ANALITIChESKIY OBZOR NIR, VYPOLNENNYKh K 31 DEKABRYa 2013 G. V RAMKAKh KOMPLEKSNOY PROBLEMY, KOORDINIRUEMOY NAUChNYM SOVETOM PO MIKROBIOLOGII 46.0

Abstract

Full Text

О проблеме «Медицинская микробиология и молекулярная биология микроорганизмов», 46.01, закончено 4 темы, но и по ряду незавершенных тем получены важные для науки и практики результаты. В рамках законченных тем получены следующие результаты. Впервые получены данные об особенностях структуры пяти генов (ptx A,D,C,D,E), кодирующих субъединицы А-В-комплексов коклюшного токсина штаммов Bordetella pertussis, циркулирующих в России. Впервые показана генетическая структура современной популяции возбудителей коклюша, доминирующее положение в которой занимают штаммы B.pertussis с новыми «невакцинными» ptxА1 и ptxС2 аллелями генов, кодирующих S1 и S3 субъединицы основного фактора патогенности возбудителя - коклюшного токсина. Выявленные особенности структуры генов, кодирующих А-В-комплексы коклюшного токсина, послужили основой для определения «мишеней» (нуклеотидных последовательностей) при разработке ускоренных методов молекулярно-генетического мониторинга возбудителя в системе эпидемиологического надзора за коклюшной инфекций. Наиболее тяжелые формы коклюша преимущественно вызывали штаммы определенных генотипов, определяемых в MLST (932 МАSТ1, 232 МАSТ1 и 319 МАSТ 2). На основании проведенной работы подготовлен проект федеральных методических рекомендаций «Коклюш»; депонированы в Гос.кол-лекцию 10 штаммов B.pertussis, которые могут быть использованы в качестве контрольных при проведении генотипирования и лабораторной диагностики (ФБУН МНИИЭМ им. Г.Н.Габричев-ского Роспотребнадзора). Показано, что штаммы Corynebacterium diphtheriae, выделенные в России в 2002 - 2012 гг., представляют собой один клональный комплекс, в котором зарегистрировано 6 сиквенс-типов -ST5, ST8, ST new 1, ST new 2, ST28 и ST41. Создан банк ДНК B.pertussis и C.diphtheriae, обладающих различной генетической структурой (сиквенс-типами). Разработаны и утверждены в 2013 г. новые методические указания «Лабораторная диагностика дифтерийной инфекции» (I, II, A,B,ФБУН МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского Роспотребнадзора). В результате выполнения микробиологической составляющей завершенной темы по изучению вирусных и вирусно-бактериальных пневмоний показано, что для лечения орнитозной и микоплаз-менной пневмонии препаратами первого ряда являются макролиды (II,B, ФБУН НИИ гриппа МЗ РФ). Закончена тема «Влияние магнитных полей аномальных характеристик на биологические свойства стафилококков и кишечных палочек» (I, B, ГБОУ ВПО Курский ГМУ МЗ РФ). Охарактеризован видовой состав и изучены особенности микросимбиоза и межмикробных взаимодействий в микрофлоре пародонтальных карманов при хронических формах пародонтита. Показано, что тяжелое и агрессивное течение хронического генерализованного пародонтита сопровождается возрастанием доли анаэробной флоры пародонтальных карманов и усилением активности факторов патогенности и персистенции. Установлен факт транслокации в кровь (в 21,4%) некоторых видов факультативно-анаэробных микроорганизмов, определяемых в составе микробных ассоциаций в пародонтальных карманах у больных тяжелой и агрессивной формой хронического пародонтита. Разработаны критерии прогноза перехода бактерий в кровь. Получен патент на изобретение № 2472858 «Способ прогнозирования транслокации бактерий в кровь при хроническом генерализованном пародонтите». Полученные результаты обосновывают необходимость бактериологического исследования содержимого пародонтальных карманов у пациентов с генерализованным хроническим пародонтитом и применения в комплексе лечебных мероприятий противомикробных препаратов системного действия наряду с уменьшением глубины пародонтальных карманов как источников колонизации и транслокации микрофлоры (II, B, ГБОУ ВПО ОрГМА МЗ РФ). При выполнении отдельных этапов незавершенных тем получены следующие важные результаты. Проведены исследования по обнаружению у клинических штаммов клебсиелл генов - ингибиторов лизоцима ivyC (inhibitor vertebre lysozyme type C), pliC (periplasmic lysozyme inhibitor type C) и генов генотоксинобразования clbB, N, A, Q, входящих в состав геномного острова патогенности Pks. Показано, что высокий уровень синтеза ингибиторов лизоцима клиническими штаммами клебсиелл связан с наличием одновременно двух генов: ivyC, локализованного на хромосоме, и pliC - плазмидного гена. Обнаруженная плазмида, несущая ген pliC, способна горизонтально передаваться от клетки к клетке и стабильно экспрессироваться в широком круге хозяев: Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Serratia marcescens, Hafnia alvei, Citrobacter freundii, Proteus mirabilis, Yersinia enterocolitica. По данным ПЦР 58,9 % клинических штаммов клебсиелл обладали генами ингибиторов лизоцима. Относительный риск развития бактерионосительства при наличии у штаммов клебсиелл гена ivyC составил 3,48. Гены токсинообразования clbBNAQ, входящие в состав острова патогенности Pks, выявлены только у 3 изолятов клебсиелл из 76. Отмечается важность определения генетических маркеров вирулентности условно патогенных энтеробактерий, ассоциированных с генами ингибиторов лизоцима и генотоксичности. Показана интеграция ДНК однонитевых бактериофагов семейства Microviridae (1phi7 и phiX174) в репликон плазмиды рКМ101 у E. coli, приводящая к лизогении бактерии-хозяина, горизонтальному и вертикальному переносу геномов профагов в клетки E. coli, Yersinia pseudotuberculosis, Salmonella typhimurium, благодаря свойству плазмиды передаваться широкому кругу хозяев. Установлена возможность переноса плазмиды pVM82 Ypseudotuberculosis, придающей штамму хозяина свойство повышенной вирулентности, передаваться при межродовых скрещиваниях с E. coli и одновременно мобилизовать перенос гена патогенности pSA иерсинии (II, A, B, ФГБУ НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи МЗ РФ). Проведен сравнительный молекулярно-генетический анализ MLVA (multiple locus variable number tandem repeats analysis) генотипов изолятов бруцелл патогенных видов, циркулирующих в России, с использованием международной базы данных MLVA-генотипов. Изоляты наиболее патогенного вида бруцелл B. melitensis, способные к длительному персистированию и размножению в организме хозяина, имели определенные MLVA-генотипы в сравнении с другими патогенными видами бруцелл. На основе MLVA изоляты разных видов бруцелл классифицировали в соответствии с их фенотипами по вирулентности и способности вызывать хроническое течение болезни. Изучение MLVA-генотипов у изолятов B. canis выявило наличие консервативных локусов ( BRU1322, BRU211, Bru73), характерных для этого вида. Показана потенциальная эпидемиологическая опасность изолятов вида B. canis для людей при контакте с больными животными. Молекулярно-генетическая характеристика изолятов бруцелл необходима для совершенствования системы эпидемиологического надзора за бруцеллезной инфекцией. MLVA-типирование изолятов бруцелл до штаммового уровня позволяет установить источник инфекции, изучать пути передачи и резервуары распространения конкретных изолятов бруцелл и дифференцировать вакцинные штаммы от полевых вирулентных изолятов. На основе данных об особенностях организации геномов разных видов бруцелл (MLVA-генотипов) выбраны видовые и биоварные дифференцирующие генетические мишени для генотипирования в ПЦР. Применение метода ПЦР-РВ позволяет проводить молекулярную диагностику острой и хронической форм бруцеллеза у людей и оценивать активность инфекционного процесса, от которого зависит выбор терапии (II, B, ФГБУ НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи МЗ РФ). Разработан метод и тест-система ПЦР-РВ, позволяющие выявлять единичные копии ДНК возбудителя коклюша, которые могут быть использованы для диагностики типичных и атипичных форм коклюша, а также выявления здоровых бактерионосителей. Установлены корреляции между количеством, вирулентностью популяции бактерий возбудителя коклюша и тяжестью заболевания. Показано, что практически здоровые люди, контактировавшие с больными коклюшем, могут быть носителями бактерий, популяция