Том 97, № 1 (2020)
- Год: 2020
- Дата публикации: 02.04.2020
- Статей: 14
- URL: https://microbiol.crie.ru/jour/issue/view/27
- DOI: https://doi.org/10.36233/0372-9311-2020-97-1
Весь выпуск
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Получение и характеристика моноклональных антител к G-белку респираторно-синцитиального вируса
Аннотация
Цель работы состояла в получении гибридом, продуцирующих моноклональные антитела (МКА) к G-белку респираторно-синцитиального вируса (РСВ), и в изучении их иммунологических характеристик и вируснейтрализующей активности.
Материал и методы. Мышиные МКА получали с помощью гибридомной технологии. Свойства МКА изучали методами иммуноферментного анализа (ИФА), иммунофлюоресцентного окрашивания (ИФл) зараженных клеток культуры, а также в реакции биологической нейтрализации in vitro (РБН). Взаимное расположение эпитопов, выявляемых МКА на G-белке, определяли с помощью теста аддитивности в ИФА.
Результаты. Гибридизация спленоцитов с клетками миеломы Sp2/0 и первичный скрининг показали, что 75 гибридом продуцируют МКА, взаимодействующие с очищенным вирусом, 17 из которых реагируют также и с рекомбинантным G-белком в ИФА. В РБН 4 гибридомы подавляли РСВ-инфекцию in vitro более чем на 50%. Клонирование этих гибридом позволило выявить 4 моноклона, продуцирующих наиболее активные МКА. МКА 1С11 принадлежали к IgG2a, 3 других (5D4, 5G11 и 6H4) — к IgM. 3 МКА IgM активно реагировали как с РСВ А2 и Long, так и с G-белком, МКА 1С11 были менее активны со всеми антигенами. Все МКА подавляли РСВ-инфекцию, причем МКА 5D4 — практически полностью (98%). ИФл-анализ показал, что все МКА выявляли G-белок РСВ в цитоплазме клеток культуры, наибольшее количество зараженных клеток детектировали с помощью МКА 5D4 (80%). Полученные МКА направлены к двум неперекрывающимся эпитопам на G-белке РСВ.
Заключение. Полученные МКА могут использоваться для обнаружения РСВ в клиническом материале методами ИФА и ИФл. Активность в РБН создает предпосылки для получения на основе МКА гуманизированных рекомбинантных антител и возможность их использования для терапии РСВ-инфекции.
Модель профилактической эффективности противогриппозной вакцины с поправкой на гипотезу антигенного расстояния
Аннотация
Цель исследования — найти количественную взаимосвязь антигенных расстояний (AD) с эффективностью вакцины (VE) и исследовать чувствительность VE к изменению AD.
Материал и методы. С помощью данных эпидемиологических наблюдений за тремя сезонами по гриппу в Канаде с интерпретацией в рамках гипотезы антигенного расстояния (ADH) обосновывается введение поправочного множителя в модель для оценки VE. Поправка учитывает наличие антигенной взаимосвязи между вакциной предыдущего сезона (V1), вакциной текущего сезона (V2) и циркулирующим эпидемическим штаммом (е).
Результаты. Найдена количественная взаимосвязь VE с AD, воспроизводящая результаты эпидемиологических наблюдений за двумя группами лиц: одна — только с текущей вакцинацией (0+V2), другая — с предшествующей и текущей (V1+V2) вакцинациями. Выявлено различие в чувствительности VE к разным показателям AD, позволяющее ограничиться ведущим показателем.
Заключение. Предложенная модель соотносит микробиологические показатели AD с эпидемиологической характеристикой VE. Модель расширяет анализ, позволяя использовать ее как средство оценки ожидаемых изменений VE в разных постановках эксперимента по проверке гипотезы ADH.
Состав микробиоты репродуктивного тракта женщин при бесплодии
Аннотация
Введение. В настоящее время вопрос об участии комменсальной, в том числе условно-патогенной, микрофлоры в развитии бесплодия остается дискутабельным. Для решения этого вопроса активно внедряются молекулярно-генетические методы исследования, которые превосходят рутинные методики культивирования по ряду позиций.
Цель исследования — оценить таксономическое разнообразие микроорганизмов в вагинальном биотопе при бесплодии.
