Hy. rufipes	1 (3)	0	0
Всего | Total	1648 (4709)	294; 17,8 (16,1–19,8)	307; 18,6 (16,8–20,6)

 

Анализ плазмидных профилей является важным инструментом для изучения распространения лихорадки Ку и определения типа возбудителя. Для проведения генетического типирования C. burnetii была создана панель из 20 проб, представленных разными видами клещей, в которых выявлены одновременно и ДНК (уровень ct не более 15), и антиген возбудителя. Методом ПЦР со специфическими праймерами к локусам плазмид QpH1, QpRS и QpDV в 5 образцах выявлено наличие только QpH1. Последовательности фрагментов плазмид QpRS и QpDV ни в одной пробе не выявлено. В ходе анализа полученных результатов и данных литературы установлено, что штаммы, несущие плазмиду QpH1, широко распространены на территории стран Экваториальной Африки и способны вызывать заболевания у людей и животных [27, 28], что не исключает возможность их циркуляции и на территории Гвинеи.

Cформированная панель образцов была проанализирована с использованием методов высокопроизводительного секвенирования на платформе «Ion S5» («Thermo Scientific»). В результате работы в 8 пробах определена нуклеотидная последовательность 16S рРНК возбудителя лихорадки Ку, которая на 99,9% совпадает с референсным штаммом, представленным в базе данных NCBI GenBank. При сравнении полученной консенсусной последовательности с базой NCBI BLAST обнаружены штаммы C. burnetii, выделенные в Намибии, показавшие гомологию (96%) с исследуемым образцом. Дополнительно полученные прочтения классифицировались алгоритмом kraken2 с использованием базы 16S РНК Greengenes, что также показало принадлежность исследуемого образца к виду C. burnetii. Часть полученных нуклеотидных последовательностей 16S рРНК с наиболее высоким качеством прочтения были депонированы в международную базу данных GenBank под номерами OQ152497–OQ152500.

Выявление специфических маркеров (ДНК и антигены) возбудителя лихорадки Ку в суспензиях органов мелких млекопитающих

В результате исследований методами ПЦР и ИФА маркеры возбудителя лихорадки Ку были выявлены в материале, собранном во всех зонах Гвинеи. Антиген обнаружен в 0,9% проб, ДНК — в 5,1%. Максимальное количество положительных находок было получено при исследовании материала от грызунов вида Mastomys erythroleucus (табл. 3). Данные сведения могут свидетельствовать об участии животных этой систематической группы в распространении C. burnetii на территории Гвинеи.

 

Таблица 3. Выявление маркеров C. burnetii в суспензиях органов мелких млекопитающих разных видов, собранных на территории Гвинеи

Table 3. Identification of C. burnetii markers in suspensions of organs of small mammals of different species collected on the territory of the Republic of Guinea

Вид мелких млекопитающих Small mammal species	Количество проб (экземпляров) Number of samples (copies)	Количество положительных проб; % (95% ДИ) The number of positive samples; % (95% СI)
		ПЦР | PCR	ИФА | ELISA
Arvicanthis ansorgei	3	0	0
Heliosciurus gambianus	4	0	0
Cricetomys gambianus	7	1; 14,3 (2,6–51,3)	0
Lemniscomys striatus	3	0	0
Lophuromys sikapusi	1	0	0
Mastomys erythroleucus	124	8; 6,5 (3,3–12,2)	2; 1,6 (0,4–5,7)
Mastomys natalensis	32	2; 6,3 (1,7–20,1)	0
Mus minutoides	5	0	0
Mus musculoides	16	1; 6,3 (1,1–28,3)	0
Praomys daltoni	6	0	0
Rattus rattus	96	4; 4,2 (1,6–10,2)	1; 1,0 (0,2–5,7)
Crocidura olivieri	7	0	0
Crocidura sp.	15	0	0
Всего | Total	319	16; 5,0 (3,1–8,0)	3; 0,9 (0,3–2,7)

 

Выявление специфических маркеров (ДНК и антигены) возбудителя лихорадки Ку в суспензиях органов рукокрылых

При исследовании объединённых проб лёгких и почек, полученных от рукокрылых, были выявлены как антигены (в 1% случаев), так и ДНК C. burnetii (2%). Большинство положительных проб сформированы из органов Scotophilus leucogaster (табл. 4). Представители этого вида широко распространены на территории всей Африки южнее Сахары. Полученные данные подтверждают роль рукокрылых в циркуляции возбудителя лихорадки Ку, что свидетельствует о необходимости проведения дополнительных исследований для определения роли этих млекопитающих в экологии возбудителя.