которых представлена главным образом авирулентными Bvg-мутантами, возникшими в результате инсерции мобильного IS-элемента. Полученные результаты могут быть применены при диагностике типичных и атипичных форм коклюша, выявлении бактерионосителей в очагах инфекции, при анализе эффективности применения противококлюшных вакцин (II, А, B, ФГБУ НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи МЗ РФ). С целью разработки кандидатной генетической бустерной вакцины, несущей антигены Chlamydia trachomatis, для профилактики урогенитального хламидиоза созданы аденовирусные конструкции, несущие протективные антигены - хламидийные белки OmcB и CT_0037. Разработана уникальная модель урогенитального хламидиоза с использованием C. trachomatis на мышах линии DBA/2. В отличие от ранее описанных моделей регистрируется длительно выраженная восходящая инфекция и наблюдается развитие патологии репродуктивных органов. Детально изучены особенности протекания хронической инфекции при заражении мышей Chlamydia muridarum, что позволит в дальнейшем исследовать действие разрабатываемых вакцинных препаратов на развитие хронической хламидийной инфекции (I, II, А, B, ФГБУ НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи МЗ РФ). Показано, что частота выявления резистентного к макролидам Helicibacter pylori при первичном диагнозе хеликобактериоза в Н. Новгороде составляет только 6,4±2,3%. При рецидивах хеликобак-терной инфекции это показатель равен 27,3+7,7%, что обосновывает необходимость тестирования выделенных штаммов на чувствительность к антибиотикам. Установлено, что при H.pylori-ассоциированных заболеваниях у 53,8% пациентов наблюдается синдром избыточного бактериального роста в тонкой кишке (II, B, ФБУН Нижегородский НИИЭМ им. И.Н.Блохиной Роспотребнадзора). Разработана методика восстановления лиофильно высушенных культур факультативных анаэробных и анаэробных микроорганизмов длительного срока хранения для последующего использования их в целях идентификации методом масс-спектрометрии. Применение сочетания этих методов и секвенирования генома позволило установить точное таксономическое положение ряда хранящихся штаммов и подтвердить или опровергнуть заявленный депозитором вид (II, B, ФБУН Нижегородский НИИЭМ им. И.Н.Блохиной Роспотребнадзора). Получены новые данные об особенностях генома лактобацилл, пополнена международная база данных нуклеотидных последовательностей лактобацилл за счет 12 единиц российских изолятов, депонированных в GenBank/EMBL/DDBJ (I, A, B, ФБУН Нижегородский НИИЭМ им. И.Н.Блохиной Роспотребнадзора). Подготовлены методические рекомендации «ПЦР-диагностика микоплазмозов у детей», применяющаяся для выявления этиологических агентов патогенных и условно патогенных представителей родов Mycoplasma и Ureaplasma, ассоциированных с различными заболеваниями человека, и для мониторинга их распространения среди населения (II, B, ФБУН Нижегородский НИИЭМ им. И.Н. Блохиной Роспотребнадзора). В Реестре программ для ЭВМ зарегистрирована «Автоматическая система классификации состояний микрофлоры желудочно-кишечного тракта (I, B, ФБУН Нижегородский НИИЭМ им. И.Н.Блохиной Роспотребнадзора). При исследовании влияния пектиновых полисахаридов на факторы вирулентности патогенных бактерий установлено, что некоторые полисахариды приводят к задержке продукции феназиново-го пигмента пиоцианина Pseudomonas aeruginosa. Полученные данные могут быть использованы для разработки новых противоинфекционных препаратов (I, B, ИКВС УрО РАН; ИФ Коми НЦ УрО РАН). На основании гомологии видовых вариантов гена фруктозо-6-фосфокетолазы пяти основных видов спроектированы праймеры ПЦР тест-системы для видового скрининга доминантных бактерий кишечной микробиоты человека (I, B, ИКВС УрО РАН). У бактерий рода Enterococcus обнаружена способность к модификации гемоглобина. Штаммы E.faecalis, продуцирующие желатиназу, обладают более выраженной антигемоглобиновой активностью (I, A, ИКВС УрО РАН). Установлено, что цитокиновый профиль вагинальной жидкости характеризует микроэкологиче-ские нарушения репродуктивного тракта женщин, сочетающиеся