Antigenic identity of immunodominant proteins of Bacillus anthracis genovariants

Cover Image


Cite item

Full Text

Abstract

Introduction. The main biological raw materials for the production of immunobiological preparations for identification of Bacillus anthracis are its specific antigens, the protective antigen and the EA1 protein.

Purpose. To determine the antigenic identity of immunodominant proteins of different genovariants of B. anthracis isolated by gel chromatography and electrophoresis.

Materials and methods. Culture filtrates of isogenic variants of B. anthracis strain 575/122 (pXO1+, pXO2+): R01 (pXO1+, pXO2–); R00 (pXO1–, pXO2–) were used in the study. Gel chromatographic fractionation and electrophoretic separation were carried out according to standard methods. The antigenic properties of proteins isolated by gel chromatography and electrophoresis were studied by immunodiffusion with polyclonal monospecific sera against the protective antigen and the EA1 protein of the S-layer.

Results. Gel chromatographic separation of B. anthracis 575/122 culture filtrates R01 (pXO1+, pXO2–) and R00 (pXO1–, pXO2–)yielded fractions 1 and 5. Sera against EA1 protein and antigens of fraction 1 of strains B. anthracis 575/122 R00 and B. anthracis 575/122 R01 culture filtrates identified the identical antigens. Serum against antigens of fraction 5 of B. anthracis 575/122 R01 contained antibodies to numerous proteins, including the protective antigen isolated by electrophoresis.

Discussion. The antigenic identity of immunodominant proteins isolated by gel chromatography and electrophoresis was identified.

Conclusion. EA1 and PA proteins isolated by electrophoresis and gel chromatography can be used for production of monoclonal and polyclonal monospecific antibodies suitable for the design of diagnostic preparations.

Full Text

Введение

Основным биологическим сырьём при производстве иммунобиологических препаратов являются специфические антигены, выделенные из микробных биомасс, и иммунные сыворотки, полученные на их основе. При многообразии способов извлечения специфических антигенов из микробных клеток необходим комплекс последовательных манипуляций, который бы позволил изолировать полноценные в антигенном отношении фракции для производственных целей [1].

В качестве сырья при создании иммунобиологических препаратов для индикации и идентификации Bacillus anthracis используются иммунодоминантные белки, в том числе протективный антиген (ПА) и белок поверхностных структур ЕА1 (extractable antigen) [2–5].

Ранее нами изучены внеклеточные антигены B. anthracis, выделенные гель-хроматографией и электрофорезом [6, 7]. Иммунодоминантные белки электрофоретических фракций идентифицированы MALDI-TOF MS как ПА (молекулярная масса (ММ) 85,810 кДа) и ЕА1 (ММ 91,360 кДа) [8].

Цель работы — определить антигенную идентичность иммунодоминантных белков, выделенных гель-хроматографией и электрофорезом, различных геновариантов B. anthracis.

Материалы и методы

В работе использованы изогенные варианты вирулентного штамма B. anthracis 575/122 (рХО1+, рХО2+): токсинпродуцирующий 575/122 R01 (рХО1+, рХО2–); бесплазмидный 575/122 R00 (рХО1–, рХО2–) [9]. Исходный вирулентный штамм был получен из лаборатории коллекционных штаммов Волгоградского научно-исследовательского противочумного института Роспотребнадзора (выделен санэпидемслужбой Молдавской ССР из шкуры крупного рогатого скота в июле 1982 г.).

Для получения бесклеточных культуральных фильтратов (КФ) использовали жидкую питательную среду Ristroph (R-среду) рН 8,0–8,3 и R-среду с казаминовыми кислотами («Difco») из расчёта 4 г/л питательной среды [10]. Штаммы культивировали при 37ºС в течение 18 ч, при 72 об/мин в биологическом шейкере «Exсella E-25/25R» («Еppendorf»). Культуральную жидкость стерилизовали фильтрованием через фильтр ДР045, стерильность определяли высевом на сердечно-мозговой агар и в сердечно-мозговой бульон. КФ концентрировали на установке ДС 2 «Amicon» с волоконными фильтрами HLP10 («Amicon»), а затем на ультрафильтре PM10 [6].