 

Таблица 4. Выявление маркеров C. burnetii в суспензиях органов рукокрылых разных видов, собранных на территории Гвинеи

Table 4. Identification of C. burnetii markers in organ suspensions of bats of various species collected on the territory of the Republic of Guinea

Виды рукокрылых Bat species	Количество проб (экземпляров) Number of samples (copies)	Количество положительных проб; % (95% ДИ) The number of positive samples; % (95% СI)
		ПЦР | PCR	ИФА | ELISA
Eidolon helvum	1	0	0
Epomophorus gambianus	4	0	0
Lissonycteris angolensis	4	0	0
Rousettus aegyptiacus	15	0	0
Chaerephon pumillus	3	0	0
Mops condylurus	26	1; 3,8 (0,7–18,9)	0
Hipposideros caffer	32	0	0
Hipposideros jonesi	25	0	0
Hipposideros ruber	41	1; 2,4 (0,4–12,6)	1; 2,4 (0,4–12,6)
Nycteris hispida	5	0	0
Neoromicia guineensis	23	1; 4,3 (0,8–21,0)	0
Scotophilus dinganii	1	0	0
Scotophilus leucogaster	117	3; 2,6 (0,9–7,3)	2; 1,7 (0,5–6,0)
Rhinolophus alcyone	1	0	0
Всего | Total	298	6; 2,0 (0,9–4,3)	3; 1,0 (0,3–2,9)

 

Заключение

В результате работы проведено изучение распространения C. burnetii на территории всех ландшафтно-географических зон Гвинеи, в том числе впервые выявлен и лабораторно подтверждён случай заболевания человека лихорадкой Ку (табл. 5). Установлена роль сельскохозяйственных животных, мелких млекопитающих и рукокрылых в циркуляции C. burnetii. Показано, что основными переносчиками возбудителя на территории Гвинеи являются иксодовые клещи видов Am. variegatum, Hy. truncatum и Rh. decoloratus. При проведении молекулярно-генетических исследований материала, собранного в Гвинее, выявлены штаммы C. burnetii, несущие плазмиду QpH1, которые способны вызывать заболевания у людей и животных, и впервые для данного региона определена и зарегистрирована в международной базе данных GenBank полная нуклеотидная последовательность гена 16S рРНК возбудителя лихорадки Ку.

 

Таблица 5. Выявление маркеров возбудителя лихорадки Ку в различном материале, собранном на территории Гвинейской Республики

Table 5. Identification of markers of the Q fever pathogen in various materials collected on the territory of the Republic of Guinea