со снижением колонизационной резистентности, и отражает эффективность проводимой пробиотикотерапии. При эффективной пробиотикотерапии вагинального дисбиоза препаратами лактобацилл наблюдается снижение уровня провоспалительных цитокинов IL-1 и INFy на фоне повышения противовоспалительного цито-кина TGF-P1 (I, B, ИКВС УрО РАН). Впервые показано, что ритмометрические критерии, отражающие хроноинфраструктуру свойств микроорганизмов в бактерийно-грибковых ассоциациях, пригодны для оценки феномена микробного распознавания «свой-чужой» в условиях микросимбиоза (I, A, ИКВС УрО РАН). Экспериментально in vitro показано, что условно патогенные бактерии усиливают персистентный потенциал грибов Candida albicans, которые, в свою очередь, оказывают синергидный эффект на антилизоцимную активность бактерийных ассоциантов в условиях дисбиоза (I, B, ИКВС УрО РАН). Впервые в России проведено многоцентровое исследование распространенности и этиологии инвазивных кандидозов и чувствительности штаммов Candida spp. к антифунгальным препаратам in vitro у тяжело больных пациентов отделений реанимации и интенсивной терапии в пяти регионах страны. С помощью ДНК-секвенирования и MALDI-TOF масс-спектрометрии установлено, что в структуре инвазивного кандидоза доминирующими возбудителями являются: C.albicans (52,3%), C.parapsylosis (16,4%), C.glabrata (13,5%) и C.tropicalis(10,4%). Выявлены штаммы со сниженной чувствительностью к флюконазолу: 7,6% устойчивых (в т.ч. 2,8% из числа C.albicans) и 14,5%, обладающих умеренной чувствительностью (II, B, ГБОУ ВПО С.-З ГМУ им. И.И.Мечникова, НИИ мед.микологии им. П.Н.Кашкина МЗ РФ). Показана возможность применения прямого протеомного профилирования с помощью MALDI-TOF масс-спектрометрии для внутривидового типирования возбудителей микозов. С использованием разных программных инструментов анализа протеомных профилей была создана видовая протеомная классификация для видов Aspergillus fumigatus и A.niger (I, B, (II, B, ГБОУ ВПО С.-З ГМУ им. И.И.Мечникова; НИИ мед. микологии им. П.Н.Кашкина МЗ РФ). Впервые в России создана модель инвазивного аспергиллеза легких на мышах линии BALB/c. Развитие инвазивного аспергиллеза легких подтверждено культуральными, гистологическими и серологическими исследованиями (I, A, ГБОУ ВПО С.-З ГМУ им. И.И.Мечникова; НИИ мед. микологии им. П.Н.Кашкина МЗ РФ). Разработана модифицированная методика получения биопленок cтрептококка группы А in vitro. Показано, что разные М- и Т-типы стрептококка группы А образуют биопленки, отличающиеся по величине (II, B, ФГБУ НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи Мз РФ). С помощью виртуального скрининга отбирали потенциальные ингибиторы лектина LecA - ад-гезина Pseudomonas aeruginosa, ответственного за пленкообразование. Показано, что ингибирующим действием на адгезин и образование биопленок обладают природные полисахариды галактан и галактоманнан. Иммуноглобулины к рекомбинантному белку LecA также подавляют биопленко-образоваание у клинических изолятов. Путем виртуального скрининга отобраны, а затем синтезированы и протестированы возможные ингибиторы протеазы CPAF (важного фактора патогенности хламидий) и ингибиторы секреции III типа хламидий. Полученные результаты могут быть использованы для создания инновационных терапевтических препаратов при хламидийной и синегнойной инфекциях (I, B, ФГБУ НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи МЗ РФ). Разработана и внедрена в практику методика обследования пациентов на основе бактериологического анализа бронхиального лаважа и определения антигена легионелл в моче иммунохромато-графическим методом для диагностики легионеллеза. Диагноз легионеллезной инфекции подтвержден в 10,5% случаев у пациентов Гематологического центра. С помощью этого методического подхода впервые в России достоверно подтверждена значимая роль легионелл в этиологии тяжелых пневмоний у гематологических больных. Показано, что одним из источников заражения больных легионеллезами может быть система водоснабжении в стационаре. Культура Legionella pneumophila выделена в более чем 