Том 90, № 3 (2013)

Цель. Определение вирулентности штаммов энтерококков, выделенных из клинического материала от человека, на фено- и генотипическом уровне. Материалы и методы. В исследовании использовано 30 штаммов энтерококков, выделенных из раневого экссудата, мочи, смыва с кожи новорожденных. Идентификацию штаммов осуществляли с помощью мультиплексной ПЦР. Гемолитическую активность определяли чашечным методом, желатиназную - по разжижению столбика желатины, про-теолитическую - биуретовым методом; гены, кодирующие синтез факторов вирулентности (gelE, sprE, cylM, cylB, cylA, cylLs, cylLl, ESP, HYL, ASA) - с помощью ПЦР. Результаты. Клинические изоляты энтерококков отнесены к видам E. faecalis и E. faecium. Выявлены факторы вирулентности на фенотипическом и генотипическом уровне у обоих видов. Заключение. Генетические детерминанты вирулентности более широко распространены среди клинических изолятов вида E. faecalis. Набор генов, кодирующих факторы вирулентности, у E. faecalis зависит от биотопа. Для E. faecium характерен ген, кодирующий синтез гиалуронидазы. Выявлена корреляционная связь между фенотипическим проявлением признаков и генотипом энтерококков.

Цель: Изучение структуры генетической детерминанты амилазной активности (ген amy) у штаммов C.diphtheriae биоваров gravis и mitis. Материалы и методы. Для выявления структурных особенностей штаммов C.diphtheriae разных биоваров проанализировано 87 штаммов C.diphtheriae (31 штамм биовара gravis и 56 штаммов биовара mitis), а также штамм C.diphtheriae PW8. В ПЦР использовано 10 пар праймеров, фланкирующих взаи-моперекрывающиеся области в пределах локуса DIP0357, а также дополнительные праймеры, фланкирующие локусы DIP0353-DIP0354, DIP0357 и DIP0358. Результаты. Установлено, что все штаммы C. diphtheriae биовара gravis содержат полноразмерный локус DIP0357 (ген amy), в то время как у всех штаммов биовара mitis этот фрагмент генома отсутствует. Все исследованные штаммы C. diphtheriae биовара gravis не имеют существенных изменений в пределах локусов DIP0354-DIP0357 (ген amy), в то время как в геноме 57 исследованных штаммов C. diphtheriae биовара mitis большая часть этого фрагмента, в том числе, вся нуклеотидная последовательность гена amy, отсутствует. Заключение: Штаммы C. diphtheriae биовара gravis обладают генетически детерминированной способностью продуцировать амилазу, что можно рассматривать как дополнительный фактор патогенности, дающий микроорганизмам более широкие возможности колонизировать слизистую оболочку ротоглотки.

Цель. Оценка CD3+ и CD3-/CD56+ пролиферативного ответа на антигены вируса гепатита С у здоровых медработников. Материалы и методы. Исследование включало 15 медицинских работников со стажем работы 2 и более лет без распространенных факторов риска (переливание крови и продуктов крови, полостных операций, инвазивных процедур, употребления внутривенных наркотиков). Контрольная группа состояла из 9 здоровых добровольцев без факторов риска. Из крови изолировали периферические мононуклеары, которые затем инкубировали 72 часа в присутствии митогена/ФГА, Core+NS4 1b генотипа ВГС, NS4 ВГС 2a+3a генотипов или среды. Пролиферативную активность регистрировали по наличию маркера клеточного деления ki67 с использованием FACS. Результаты. Исходная иммунограмма медработников отличалась от контрольной группы достоверно более низким количеством CD3+ лимфоцитов, в частности популяции CD3+/CD8+. Инкубация с ФГА приводила к уменьшению числа CD3+/ki67+, CD4+/ki67+ и CD3-/ CD56+/ki67+ в группе медработников. Культивирование с антигенами ВГС приводило к значимому уменьшению популяции Treg (CD3+/CD25high/FoxP3+) и активированных T-лимфоцитов в случае стимуляции антигенами Core и NS4 1b генотипа. Анализ клеточного ответа на антигены вируса на основе индекса пролиферативной активности выявил значимые различия только для CD8+/ki67+. Стимуляция антигенами Core и NS4 1b генотипа приводила к увеличению количества этих клеток, тогда как в случае NS4 2a+3a генотипов наблюдалось их уменьшение. Заключение. Описанные изменения могут отражать истощение клеточной реактивности из-за дополнительной антигенной нагрузки в группе медработников, при этом отмечаются дифференцированные иммунологические сдвиги на антигены вируса гепатита С различных генотипов.