Материал и методы. Для исследования использовали образцы вагинального содержимого, полученного из заднего свода влагалища 15 женщин, состоящих в бесплодном браке. Метагеномное исследование 16S рибосомной РНК образцов осуществлено на платформе Illumina MiSeq с использованием набора MiSeq Reagent Kits v3 (600-Cycle Kit) согласно рекомендациям производителя. Библиотеки для секвенирования участков V3-V4 гена 16S рибосомной РНК были приготовлены согласно 16S Metagenomic Sequencing Library Preparation Illumina. При биоинформационной оценке применяли программное обеспечение для метагеномного анализа — Kraken Metagenomics version 2.0.0 (классификатор ридов — коротких нуклеотидных последовательностей), используя стандартную базу данных.
Результаты. Показано, что встречаемость представителей семейства Lactobacillaceae в вагинальном биотопе варьирует от 12 до 84%. Ведущее положение среди представителей семейства занимал род Lactobacillus с доминированием L. jensenii, L. delbrueckii и L. amylolyticus. Во всех пробах обнаружены в большом количестве Moraxella spp., причем M. osloensis лидировали среди представителей всего сообщества. В половине случаев выявлено совместное присутствие M. osloensis и G. vaginalis.
Заключение. Установлено, что при бесплодии в вагинальной микробиоте существенно снижается количество представителей рода Lactobacillus, а также наблюдается смена лидирующего вида на L. jensenii, функциональная активность которых не обеспечивает в полной мере колонизационную резистентность вагинального биотопа, допуская избыточное размножение условно-патогенных микроорганизмов, в частности M. osloensis.
Современные эпидемиологические особенности вирусных гепатитов В и С, туберкулеза и ВИЧ-инфекции в психиатрических стационарах
Аннотация
Актуальность. Психиатрические стационары, где находятся пациенты с иммунодефицитными состояниями, часто не соблюдающие элементарных мер профилактики, а также получающие широкий спектр лечебных процедур, в том числе парентеральных, во всем мире являются учреждениями высокого риска распространения в них социально значимых инфекций.
Цель — изучить современные эпидемиологические особенности парентеральных гепатитов в крупном психиатрическом стационаре среди различных категорий душевнобольных (с туберкулезом легких и ВИЧ-инфекцией) и медицинского персонала.
Материал и методы. Определены серологические маркеры гепатита В (ГВ) и гепатита С (ГС) у 8352 больных и 542 сотрудников крупного психиатрического стационара с применением отечеств енных диагностических тест-систем.
Результаты. Маркеры ГВ и ГС среди больных выявлены у 7,3% лиц (ГС — 3,1%, ГВ — 2,8% и ГВ+ГС — 1,4%). Проведен анализ половых, возрастных и социальных характеристик пациентов с наличием маркеров вирусов ГВ и ГС. У ВИЧ-инфицированных пациентов значительно чаще были выявлены маркеры ГС (44,4% лиц); основные пути передачи ГВ и ГС — внутривенное употребление наркотиков и половой путь. Среди пациентов с туберкулезом легких обнаружено максимальное количество лиц с маркерами ГВ (44,3%) и ГВ+ГС (38,2%); основная клиническая форма туберкулеза легких представлена инфильтративной формой (60,4%); в 53,7% случаев выявлены бациллярные формы туберкулеза, представляющие серьезную эпидемиологическую опасность распространения туберкулеза в стационаре. Анализ социальной структуры показал, что ГВ+ГС+ВИЧ и туберкулез легких характерны для лиц с отягощенным социальным статусом. Наиболее частыми факторами инфицирования ГВ и ГС является длительная парентеральная нагрузка и внутривенное употребление наркотических веществ. Наибольший коэффициент парентеральной нагрузки отмечается у душевнобольных с ГВ+ГС и сопутствующим туберкулезом. Частота выявления маркеров ГВ и ГС среди медицинского персонала зависит от характера и стажа работы, частоты и степени контакта с кровью в процессе профессиональной деятельности.
Заключение. Установлен высокий уровень коморбидности психических расстройств и социально значимых инфекционных заболеваний (ВИЧ-инфекция, туберкулез, ГВ и ГС), что оказывает существ енное влияние на эпидемический процесс этих инфекций. Профилактические программы, создаваемые в стационарах и на обслуживаемых ими территориях, должны учитывать аспекты их коморбидности. Показана необходимость специфической и неспецифической профилактики вирусных гепатитов у пациентов и медицинского персонала психиатрических стационаров.
Этиологическая и эпидемиологическая характеристика летальности от острого вирусного гепатита в Кыргызстане в 2009–2018 гг.