60% проб воды, взятых в отделениях Центра и подсобных помещениях. Идентичность штаммов легионелл, выделенных из системы водоснабжения ЛПУ и альвеолярной жидкости пациентов, позволила рассматривать систему горячего водоснабжения в качестве источника распространения нозокомиальной легионеллезной инфекции (II, B, ФГБУ НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи МЗ РФ). Собрана коллекция клинических изолятов рода Staphylocoссus, выделенных от пациентов с гнойными осложнениями после костно-восстановительных оперативных вмешательств. К виду S. aureus относились 78,9% изолятов. Метициллинорезистентные S.aureus (MRSA) составили 25,4%. Установлено значительное генетическое разнообразие исследованных штаммов S.aureus. По результатам изучения в ПЦР-ПДРФ коагулазного гена они разделены более чем на 30 групп, а Spa-типирование позволило выявить изоляты, относящиеся к двум доминирующим в РФ эпидемическим штаммам MRSA: spa-типов t-008 и t-030. Среди MRSA выявлены изоляты с новыми spa-типами (II, B, ФГБУ НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи МЗ РФ). В геноме коагулазонегативных стафилокков (CoNS) идентифицированы новые типы геномных островов SCCmec, детерминирующих устойчивость к бета-лактамным антибиотикам. Получены результаты, свидетельствующие о высокой степени мобильности и способности к межвидовой передаче одного из типов SCCmec (комплекс mec класс B, два комплекса рекомбиназ: ccr1 и ссг2). Установлено, что структурные особенности генетической области Лв составе SCCmec позволяют использовать ее в качестве маркера при типировании CoNS. Результаты секвенирования исследованных образцов занесены в генный банк (II, A, B, ФГБУ НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи МЗ РФ). Получена карта рестрикции генома отечественного вакцинного субштамма BCG-Russia-368. С помощью программного обеспечения Argus Optical Mapping System проведено сравнение карты рестрикции субштамма BCG Russia-368 с картами, полученными in silico, субштаммов Tokyo, Mexico, Pasteur, Korea. Установлено, что карта рестрикции субштамма BCG-Russia-368 имеет максимальное сходство с картой субштамма Tokyo. Большая степень сходства отечественного вакцинного штамма BCG и субштамма BCG-Tokyo подтверждает иммунологические данные о более высокой эффективности вакцин, приготовленных из «ранних» производственных субштаммов (Russia, Tokyo), нежели из более поздних субштаммов (например, Pasteur) (II, B, ФГБУ НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи МЗ РФ; OpGen Incorporated, США). Секвенированы, аннотированы и проанализированы геномы двух клинических штаммов бурк-хольдерий (B.cenocepacia и B.contaminans). Анализ секвенированных геномов клинических штаммов P.aeruginosa позволил выявить пути эволюции этих штаммов в сторону увеличения их патогенности в стационаре (II, B, ФГБУ НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи МЗ РФ). Завершен этап по доклиническим испытаниям субъединичной рекомбинантной туберкулезной вакцины для ревакцинации БЦЖ-вакцинированных взрослых. Составлена и передана в МЗ РФ документация для получения разрешения на проведение клинических исследований и этической экспертизы (I, B, ФГБУ НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи МЗ РФ; ФГБУ ЦНИИ туберкулеза РАМН; ФБУН ГНЦ ПМБ Роспотребнадзора). Обнаружены и детально охарактеризованы новые токсины Bacillus sphaericus, B.botulinum, Legionella pneumophila, Clostridium difficile. Для их изучения использовалась разработанная ранее (2011, 2012гг.) оригинальная эукариотическая тест-система - линия дрожжей Saccharomyces serevisiae. На этой модели выявлен и охарактеризован механизм действия данных токсинов и установлены их клеточные мишени (I, A, ФГБУ НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи МЗ РФ). Разработны высокочувствительные ПЦР тест-системы в реальном времени, пригодные для выявления хламидий C.trachomatis и Chlamydia pneumoniae в крови инфицированных лиц (II, B, ФГБУ НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи МЗ РФ). По проблеме «Теоретическая и прикладная инфекционная иммунология», 