Вид исследуемого материала Type of the studied samples	Количество проб Number of samples	Количество положительных проб; % (95% ДИ) The number of positive; % (95% CI)
		ПЦР | PCR	ИФА | ELISA
		ДНК | DNA	антиген | antigen	IgG
Нижняя (Приморская) Гвинея | Lower (Maritime) Guinea
Сыворотка крови практически здоровых людей Blood serum of practically healthy people	943	Н. и. | N. i.	Н. и. | N. i.	106; 11,2 (9,4–13,4)
Сывороткa крови КРС | Blood serum of cattle	371	6; 1,6 (0,7–3,5)	Н. и. | N. i.	64; 17,2 (13,7–21,4)
Суспензии клещей | Suspensions of ticks	624	111; 17,8 (15,0–21,0)	131; 21,0 (18,0–24,4)	Н. и. | N. i.
Суспензии органов мелких млекопитающих Suspensions of organs of small mammals	149	8; 5,4 (2,7–10,2)	0; 0 (0–2,5)	Н. и. | N. i.
Суспензии органов рукокрылых Suspensions of bat organs	107	0; 0 (0–3,4)	3; 2,8 (0,9–7,9)	Н. и. | N. i.
Средняя Гвинея | Middle Guinea
Сыворотка крови практически здоровых людей Blood serum of practically healthy people	778	Н. и. | N. i.	Н. и. | N. i.	82; 10,5 (8,6–12,8)
Сыворотка крови КРС | Blood serum of cattle	257	3; 1,2 (0,4–3,4)	Н. и. | N. i.	49; 19,2 (14,7–24,3)
Суспензии клещей | Suspensions of ticks	402	71; 17,7 (14,2–21,7)	77; 19,1 (15,6–23,3)	Н. и. | N. i.
Суспензии органов мелких млекопитающих Suspensions of organs of small mammals	55	3; 5,4 (1,9–14,8)	0; 0 (0–6,5)	Н. и. | N. i.
Суспензии органов рукокрылых Suspensions of bat organs	61	0; 0 (0–5,8)	0; 0 (0–5,8)	Н. и. | N. i.
Верхняя Гвинея | Upper Guinea
Сыворотка крови практически здоровых людей Blood serum of practically healthy people	655	Н. и. | N. i.	Н. и. | N. i.	77; 11,8 (9,5–14,4)
Сыворотка крови КРС | Blood serum of cattle	182	2; 1,1 (0,3–3,9)	Н. и. | N. i.	35; 13,2 (9,6–17,8)
Суспензии клещей | Suspensions of ticks	245	53; 21,6 (16,9–27,2)	28; 0,8 (0,3–2,9)	Н. и. | N. i.
Суспензии органов мелких млекопитающих Suspensions of organs of small mammals	43	2; 4,6 (1,3–15,4)	1; 2,3 (0,4–12,1)	Н. и. | N. i.
Суспензии органов рукокрылых Suspensions of bat organs	54	0; 0 (0–6,6)	0; 0 (0–6,6)	Н. и. | N. i.
Лесная Гвинея | Forest Guinea
Сыворотка крови практически здоровых людей Blood serum of practically healthy people	780	Н. и. | N. i.	Н. и. | N. i.	101; 12,9 (10,7–15,5)
Сыворотка крови КРС | Blood serum of cattle	264	3; 1,1 (0,4–3,3)	Н. и. | N. i.	35; 13,2 (9,6–17,8)
Суспензии клещей | Suspensions of ticks	377	59; 15,6 (12,3–19,7)	61; 16,2 (12,8–20,2)	Н. и. | N. i.
Суспензии органов мелких млекопитающих Suspensions of organs of small mammals	72	3; 4,2 (1,4–11,5)	2; 2,8 (0,8–9,5)	Н. и. | N. i.
Суспензии органов рукокрылых Suspensions of bat organs	76	6; 7,9 (3,7–16,1)	0; 0 (0–4,8)	Н. и. | N. i.
Общее по стране | General by country
Сыворотка крови практически здоровых людей Blood serum of practically healthy people	3156	Н. и. | N. i.	Н. и. | N. i.	366; 11,6 (10,5–12,7)
Сыворотка крови КРС | Blood serum of cattle	1074	14; 1,3 (0,8–2,1)	Н. и. | N. i.	172; 16,0 (13,9–18,3)
Суспензии клещей | Suspensions of ticks	1648	294; 17,8 (16,1–19,8)	307; 18,6 (16,8–20,6)	Н. и. | N. i.
Суспензии органов мелких млекопитающих Suspensions of organs of small mammals	319	16; 5,0 (3,1–8,0)	3; 0,9 (0,3–2,7)	Н. и. | N. i.
Суспензии органов рукокрылых Suspensions of bat organs	298	6; 2,0 (0,9–4,3)	3; 1,0 (0,3–2,9)	Н. и. | N. i.

Примечание. Н. и. — не исследовали.

Note. N. i. — not investigated.

 

Наше исследование позволило расширить данные о циркуляции и распространении C. burnetii в Западной Африке. Актуальной задачей остаётся изучение особенностей циркуляции C. burnetii на территории Гвинеи. Систематически получаемые сведения о выявлении возбудителя и оценка факторов риска возникновения вспышек заболеваний, вызываемых коксиеллами, необходимы для разработки алгоритма лабораторной диагностики и составления рекомендаций для врачей-клиницистов. Регулярный мониторинг за распространением лихорадки Ку, проводимый при участии как медицинских, так и ветеринарных служб Гвинеи, позволит прогнозировать эпидемиологическую ситуацию и координировать профилактические (противоэпидемические) мероприятия в рамках концепции «Единое здоровье» (One Health)³.