Гель-хроматографическое фракционирование с использованием сверхтонкого сефакрила S-300 HR «Pharmacia» в объёме 2,5 × 5,6 см и электрофоретическое разделение в 10% полиакриламидном геле проводили по стандартным методикам [6, 7]. Белки визуализировали в блоке геля охлаждённым раствором 0,1М КСl. Белковые фракции вырезали, гомогенизировали и экстрагировали углекислым аммонием [7].

Кроличьи сыворотки к гель-хроматографическим фракциям и кроличьи моноспецифические поликлональные сыворотки к белку ЕА1 и ПА получали по методике, описанной ранее [6–8].

Все работы с экспериментальными животными согласованы и утверждены в рамках темы 084-3-15 «Детекция иммунодоминантных антигенов штаммов Bacillus anthracis с различным набором плазмид вирулентности» на заседании комиссии по биоэтике (протокол № 2 от 22.05.2016).

Идентичность белков, выделенных гель-хроматографией и электрофорезом [9], определяли в реакции иммунодиффузии (РИД) [11].

Результаты

В ходе работы получены КФ штаммов B. anthracis 575/122 R01 (рХО1+, рХО2–) с содержанием белка 9,8 мг/мл и B. anthracis 575/122 R00 (рХО1–, рХО2–) с содержанием белка 5,5 мг/мл, проведено их гель-хроматографическое разделение. Хроматограммы изогенных вариантов штамма B. anthracis 575/122 соответствовали хроматограммам КФ штаммов с аналогичным набором плазмид вирулентности, а именно B. anthracis СТИ (рХО1+, рХО2–) и B. anthracis 81/1 R00 (рХО1–, рХО2–) (рис. 1) [6].

 

Рис. 1. Хроматограммы культуральных фильтратов B. anthracis.

Fig. 1. Chromatograms of B.anthracis culture filtrates.

 

При электрофоретическом разделении белков КФ штамма B. anthracis 575/122 R01 определялся преимущественно белок с ММ 85,810 кДа, который был идентифицирован в МАLDI-TOF MS как ПА, а КФ B. anthracis 575/122 R00 содержал белки: 91,361 кДа, идентифицированный как ЕА1 [8], и ММ 87 кДа, который в МАLDI-TOF MS не удалось определить, однако по ММ он совпадал с белком Sap B. anthracis (86,7 кДа) [12].

К электрофоретическим фракциям были получены кроличьи иммунные поликлональные сыворотки, которые использовались для постановки РИД с КФ B. anthracis 575/122 R01. Иммунопреципитаты к белкам S-слоя образовывались через 2 ч (рис. 2, а), а к ПА — через 18 ч (рис. 2, б).

 

Рис. 2. РИД в геле белков электрофоретических фракций РИД через 2 ч (а) и через 18 ч (б).

1 — сыворотка к КФ B. anthracis 575/122 R01; 2 — ПА B. anthracis 575/122 R01; 3 — ЕА1 B. anthracis 575/122 R00; 4 — белок B. anthracis 575/122 R00 ММ 87 кДа.

Fig. 2. Gel immunodiffusion of proteins from electrophoretic fractions after 2 hours (а) and 18 hours (b) incubation.

1 — serum to culture filtrate of B. anthracis 575/122 R01; 2 — protective antigen of B. anthracis 575/122 R01; 3 — EA1 B. anthracis 575/122 R00; 4 — 87 kDa protein of B. anthracis 575/122 R00.

 

Для определения в РИД идентичности белков гель-хроматографических и электрофоретических фракций использованы КФ штаммов B. anthracis 575/122 R01 и B. anthracis 575/122 R00; сыворотки к фракции 1 КФ B. anthracis 575/122 R01 и 575/122 R00 и фракции 5 КФ B. anthracis 575/122 R01; сыворотки к белку ЕА1, белку ММ 87 кДа и к ПА КФ B. anthracis 575/122 R01.

В результате РИД белки фракции 1 КФ B. anthracis 575/122 R01 и 575/122 R00 и белки ЕА1 и 575/122 R00 ММ 87 кДа, выделенные электрофорезом, образовывали идентичную иммунопреципитирующую линию.

Сыворотка к фракции 5 штамма B. anthracis 575/122 R01 формировала иммунопреципитаты как с КФ B. anthracis 575/122 R01, так и с КФ B. anthracis 575/122 R00. Сыворотка к ПА, выделенному в электрофорезе, образовывала одну гомогенную линию с КФ B. anthracis 575/122 R01, с B. anthracis 575/122 R00 преципитирующих линий не выявлено (рис. 3).