46.02, законченных тем нет, но по некоторым переходящим темам получены значимые для науки и практики конкретные результаты. Введение лабораторным животным лиганда TLR5 (флагеллина) в комплексе с лигандом NOD1 (производным диаминопимелиновой кислоты) значимо активирует фактор транскрипции NF-kB в стенке тонкого кишечника; при этом регистрируется существенное повышение продукции в кишечнике провоспалительных цитокинов ИЛ-5, ИЛ-6, ИЛ-13, ИЛ-21, ИЛ-22, ФНО-а; животные демонстрируют более высокую выживаемость в условиях инфицирования Salmonella enterica серовара typhimurium (I, В, ФГБУ НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи МЗ РФ). Введение лабораторным животным полипренилфосфатов (ППФ) повышает содержание муль-типотентных стромальных клеток в костном мозге и селезенке. Применение у животных ППФ в комплексе с ацикловиром значительно ослабляет обострение рецидивирующего генитального герпеса (I, В, ФГБУ НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи МЗ РФ). Металлокомплексы антител, образованные с катионами меди и цинка, ослабляют индукцию выработки факторов роста ГМ-КСФ, Г-КСФ и VEGF, вызываемую нативными антителами (I, А, В, ФГБУ НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи МЗ РФ). По проблеме «Природноочаговые инфекции человека», 46.03, законченных тем нет, но по некоторым незавершенным темам получены заслуживающие внимания результаты. Проведено полногеномное секвенирование выделенного из внешней среды штамма лептоспир (Bairam-Ali), отнесенного ранее по фенотипическим признакам к свободноживущим непатогенным лептоспирам. При анализе генов 16S рДНК и rpoB получены данные, указывающие на принадлежность этого штамма к самостоятельному геномному виду. Установлено, что геном изученного штамма имеет характеристики, свойственные как патогенным, так и свободноживущим лептоспи-рам, а также обладает широким набором генов антибиотикорезистентности (I, A, B, ФГБУ НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи МЗ РФ). Проведен анализ причин возникновения крупной трансмиссивной эпидемической вспышки туляремии в г. Ханты-Мансийск, охватившей более 1000 человек, включая 150 детей; выявлены недостатки современной системы противоэпидемических мероприятий и даны рекомендации по ее усовершенствованию. Впервые проведено сравнительное исследование эффективности серологических и молекулярно-генетических методов лабораторной диагностики туляремии; показано, что наиболее раннюю диагностику обеспечивает использование ПЦР в реальном времени. Анализ показал, что значительное снижение объема и качества эпизоотологических исследований и мониторинга территорий активных природных очагов туляремии не позволило своевременно прогнозировать осложнение эпидемической ситуации и предотвратить развитие эпидемической вспышки. Основным средством остановки распространения эпидемии стала массовая вакцинация населения. За период август-сентябрь 2013 года в городе были вакцинированы 15 846 человек, что вместе с другими противоэпидемическими мероприятиями позволило прекратить заболевания людей. Сделаны выводы, что для предотвращения эпидемических вспышек туляремии необходимо: внедрить в практику здравоохранения современные методы молекулярно-генетического анализа для индикации возбудителя и ранней диагностики туляремии; разработать и испытать субъединичные безопасные вакцины на основе рекомбинантных антигенов Francisella tularensis, необходимые для экстренной профилактики туляремии при чрезвычайных ситуациях (II, B, ФГБУ НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи МЗ РФ). Впервые показано, что возбудитель листериоза человека и животных Listeria monocytogenes способен размножаться на тканях растений, формируя биопленки на их поверхности, а также инфицировать клетки растений и вызывать цитотоксический эффект, связанный с листериолизином О. Эти данные позволяют предполагать, что в значительной части «пищевых» случаев листериоза лежит способность возбудителя паразитировать в растениях (I, A, B, ФГБУ НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи МЗ РФ). Впервые в России