 

¹ Countrymeters. Население Гвинеи.

URL: http://countrymeters.info/ru/guinea

² URL: https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi

³ WHO. One health. URL: https://www.who.int/health-topics/one-health#tab=tab_1 (дата обращения: 26.05.2024).

About the authors

Ekaterina V. Naidenova

Russian Research Anti-Plague Institute «Microbe»

Email: katim2003@mail.ru
ORCID iD: 0000-0001-6474-3696

senior researcher, Department of infectious disease diagnostics

Россия, Saratov

Kirill S. Zakharov

Russian Research Anti-Plague Institute «Microbe»

Email: katim2003@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-4726-309X

senior researcher, Department of infectious disease epidemiology

Россия, Saratov

Dmitry A. Agafonov

Russian Research Anti-Plague Institute «Microbe»

Email: katim2003@mail.ru
ORCID iD: 0000-0001-9273-6063

старший научный сотрудник отдела диагностики инфекционных болезней ФКУН Российский противочумный институт «Микроб» Роспотребнадзора, к.б.н.

Россия, Saratov

Mikhail Yu. Kartashov

State Scientific Center of Virology and Biotechnology «Vector»

Email: katim2003@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-7857-6822

Cand. Sci. (Biol.), senior researcher, Department of molecular virology of flaviviruses and viral hepatitis

Россия, Kol’tsovo

Aislu M. Senichkina

Russian Research Anti-Plague Institute «Microbe»

Email: katim2003@mail.ru
ORCID iD: 0000-0003-1026-2680

Cand. Sci. (Biol.), senior researcher, Department of diagnostics of infectious diseases

Россия, Saratov

Erik S. Khalilov

Saint Petersburg Pasteur Research Institute of Epidemiology and Microbiology

Email: katim2003@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-0599-4302

junior researcher, Laboratory of zoonotic infections

Россия, St. Petersburg

Abdoul B. Ibrahim

Research Institute of Applied Biology of Guinea

Email: katim2003@mail.ru
ORCID iD: 0009-0003-2547-8705

researcher, Laboratory of viral hemorrhagic fevers of Guinea

Гвинея, Kindia

Mamadou B. Bah

Research Institute of Applied Biology of Guinea

Email: katim2003@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-4565-269X

researcher

Гвинея, Kindia

Ibrahim Nourdine

Research Institute of Applied Biology of Guinea; Virology Research Center

Author for correspondence.
Email: katim2003@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-2970-9676

Cand. Sci. (Biol.), researcher, Laboratory of viral hemorrhagic fevers of Guinea

Гвинея, Kindia; Conakry

Nikolai K. Tokarevich

Saint Petersburg Pasteur Research Institute of Epidemiology and Microbiology

Email: katim2003@mail.ru
ORCID iD: 0000-0001-6433-3486

D. Sci. (Med.), Professor, Head, Laboratory of zooanthroponotic infections

Россия, St. Petersburg

Sanaba Boumbaly

Research Institute of Applied Biology of Guinea; Virology Research Center

Email: katim2003@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-4506-6033

Cand. Sci. (Biol.), Professor, Director, Laboratory of viral hemorrhagic fevers of Guinea

Гвинея, Kindia; Conakry

Yusuf Sidime

Institute of Veterinary Medicine

Email: katim2003@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-0742-0468

Cand. Sci. (Vet.), Professor, Director, Institute of Veterinary Medicine

Гвинея, Dalaba

Svetlana A. Shcherbakova

Russian Research Anti-Plague Institute «Microbe»

Email: katim2003@mail.ru
ORCID iD: 0000-0003-1143-4069

D. Sci. (Biol.), Deputy director

Россия, Saratov

Vladimir V. Kutyrev

Russian Research Anti-Plague Institute «Microbe»

Email: katim2003@mail.ru
ORCID iD: 0000-0003-3788-3452

D. Sci. (Med.), Professor, Academician of the RAS, Director, Russian Anti-Plague Institute "Microbe"

Россия, Saratov

References

Supplementary files