 

Рис. 3. Антигены, выявляемые сыворотками к белкам гель-хроматографических и электрофоретических фракций.

а: 1 — КФ B. anthracis 575/122 R01; 2 — КФ B. anthracis 575/122 R00; 3 — сыворотка к белку ЕА1 КФ B. anthracis 575/122 R00; 4 — сыворотка к фракции 1 КФ B. anthracis 575/122 R01; 5 — сыворотка к фракции 5 КФ B. anthracis 575/122 R01; 6 — сыворотка к фракции 1 КФ B. anthracis 575/122 R00; 7 — сыворотка к белку КФ B. anthracis 575/122 R00 ММ 87 кДа; 8 — сыворотка к ПА КФ B. anthracis 575/122 R01; б: 1 — сыворотка к фракции 1 КФ B. anthracis575/122 R01; 2 — сыворотка к белку ЕА1 КФ B. anthracis 575/122 R00; 3 — сыворотка к фракции 5 КФ B. anthracis 575/122 R01; 4 — сыворотка к ПА КФ B. anthracis 575/122 R01; 5 — КФ B. anthracis 575/122 R00; 6 — КФ B. anthracis 575/122 R01.

Fig. 3. Antigens detected by sera to proteins from fractions separated in gel-chromatography and electrophoresis.

а: 1 — culture filtrate of B. anthracis 575/122 R01; 2 — culture filtrate of B. anthracis 575/122 R00; 3 — serum to EA1 protein from B. anthracis 575/122 R00 culture filtrate; 4 — serum to fraction 1 of B. anthracis 575/122 R01 culture filtrate; 5 — serum to fraction 5 of B. anthracis 575/122 R01 culture filtrate; 6 — serum to fraction 1 of B. anthracis 575/122 R00 culture filtrate; 7 — serum to 87 kDa protein from B. anthracis 575/122 R00 culture filtrate; 8 — serum to protective antigen from B. anthracis 575/122 R01 culture filtrate; b: 1 — serum to fraction 1 of B. anthracis 575/122 R01 culture filtrate; 2 — serum to EA1 protein from B. anthracis 575/122 R00 culture filtrate; 3 — serum to fraction 5 of B. anthracis 575/122 R01 culture filtrate; 4 — serum to protective antigen of B.anthracis 575/122 R01 culture filtrate; 5 — culture filtrate of B. anthracis 575/122 R00; 6 — culture filtrate of B. anthracis 575/122 R01.

 

Обсуждение

Для конструирования диагностических тест-систем основными мишенями являются специфические антигены возбудителей заболеваний и иммунные сыворотки на их основе. Для B. anthracis в настоящее время таковыми являются белок EA1 и ПА [2–4, 13–15].

Существует достаточно большое количество эффективных методик получения антигенов из микробных клеток. Нами в течение ряда лет были освоены способы выделения ПА и белка ЕА1. Изучена видовая специфичность сывороток к белкам, выделенным гель-хроматографией из КФ штаммов B. anthracis с различным содержанием плазмид вирулентности, определена возможность использования ПА для обнаружения антител в реакции непрямой гемагглютинации и в твердофазном иммуноферментном методе, а белка ЕА1 возбудителя сибирской язвы — в методе флуоресцирующих антител [6, 16, 17]. В последующих исследованиях данные белки были выделены из КФ изогенных вариантов B. anthracis, накоплены в препаративном электрофорезе, идентифицированы в MALDI-TOF MS, а также определено их диагностическое значение [7–9].

Целью настоящей работы являлось установление идентичности антигенов, выделенных гель-хроматографией и электрофорезом, различных геновариантов B. anthracis. Для этого были получены гипериммунные кроличьи сыворотки. Процесс получения сывороток к гель-хроматографическим фракциям занимал меньше времени. Для получения сывороток к белкам ЕА1 и ММ 87 кДа нам понадобилось около 18 мес. При гель-проникающей хроматографии происходит разделение по молекулярным весам, но тонкая очистка невозможна, и фракции содержат смесь антигенов с преобладанием того или другого. В нашей работе в РИД сыворотки к белкам ЕА1 и ММ 87 кДа, выделенным из полиакриламидного геля, а также сыворотки к первым фракциям КФ бесплазмидного и токсинпродуцирующего штаммов выявили идентичные антигены. Следовательно, в данных гель-хроматографических фракциях содержатся белки S-слоя ММ 94 и 87 кДа (ЕА1 и Sар) [12]. Сыворотка к ПА B. anthracis 575/122 R01, выделенному электрофорезом, в отличие от сыворотки к фракции 5, образовывала одну чёткую гомогенную линию с КФ B. anthracis 575/122 R01, а с КФ B. anthracis 575/122 R00 иммунопрецепитатов не выявлено. Препаративный электрофорез позволяет не только определять ММ белков с точностью до 5%, но и даёт высокое разрешение, переводит в растворимую форму большинство белков, которые нельзя солюбилизировать другими методами [18]. Происходит более эффективное разделение белков, чем гель-хроматографией, что подтверждено данными иммуноблотинга [7].