проведено молекулярно-генетическое типирование Toxoplasma gondii из ау-топтатов головного мозга и спинно-мозговой жидкости пациентов со СПИД, а также секвениро-вание фрагментов генов, результаты которого показали их идентичность с референс-штаммам T. gondii генотипа II (II, B, ФГБУ НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи МЗ РФ). Отработана (на модели риккетсий Провачека) методика метки видоспецифических антигенных комплексов риккетсий нанокристаллами (II, B, ФГБУ НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи МЗ РФ). Впервые в Тюменской области у иксодовых клещей обнаружены ДНК возбудителей моноцитар-ного эрлихиоза и некоторых бактериальных инфекций, передающихся иксодовыми клещами (II, B, ФБУН Тюменский НИИКИП Роспотребнадзора). По проблеме «Разработка и стандартизация медицинских биологических препаратов для профилактики и диагностики инфекционных болезней», 46.04, законченных тем нет, но при выполнении незавершенных тем НИР получены существенные для науки и практики результаты. Разработан способ прогнозирования иммуногенной активности коклюшного компонента комплексных вакцин, подготовлена и отправлена в ФИПС заявка на предполагаемое изобретение (I, В, НЦ ЭСМП МЗ РФ). Разработан способ получения стандартного образца мутности бактериальных взвесей, подготовлена и отправлена в ФИПС заявка на предполагаемое изобретение (I, В, НЦ ЭСМП МЗ РФ). Разработан способ оценки контаминации вакцины БЦЖ вирулентными штаммами микобактерий туберкулеза, позволяющий значительно повысить специфическую безопасность вакцины (I, В, НЦ ЭСМП МЗ РФ). Разработан способ определения мертиолята в несорбированных иммунобиологических препаратах с использованием атомно-абсорбционной спектроскопии (холодного пара) (I, B, НЦ ЭСМП МЗ РФ). Разработан способ определения антикомплементарной активности сыворотки (I, B, НЦ ЭСМП МЗ РФ). Разработан способ оценки показателя «Подлинность и серологическая специфичность» отечественной менингококковой полисахаридной вакцины серогруппы А с помощью ИФА, позволяющий достоверно определять качество препарата по данному показателю (I, B, НЦ ЭСМП МЗ РФ). Разработаны отраслевые стандартные образцы (ОСО) активности интерферона человеческого лейкоцитарного альфа типа и ОСО активности интерферона человеческого рекомбинантного альфа-2b типа и проведена их аттестация. Внедрение аттестованных ОСО позволит проводить оценку качества 5 препаратов интерферона природного происхождения и более 30 препаратов интерферона рекомбинантного происхождения по показателю «Специфическая активность», повысить в целом качество экспертной работы в рамках процедуры регистрации иммунобиологических лекарственных средств (I, B, НЦ ЭСМП МЗ РФ). Экспериментально обоснован выбор кандидата в ОСО иммуноглобулина человека, показатель содержания анти-А антиэритоцитарных и анти-В антиреретроцитатарных антител (антитела к аг-глютиногенам А и В эритроцитов) и разработан проект методики его аттестации (I, B, НЦ ЭСМП МЗ РФ). Показана необходимость введения в спецификации всех препаратов иммуноглобулина человека для внутривенного введения показателя «Анти-D антитела» (антитела к резус-антигену типа D) и разработки ОСО для проведения испытаний по этому показателю для повышения безопасности иммуноглобулинотерапии. Экспериментально обоснован выбор кандидата в ОСО иммуноглобулина человека содержания анти-D антител и разработан проект методики его аттестации (I, B, НЦ ЭСМП МЗ РФ). Выявлены особенности в структуре нуклеотидных последовательностей генов гемагглютинина и нейраминидазы вируса гриппа, которые позволяют перейти к обоснованию первичной структуры праймеров для амплификации копий генов, кодирующих HA и NA антигенно актуальных штаммов вирусов гриппа (I, B, НЦ ЭСМП МЗ РФ). Подобраны кандидатные нуклеотидные последовательности для синтеза праймеров с целью последующей экспериментальной оценки их эффективности при применении методов генодиагностики в определении антигенного соответствия вакцинных штаммов и полуфабрикатов гриппозных вакцин антигенно актуальным штаммам, рекомендованным ВОЗ (I, B, НЦ ЭСМП МЗ РФ).