ВЫЯВЛЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА НЕКУЛЬТИВИРУЕМЫХ ФОРМ ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ ERWINIA CAROTOVORA В ДЛИТЕЛЬНО ИНКУБИРУЕМЫХ КУЛЬТУРАХ

Цель . Определение общего числа и числа жизнеспособных клеток в длительно инкубируемых культурах E.carotovora методами конфокальной микроскопии и количественного ПЦРанализа. Материалы и методы. Бактерии E.carotovora atroseptica SCRI1043 выращивали в среде LB до плотности 2х10 9 КОЕ/мл. Клетки собирали центрифугированием и переносили в свежую среду LB, содержащую алкилоксибензол, или среду АВ, дефицитную по фосфору и углероду. Для определения количества жизнеспособных клеток использовали набор BacLight LIVE/DEAD в сочетании с конфокальной лазерной микроскопией, а также количественную ПЦР. Результаты . Общее число и число жизнеспособных клеток в культурах на среде АВ оставалось высоким (10 8 — 10 9 и 10 7 — 10 8 кл./мл соответственно) до 3 — 5 месяцев. Однако количество культивируемых клеток значительно снижалось во всех вариантах опыта. Жизнеспособных клеток в таких культурах оказывалось на несколько порядков больше, чем геномных копий, выявляемых в ПЦР. Эффективность амплификации ДНК повышалась после диализа и депротеинизации образцов. Заключение . Потеря культиви- руемости при высоком количестве жизнеспособных клеток свидетельствует о возможности перехода клеток E.carotovora в некультивируемое состояние в неблагоприятных условиях. Мы предполагаем, что при этом в клетках образуются низкомолекулярные компоненты и ДНКсвязанные белки, ингибирующие ПЦР.

некультивируемые клетки Erwinia carotovora, жизнеспособные клетки, ингибиторы ПЦР