Важнейшим качеством, определяющим иммуногенность антигенов, являются размер молекулы, доза вводимого антигена, пространственная структура белка. Смесь белковых компонентов вызывает более выраженный иммунный ответ, чем введение очищенного антигена [19], что объясняет длительность получения сывороток к белкам, выделенным электрофорезом.

Таким образом, нами при помощи электрофореза и гель-хроматографии в препаративных количествах накоплен ряд идентичных белков геновариантов B. anthracis, что в дальнейшем позволит использовать данные методики при разработке схем иммунизации для получения моноклональных и поликлональных моноспецифических антител, пригодных для конструирования диагностических препаратов.

Этическое утверждение. Авторы подтверждают соблюдение институциональных и национальных стандартов по использованию лабораторных животных в соответствии с «Consensus Author Guidelines for Animal Use» (IAVES, 23.07.2010). Все работы с экспериментальными животными согласованы и утверждены в рамках темы 084-3-15 «Детекция иммунодоминантных антигенов штаммов Bacillus anthracis с различным набором плазмид вирулентности» на заседании комиссии Волгоградского научно-исследовательского противочумного института по биоэтике (протокол № 2 от 22.05.2016).

Ethics approval. Authors confirm compliance with institutional and national standards for the use of laboratory animals in accordance with «Consensus Author Guidelines for Animal Use» (IAVES, 23 July 2010). All work with experimental animals was agreed and approved within the framework of topic 084-3-15 "Detection of immunodominant antigens of Bacillus anthracis strains with a different set of virulence plasmids" at a meeting of the commission of the Volgograd Research Anti-Plague Institute on Bioethics (protocol No. 2 of May 22, 2016).

×

About the authors

Margarita P. Izhberdeeva

Volgograd Plague Control Research Institute

Author for correspondence.
Email: margaritakovylina@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-2979-4452

researcher, Laboratory of bioinformatic analysis

Russian Federation, Volgograd

Anastasiya A. Sautkina

Volgograd Plague Control Research Institute

Email: margaritakovylina@mail.ru
ORCID iD: 0000-0001-6302-4438

researcher, Laboratory of the operative diagnostic of bacterial and viral infections

Russian Federation, Volgograd

Irina A. Barkova

Volgograd Plague Control Research Institute

Email: margaritakovylina@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-5036-0034

Cand. Sci. (Med.), assistant professor, senior researcher, Specialist training department

Russian Federation, Volgograd

Dmitry V. Viktorov

Volgograd Plague Control Research Institute

Email: margaritakovylina@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-2722-7948