Цель. Изучение безопасности, peaктогенности, иммуногенности и профилактической эффективности полисахаридной пневмококковой вакцины при иммунизации взрослых ВИЧ-инфицированных пациентов. Материалы и методы. В исследовании приняли участие 200 ВИЧ-инфицированных пациентов с 3 и 4А стадией заболевания в возрасте от 20 до 50 лет, имеющие количество СД4+ Т-лимфоцитов в крови не ниже 500 мкл -1. Группу наблюдения составили 100 человек, привитых полисахаридной 23-валентной пневмококковой вакциной (Пневмо 23, Санофи Пастер, Франция). Группу сравнения составили 100 человек, не привитых против пневмококковой инфекции. Группы стандартизованы по полу, возрасту, стадии болезни. Реактогенность вакцины оценивали по выявлению общих и местных поствакцинальных реакций, степени их выраженности и длительности. Безопасность вакцины оценивалась на основании сравнительной оценки результатов общеклинических и биохимических исследований крови, общего анализа мочи, определения в сыворотке крови IgE, уровня СД4+ Т-лимфоцитов, количества РНК ВИЧ (вирусная нагрузка) до вакцинации и спустя 28 дней после иммунизации. Иммуногенность вакцины оценивали путем определения в сыворотке крови IgG к смеси полисахаридов Streptococcus рneumoniaе, входящих в состав Пневмо 23. Профилактическая эффективность препарата оценивалась путем сопоставления заболеваемости острыми респираторными заболеваниями в группах наблюдения и сравнения. Результаты. При иммунизации ВИЧ-инфицированных пациентов против пневмококковой инфекции поствакцинальные осложнения, сильные местные и общие поствакцинальные реакции не выявлены, лабораторные исследования, проведенные до и после иммунизации, свидетельствовали об отсутствии прогрессирования основного заболевания и активизации инфекционного процесса. После иммунизации средняя геометрическая титра антител к полисахаридам S. рneumoniaе увеличилась в 2 раза и достигла протективного уровня. Индекс профилактической эффективности вакцины Пневмо 23 при иммунизации ВИЧ-позитивных пациентов составил 5,6, а относительный риск заболевания в группе привитых - 0,07, в контрольной группе - 0,42. Заключение. Приведенные данные свидетельствуют о высоком профилактическом эффекте вакцинации иммунокомпро-метированных ВИЧ-позитивных пациентов при отсутствии ухудшения течения основного заболевания.

Цель. Определить субпопуляционный состав лимфоцитов крови и уровень экспрессии генов TLR2 и TLR9 эпителиальными клетками слизистой оболочки цервикального канала у женщин репродуктивного возраста с воспалительными заболеваниями органов малого таза (ВЗОМТ) в стадии обострения и в период ремиссии. Материалы и методы. Проведено клинико-лабораторное и гинекологическое обследование 105 женщин, и по полученным результатам сформированы 3 группы: пациентки в стадии обострения ВЗОМТ; пациентки в стадии ремиссии; клинически здоровые женщины. С помощью ПЦР в режиме реального времени определяли уровень экспрессии генов TLR2, TLR9 в эпителиальных клетках слизистой оболочки цервикального канала у женщин всех 3 групп. Субпопуляционный состав лимфоцитов крови определяли методом проточной цитофлюориметрии с использованием моноклональных антител с маркерами CD45+ CD 3+ - T-клеток, CD45+ CD3+ CD4+ - Т-хелперов, CD45+, CD3+, CD8+ - Т-супрессоров-цитотоксических киллеров, CD45+, CD3-, CD16+, CD56+ - натуральных киллеров, CD45+, CD3-, CD19+ - В-лимфоцитов. Учет реакции иммунофлуоресценции проводили на проточном цитоф-луориметре «CYTOMICS FC 500» (Becton Coulter,USA). Результаты. Установлено, что уровень экспрессии гена TLR2 в исследуемых группах больных статистически значимо не отличался от показателей в группе сравнения, хотя следует отметить, что данный показатель у женщин с ВЗОМТ в стадии обострения (возбудители инфекционного процесса - уреаплазма, стафилококк, кандида) был несколько выше, чем в группе сравнения. Выявлено, что достоверно высокий уровень экспрессия гена TLR9 в эпителиальных клетках слизистой цервикального канала коррелировал с наличием инфекционных возбудителей. В группе женщин с обострением инфекционного процесса экспрессия гена TLR9 была увеличена в 14,5 раза по сравнению с группой женщин без ВЗОМТ. В группах женщин с ВЗОМТ не было выявлено достоверных различий по отношению к группе контроля в относительном и абсолютном уровне Т-лимфоцитов CD3+; Т-хелперов CD4+, Т-супрессо-ров CD8 + цитотоксических киллеров. Содержание В-лимфоцитов достоверно не различалось во всех группах. Заключение. Повышение уровня экспрессии гена TLR9 в клетках цервикального канала женщин с ВЗОМТ может служить дополнительным диагностическим признаком наличия и степени выраженности заболевания.