Аннотация
Цель. Изучение этиологической структуры летальности от острого гепатита (ОГ) и сравнение ее с заболеваемостью и смертностью за 2009–2018 гг.
Материал и методы. Изучены государственные отчетные формы № 1 «Отчет об инфекционных, паразитарных и неинфекционных заболеваниях» за 2009–2018 гг.
Результаты. В Кыргызстане за 2009–2018 гг. выявлено 138 612 случаев вирусного ОГ, из них 109 больных имели летальный исход. В общей структуре последних доля больных с ОГ типа В (ОГВ, 36,7%) и типа А (ОГА, 35,7%) была примерно одинаковой. В каждом пятом случае был диагностирован неуточненный вирусный ОГ (22,9%). ОГ типа С (ОГС) был причиной гибели 4 (3%) больных, а HDV-инфекция — 1 пациента. Среди умерших не было случаев с гепатитом Е. Летальность от ОГВ зарегистрирована у 5 детей, а от ОГС — у 1 ребенка. В то же время 9 из 25 пациентов с неверифицированным вирусным ОГ были детьми. За 2009–2018 гг. заболеваемость ОГВ была ниже, чем ОГ в целом, в 31,3 раза (7,7 и 240,9⁰/0000 соответственно), смертность — в 2,7 раза (0,07 и 0,19⁰/0000 соответственно), а летальность — выше в 11,4 раза (89,8 и 7,9⁰/0000 соответственно). Средняя заболеваемость ОГВ детей была ниже, чем ОГ в целом, в 6,4 раза (1,2 и 7,7⁰/0000 соответственно), смертность — в 2,3 раза (0,03 и 0,07⁰/0000 соответственно), а летальность — выше в 1,8 раза (165,9 и 89,8⁰/0000 соответственно).
Заключение. Наличие заболеваемости и летальности взрослых и детей от острых гепатитов указывает на высокое бремя болезни для страны. Высокая доля ОГВ и ОГА в структуре смертности от ОГ требует улучшения качества иммунизации детей и расширения охвата взрослых вакцинацией против этих вирусных гепатитов. Рост летальности на фоне снижения заболеваемости ОГ в десятки раз указывает на то, что число умерших от данной патологии пациентов не уменьшается.
Пространственная визуализация данных по антибиотикорезистентности штаммов холерных вибрионов, изолированных на территории России
Аннотация
Цель. Разработка интегрированной онлайн, пополняемой и обновляемой географической информационной системы (ГИС) для систематизации и анализа сведений об антибиотикорезистентности V. cholerae El Tor.
Материал и методы. Методом серийных разведений в плотной питательной среде (МУК 4.2.2495-09) определяли чувствительность/устойчивость к 22 антибактериальным препаратам штаммов V. cholerae О1 El Tor, выделенных от людей и из водных объектов на территории России в 2005–2016 гг. Разработку интернет-версии ГИС проводили с использованием языков программирования HTML, JavaScript и PHP и картографических данных, полученных от корпорации «Ростелеком» и сообщества OpenStreetMap.
Результаты. Сравнительный анализ антибиотикорезистентности штаммов по субъектам РФ и по времени выделения показал увеличение в 2012–2016 гг. числа штаммов, устойчивых к стрептомицину, ампициллину, рифампицину, фуразолидону, появление в 2012–2016 гг. культур, резистентных к налидиксовой кислоте и цефтриаксону, снижение устойчивости к триметоприму/сульфаметоксазолу по сравнению с 2005–2009 гг. В Ставропольском крае выделенные V. cholerae О1 El Tor характеризовались резистентностью к фуразолидону (33,3%) и триметоприму/сульфаметоксазолу (100%), в Приморском крае — к ампициллину, стрептомицину, рифампицину (7%), фуразолидону (43%), триметоприму/сульфаметоксазолу (100%), в Иркутской области и Калмыкии — к ампициллину (8,3% и 11%), фуразолидону и триметоприму/сульфаметоксазолу (11% и 89%).
Заключение. Разработанная ГИС позволяет осуществлять сбор и анализ информации об антибиотикорезистентности V. cholerae О1 El Tor, проводить выборку штаммов по заданным свойствам.
О результатах мониторинговых исследований балластных вод и данных идентификации штаммов вибрионов, выделенных в ходе исследований судов в российских морских портах в 2018 году
Аннотация
Актуальность. В сентябре 2017 г. вступила в силу Международная конвенция о контроле судовых балластных вод и осадков и управлении ими (2004 г.), одной из участниц которой полноправно является Российская Федерация.