D. Sci. (Biol.), assistant professor, assistant director for science and experiment issues

Russian Federation, Volgograd

References

  1. Тюменцева И.С., Жарникова И.В., Афанасьев Е.Н. и др. Научно-методические разработки биотехнологий производства иммунобиологических препаратов для экспресс-диагностики инфекционных заболеваний и детекции их возбудителей. Биопрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2015;(4):21–5. Tyumentseva I.S., Zharnikova I.V., Afanas'ev E.N., et al. Scientific and methodical development of biotechnological production of immunobiological preparations for instant diagnosis of infectious diseases and detection of pathogens. Biopreparation. Prevention, diagnosis, treatment. 2015;(4):21–5. EDN: https://www.elibrary.ru/vaehbl
  2. Wang D., Yang R., Zhang Z.P., et al. Detection of B. anthracis spores and vegetative cells with the same monoclonal antibodies. PLoS One. 2009;4(11):e7810. DOI: https://doi.org/10.1371/journal.pone.0007810
  3. Makam S., Kingston J., Ramakrishna U., et al. Аpplication of extractable antigen 1 (ЕА1) for specific detection of Bacillus anthracis cells. Int. J. Pharm. Bio. Sci. 2013;4(2):274–83.
  4. Walper S.A., Anderson G.P., Brozozog P.A., et al. Rugged single domain antibody detection elements for Bacillus anthracis spores and vegetative cells. PLoS One. 2012;7(3):e32801. DOI: https://doi.org/10.1371/journal.pone.0032801
  5. Alexander N.W., Brian N.W., Shihui L., et al. Small molecule inhibitors of Bacillus anthracis protective antigen proteolytic activation and oligomerization. J. Med. Chem. 2012;55(18): 7998–8006. DOI: https://doi.org/10.1021/jm300804e
  6. Баркова И.А., Барков А.М., Алексеев В.В. и др. Продукция белков S — слоя разными штаммами Bacillus anthracis. Проблемы особо опасных инфекций. 2008;(4):29–32. Barkova I.A., Barkov A.M., Alekseev V.V., et al. Production of S-layer proteins by different Bacillus anthracis strains. Problems of Particularly Dangerous Infections. 2008;(4):29–32. DOI: https://doi.org/10.21055/0370-1069-2008-4(98)-29-32 EDN: https://www.elibrary.ru/kvekch
  7. Баркова И.А., Червакова М.П., Барков А.М. и др. Диагностическое значение некоторых иммунодоминантных белков изогенных вариантов Bacillus anthracis. Клиническая лабораторная диагностика. 2016;61(12):833–8. Barkova I.A., Chervakova M.P., Barkov A.M., et al. The diagnostic significance of particular immune-dominating proteins of isogenic variants of Bacillus anthracis. Clinical Laboratory Diagnostics. 2016;61(12):833–8. DOI: https://doi.org/10.18821/0869-2084-2016-61-12-833-837 EDN: https://www.elibrary.ru/xscfrt
  8. Червакова М.П., Шаров Т.Н., Беркова И.А. и др. Идентификация иммуногены белков штаммов Bacillus anthracis в MALDI TOF MS. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2018;95(1):52–7. Chervakova M.P., Sharov T.N., Berkova I.A., et al. Identification of immunogenic proteins of strains of Bacillus anthracis in MALDI TOF MS. Journal of Microbiology Epidemiology and Immunobiology. 2018;95(1):52–7. DOI: https://doi.org/10.36233/0372-9311-2018-1-52-57 EDN: https://www.elibrary.ru/yxtuxr
  9. Баркова И.А., Новоженина А.В., Барков А.М. и др. Характеристика изогенных вариантов Bacillus anthracis с различным содержанием плазмид вирулентности. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2015;92(1):17–22. Barkova I.A., Novozhenina A.V., Barkov A.M. Characteristics of isogenic variants of Bacillus anthracis with various content of virulence plasmids. Journal of Microbiology Epidemiology and Immunobiology. 2015;92(1):17–22. EDN: https://www.elibrary.ru/vobdpf
  10. Маринин Л.И., Онищенко Г.Г., Степанов А.В. и др. Микробиологическая диагностика сибирской язвы. М.; 1999. Marinin L.I., Onishchenko G.G., Stepanov A.V., et al. Microbiological Diagnostics of Anthrax. Moscow; 1999.
  11. Баркова И.А., Липницкий А.В., Барков А.М., Евтеева Е.В. Использование иммуноглобулинов к отдельным внеклеточным антигенам Bacillus anthracis СТИ для идентификации сибиреязвенного микроба. Биотехнология. 2005;(2):91–6. Barkova I.A., Lipnitskiy A.V., Barkov A.M., Evteeva E.V. Use of immunoglobulins to individual extracellular antigens of Bacillus anthracis STI for identification of the anthrax microbe. Biotechnology in Russia. 2005;(2):91–6. EDN: https://www.elibrary.ru/hvtscr