Цель. Оценка показателей качества сконструированных холерных антигенных полимерных диагностикумов с помощью комплекса специфичных противохолерных сывороток. Материалы и методы. Сенситином для экспериментальных препаратов являлись клеточные лизаты штаммов Vibrio cholerae cholerae 1395, V. eltor Огава 2044, V. eltor Инаба 13020, V. cholerae О139 16064. В качестве контроля использовали 3 сыворотки от больных холерой, нормальную человеческую сыворотку, холерные О1 (Огава, Инаба) коммерческие лошадиные, холерные О139 коммерческие кроличьи и гетерологичные сыворотки к шигеллам, сальмонеллам, эшерихиям и иерсиниям, а также экспериментальные холерные кроличьи сыворотки О1 и О139. Результаты. В ходе исследования установили, что по показателям качества диагностикумы на основе сенсетинов штаммов V. cholerae cholerae 1395 и V. cholerae О139 16064 можно в дальнейшем использовать для конструирования данных диагностикумов. Заключение. Контролем экспериментальных диагностикумов при отсутствии человеческих сывороток от больных холерой могут служить антителосодержащие препараты - коммерческие лошадиные сыворотки О1, кроличьи экспериментальные и коммерческие сыворотки и МКА О139, демонстрирующие титры не ниже 1/51201/10240.

Цель. Изучение адгезивной активности и скорости роста у грибов рода Fusarium, выделенных с поверхности кожного покрова у больных атопическим дерматитом (АД). Материалы и методы. В исследовании использовали клинические и музейные штаммы F.oxysporum, F.solani. Посев проводили на агаризованную среду Чапека и Сабуро. Исследовали культуры в течение девяти суток при 30+2°C. Адгезивные свойства грибов определяли с помощью модели на основе нитроцеллюлозной пленки (Лисовская С.А. и др., 2006). Результаты. Проведенные исследования показали статистически достоверные отличия адгезивных свойств и интенсивности прорастания различных видов Fusarium spp. Уровень адгезии микроконидий F.solani был почти в 2,5 раза выше по сравнению с F.oxysporum. Формирование первой ростковой трубки микроконидиями вида F.solani отмечали в первые десять часов, тогда как у F.oxysporum - только на вторые сутки. Заключение. Полученные данные подтверждают видовые различия патогенных свойств Fusarium spp., что подчеркивает значимость видовой идентификации грибов.

На спонтанную и индуцированную лечением элиминацию вируса гепатита С влияют разнообразные факторы макроорганизма. Стандартная терапия представляет собой применение комбинации пегилированных интерферонов (PEG-IFN) и рибавирина. Однако такая тактика приводит к достижению устойчивого вирусологического ответа примерно в половине случаев при инфицировании 1 генотипом вируса. Будущее в лечении вирусного гепатита С, вероятнее всего, лежит в сфере применения в качестве дополнения к стандартной терапии специфических противовирусных препаратов, таких как протеазные и/или полимеразные ингибиторы. Цель настоящего обзора заключалась в описании механизмов устойчивости к терапии в свете реакций врожденного и адаптивного иммунного ответа, а также в попытке определения факторов, способных прогнозировать ответ на лечение.

Система врожденного иммунитета представляет собой набор эффекторных молекул и клеток, противодействующих инвазии патогенов и их продуктов. Альфа-2-макроглобулин (а2-МГ) и лак-тоферрин (ЛФ) играют значительную роль в первичной защите организма. Широкий спектр транспортных и регуляторных функций, высокое сродство к рецептору эндоцитоза, а также структурные особенности данных белков позволяют им не только эффективно защищать организм при непосредственном контакте с патогеном, но и оказывать модулирующее воздействие на иммунокомпе-тентные клетки адаптивного иммунитета. Однако, несмотря на общий рецептор и ряд лигандов, механизмы реализации защитных функций а2-МГ и ЛФ значительно различаются. Цель данного обзора - систематизация знаний о способах и механизмах защиты а2-МГ и ЛФ от патогенной инвазии.