Цель работы — осветить результаты внедрения положений Конвенции в России в части отбора и анализа проб балластных вод на соответствие международному стандарту.
Материал и методы. Источниками данных служили сведения специалистов санитарно-карантинных отделов портов России о заходах судов загранплавания, а также результаты мониторинговых исследований балластных вод в морских портах некоторых субъектов Российской Федерации. В работе применены аналитический, бактериологический, молекулярно-биологический методы.
Результаты. Впервые на территории двух субъектов Российской Федерации (Ленинградской и Калининградской областей) в 2018 г. проведены исследования балластных вод, в Ростовской области исследования продолжаются с 2010 г. Проведенные лабораторные исследования балласта судов показали, что содержание E. coli, Enterococcus spp. находится в пределах нормы, V. сholeraе O1 и O139 в балласте отсутствовали. Из 21 пробы, исследованной специалистами лабораторий Ростовской области, в 12 пробах балластной воды находились V. сholeraе non-O1/non-O139, балласт был взят на судах, прибывших из Румынии и Турции.
Заключение. Проведенные молекулярно-генетические исследования не исключают вероятность заносов холерных вибрионов, в том числе с судовым балластом, что требует разработки управленческих решений по обеспечению биологической безопасности морских перевозок и снижению заболеваемости острыми кишечными инфекциями жителей приморских городов.
Влияние иммунизации кроликов дрожжевыми антигенами на активность фракции сывороточных антимикробных пептидов
Аннотация
Введение. Установлено, что иммунизация мышей дрожжевыми антигенами сопровождается повышением активности фракции антимикробных пептидов (АМП) по отношению к Candida albicans. Неизвестно, обладает ли эта фракция специфичностью по отношению к прочим видам дрожжей.
Цель работы — изучить влияние иммунизации кроликов разными видами дрожжей на общую антимикробную активность сыворотки и специфическую активность фракции ее АМП.
Материал и методы. Кроликов иммунизировали клетками дрожжей Candida albicans, Rhodotorula mu cilaginosa, Malassezia furfur, Cryptococcus neoformans, Geotrichum candi dum, Trichosporon cuta neum, Saccharomyces cerevisiae. Фракции АМП получали фильтрацией сывороток через фильтры с диаметром пор 100 кД. Общую активность сывороток и их АМП-фракций оценивали спектрофотометрически.
Результаты. Общая активность сывороток под действием иммунизации имела тенденцию к снижению независимо от вида дрожжей. Активность АМП-фракций под действием C. albicans, Cr. neoformans, G. candidum и S. cerevisiae возрастала, а под действием прочих — снижалась. Наиболее высокая чувствительность к АМП-фракции сывороток соответствовала C. albicans, особенно в отношении сыворотки кролика, иммунизированного этими же дрожжами, — в 1,5 раза выше контроля. Концентрация альбумина в сыворотках имела положительную корреляцию с общей активностью против C. albicans (r = 0,760), R. mucilaginosa (r = 0,728), M. furfur (r = 0,723) и T. cutaneum (r = 0,588).
Обсуждение. Результаты экспериментов не только согласуются с полученными ранее данными, но и расширяют представления о воздействии дрожжевых антигенов на активность сывороточных АМП против разных видов дрожжей.
Заключение. Альбумин сыворотки и сывороточные АМП обладают специфичностью в отношении разных микроорганизмов, причем наибольшую активность они проявляют в отношении тех видов, которые чаще выступают в роли условных патогенов.
ОБЗОРЫ
Гетероморфизм клеточной персистенции возбудителей сапронозов в различных условиях среды обитания
Аннотация
В работе обсуждаются вопросы морфофункциональной изменчивости возбудителей сапронозов в стрессовых условиях среды обитания. В текущем столетии сапронозные инфекции привлекают все большее внимание. При неблагоприятных условиях обитания их возбудители используют стратегию формирования покоящихся (устойчивых) состояний: жизнеспособных, но некультивируемых клеточных форм и персистентных бактерий, которые характеризуются сниженным метаболизмом, изменением морфологии и физиологии микроорганизмов, прекращением их репликации. С образованием устойчивых форм бактерий связывается возможность выживания возбудителей сапронозов в межэпидемический период, формирование их антибиотикорезистентности, что играет важную роль в хронизации инфекций. В литературе широко обсуждаются механизмы и условия формирования устойчивых состояний патогенных бактерий, их патогенетическое значение в инфекционной патологии, тогда как ультраструктурная организация и морфологическая вариабельность устойчивых клеточных форм, а также их дифференциация, обусловливающая гетерогенность популяции возбудителей, до настоящего времени освещены недостаточно. На основании анализа современных данных, а также имеющегося собственного опыта авторы оценивают морфофункциональные изменения устойчивых клеточных форм у бактерий и их значение в адаптационных стратегиях возбудителей сапронозов.