  12. Lamonica J.M., Wagner M., Eschenbrenner M., et al. Comparative secretome analyses of three Bacillus anthracis strains with variant plasmid contents. Infect. Immun. 2005;73(6):3646–58. DOI: https://doi.org/10.1128/iai.73.6.3646-3658.2005
  13. Love T.E., Redmond C., Mayers C.N. Real time detection of anthrax spores using highly specific anti-EA1 recombinant antibodies produced by competitive panning. J. Immunol. Methods. 2008;334(1-2):1–10. DOI: https://doi.org/10.1016/j.jim.2007.12.022
  14. Хлынцева А.Е., Лунева Н.М., Белова Е.В. и др. Разработка и испытания диагностикума на основе моноклональных антител для определения спор возбудителя сибирской язвы в реакции латекс-агглютинации. Проблемы особо опасных инфекций. 2011;4:71–5. Khlyntseva A.E., Luneva N.M., Belova E.V., et al. Development and testing of monoclonal antibodies-based diagnostic preparation for Bacillus anthracis spores detection using latex agglutination method. Problems of Particularly Dangerous Infections. 2011;4:71–5. DOI: https://doi.org/10.21055/0370-1069-2011-4(110)-71-75 EDN: https://www.elibrary.ru/ojsmab
  15. Семакова А.П., Микшис Н.И., Попова П.Ю. и др. Повышение эффективности и стабильности прототипа вакцины сибиреязвенной химической на основе рекомбинантного протективного антигена. В кн.: Попова А.Ю., Кутырев В.В., ред. Общие угрозы — совместные действия. Ответ государств БРИКС на вызовы опасных инфекционных болезней Материалы международной конференции. М.; 2015:341–4. Semakova A.P., Mikshis N.I., Popova P.Yu., et al. Improving the effectiveness and stability of the prototype of a chemical anthrax vaccine based on a recombinant protective antigen. In: Popova A.Yu., Kutyrev V.V., eds. Common Threats are Joint Actions. The Response of the BRICS States to the Challenges of Dangerous Infectious Diseases: Materials of the International Conference. Moscow; 2015:341–4. EDN: https://www.elibrary.ru/vwuizx
  16. Баркова И.А., Барков А.М., Алексеев В.В., Липницкий А.В. Видоспецифические сыворотки против антигенов поверхностных структур штаммов Bacillus anthracis. Клиническая лабораторная диагностика. 2010;(11):51–3. Barkova I.A., Barkov A.M., Alekseev V.V., Lipnitskii A.V. Species-specific sera against antigens of the surface structures of Bacillus anthracis strains. Clinical Laboratory Diagnostics. 2010;(11):51–3. EDN: https://www.elibrary.ru/nbnhwx
  17. Барков А.М., Баркова И.А., Алексеев В.В. и др. Обнаружение антител к протективному антигену Bacillus anthracis с использованием реакции непрямой гемагглютинации и твердофазного иммуноферментного метода. Проблемы особо опасных инфекций. 2010;(3):42–5. Barkov A.M., Barkova I.A., Alekseev V.V., et al. Detection of antibodies to protective antigen of Bacillus anthracis using indirect hemagglutination test and enzime-linked immunosorbent assay. Problems of Particularly Dangerous Infections. 2010;(3):42–5. DOI: https://doi.org/10.21055/0370-1069-2010-3(105)-42-45 EDN: https://www.elibrary.ru/mumfjl
  18. Гааль Э., Медьеши Г., Верецкеи Л. Электорофорез в разделении биологических макромолекул. М.; 1982. Gaal O., Medgyesi G.A., Vereczkey L. Electrophoresis in the Separation of Biological Macromolecules. Budapest; 1980.
  19. Супрун Е.Н. Часть вторая причина иммунологической реакции. Аллергология и иммунология в педиатрии. 2013;(1):26–32. Suprun E.N. Reason of immunological reaction (part 2). Allergology and Immunology in Pediatrics. 2013;(1):26–32. EDN: https://www.elibrary.ru/wxghal

Supplementary files

Supplementary Files
Action
1. JATS XML
Download
2. Fig. 1. Chromatograms of B.anthracis culture filtrates.

Download (130KB)
Indexing metadata
3. Fig. 2. Gel immunodiffusion of proteins from electrophoretic fractions after 2 hours (а) and 18 hours (b) incubation.

Download (67KB)
Indexing metadata
4. Fig. 3. Antigens detected by sera to proteins from fractions separated in gel-chromatography and electrophoresis.

Download (94KB)
Indexing metadata

Copyright (c) 2023 Izhberdeeva M.P., Sautkina A.A., Barkova I.A., Viktorov D.V.

Creative Commons License
This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: ПИ № ФС77-75442 от 01.04.2019 г.


This website uses cookies

You consent to our cookies if you continue to use our website.

About Cookies