Иммунологические и эпидемиологические аспекты иммуногенности капсульного полисахарида Streptococcus pneumoniae серотипа 3 в составе пневмококковых вакцин
Аннотация
Включение в национальные программы иммунизации многих стран мира пневмококковых вакцин привело к снижению уровня заболеваний, вызываемых вакцинными серотипами пневмококка, однако не оказало влияния на частоту распространения Streptococcus pneumoniae серотипа 3, входящего в их состав. Результаты испытаний по оценке эпидемиологической эффективности и иммуногенности капсульного полисахарида (КП) S. pneumoniae серотипа 3 в составе конъюгированных и полисахаридных пневмококковых вакцин противоречивы. В одних исследованиях показана эффективность вакцинации, другие исследования свидетельствуют о недостаточной иммуногенности и профилактической эффективности КП S. pneumoniae серотипа 3. Проведенный авторами анализ результатов клинических исследований показал, что профилактическая эффективность КП S. pneumoniae серотипа 3 зависит от типа вакцины, нозологической формы заболевания, возраста, схемы иммунизации. В соответствии с данными литературы наиболее информативным показателем протективной активности КП S. pneumoniae в составе пневмококковых вакцин, в том числе серотипа 3, является опсонофагоцитоз. Рассмотрены экспериментальные данные, обосновывающие низкую иммуногенность КП серотипа 3, предположительно связанную с необычным путем синтеза его КП. Для повышения иммуногенности КП S. pneumoniae серотипа 3 перспективным является использование синтетических олигосахаридов строго определенного химического строения, соответствующих протективным фрагментам КП серотипа 3 и конъюгированных с белком-носителем для индукции Т-зависимого иммунного ответа и иммунологической памяти.
Современные представления о механизмах взаимодействия биопленки и факторов клеточного иммунитета
Аннотация
Особенности клеточного иммунного ответа при наличии микробной биопленки достаточно хорошо описаны в литературе. Благодаря многочисленным исследованиям удалось установить ряд закономерностей: зрелые биопленки лучше защищены от иммунных факторов, эффективность противобиопленочных стратегий зависит от видовой принадлежности микроорганизмов, образующих биопленку, и, соответственно, от состава биополимерного матрикса. Так, Pseudomonas aeruginosa может вырабатывать рамнолипиды, а также образовывать альгинат, что оказывает значительное негативное воздействие на функции иммунокомпетентных клеток. Многие из защитных реакций, выработанных иммунной системой и закрепившихся эволюционно, бактерии биопленок стали способны обращать в свою пользу, применяя их для роста и развития микробного консорциума.
ИСТОРИЯ НАУКИ
Теория сапронозных инфекций: история развития и пути совершенствования в системе медико-биологических наук
Аннотация
В обзоре анализируется история изучения болезней людей, вызываемых факультативными паразитами человека, животных и растений, в 1958 г. отнесенных микробиологом В.И. Терских к третьему классу инфекций — сапронозам. Этот термин и концепция экологии сапронозных возбудителей являются приоритетом российской медицины и были признаны мировой наукой. Эксперты Всемирной организации здравоохранения в 1969 г. приняли термин «сапронозные инфекции» как собирательное название упомянутых болезней. За прошедшее время в мировой и отечественной науке накопились факты и обобщения, позволяющие провести ревизию первоначальной концепции сапронозных инфекций биоты — от различных прокариот, растений и беспозвоночных до теплокровных животных и человека. Для решения дискуссионных вопросов теории сапронозов, эпидемиологической терминологии и систематики инфекционной патологии необходима интеграция знаний и комплексное участие специалистов медико-биологических наук в изучении этой проблемы. Результаты данного сотрудничества позволят уточнить и сформировать единую теоретическую концепцию популяционной патологии биоты на базе экологического подхода и общебиологических закономерностей существования жизни на планете.