FORMATION OF ENTEROBACTER CLOACAE RESISTANCE TO DISINFECTANTS UNDER THE EFFECT OF BACTERICIDAL CONCENTRATIONS OF QUATERNARY AMMONIUM COMPOUNDS IN THE EXPERIMENT

Full Text

В последние десятилетия увеличилось количество сообщений о выявлении возбудителей гнойно-септических инфекций (ГСИ), устойчивых к дезинфицирующим средствам (ДС) [2 - 4, 9]. Отмечается, что рост резистентности микроорганизмов происходит за счет селекции устойчивых вариантов под действием низких концентраций ДС [7, 8, 10]. Известен эксперимент, согласно которому музейная тест-культура Escherichia coli 1257, стандартно применяемая в испытательных лабораториях для оценки действия ДС, стала резистентной к ДС на основе четвертично-аммониевых соединений (ЧАС) через 6 воздействий заниженной концентрации препарата, к хлорсодержащему дезинфектанту - через 40 воздействий [6]. Вместе с тем, нам не удалось найти экспериментальных работ, в которых бы подтверждалось или исключалось формирование устойчивости к ДС возбудителей ГСИ на фоне воздействия препаратов в бактерицидной концентрации. Цель работы - изучить возможность формирования индуцированной резистентности возбудителей ГСИ к ДС в бактерицидной концентрации. Оценку чувствительности микроорганизмов к ДС оценивали в соответствии с [1, 5]. Штамм микроорганизмов считали чувствительным к ДС при отсутствии роста микроорганизмов или при росте на питательной среде до 300 КОЕ/мл: полная чувствительность - при отсутствии роста, неполная чувствительность - при наличии роста (100 - 299 КОЕ/мл - дезинфектант оказывает суббактерицидное действие, от 1 до 99 КОЕ/мл - неполное бактерицидное действие). Штамм считали устойчивым к ДС в изучаемом режиме при росте 300 КОЕ/мл и более. Опыты ставили в трех повторах. Использовали штамм Enterobacter cloacae, выделенный в перинатальном центре от новорожденного с признаками ГСИ и имеющий неполную чувствительность к препаратам ЧАС на тест-объектах из дерева и пластика. В качестве ДС использовали препараты на основе ЧАС и альдегида (препарат М); ЧАС и амина (препарат А); ЧАС, амина и гуанидина (препарат Ф) и только ЧАС (препарат Б) в антибактериальных концентрациях, предусмотренных инструкциями (0,01 - 0,1%) при соответствующей экспозиции обработки (60 мин). Предварительно оценивали чувствительность к ДС музейных тест-культур (E. coli 1257 и S. aureus 906), стандартно применяемых для определения бактерицидного действия дезинфектантов. В ходе эксперимента на тест-объектах из дерева и пластика проводили ежедневное воздействие препаратами на штаммы E. cloacae, имеющие неполную чувствительность к тем же дезинфектантам на тех же тест-объектах. Иными словами, ежедневно осуществляли воздействие дезинфектантами на те штаммы, которые сохранили жизнеспособность после предыдущего воздействия. Воздействие осуществляли до выработки устойчивости бактерий к ДС, т. е. до момента перехода от неполной чувствительности к устойчивости. Через сутки, 2 недели и месяц после получения устойчивых культур проводили их контрольное исследование. Оценку достоверности различий показателей определяли с помощью t-критерия Стьюдента. Оценка влияния на E. cloacae препарата М показала, что на тест-объекте из дерева уже после 2 воздействия по сравнению с фоном отмечено достоверное увеличение количества выросших колоний - с 2,7±0,8 до 24,7+5,8 КОЕ (р<0,05). После 3 и 4 воздействий количество бактерий (6,7+1,6 и 10,0+3,2) также статистически значимо превышало фоновый показатель, но бактерицидное действие оставалось неполным. После 5 воздействия ДС на питательной среде выросло >300 КОЕ, т. е. E. cloacae приобрел устойчивость. Контрольные исследования через сутки, 2 недели и месяц выявили >300 КОЕ, что подтвердило результат. На пластике уже после 2 воздействия возбудитель приобрел устойчивость - количество колоний составило >300. При контрольных исследованиях также обнаружено >300 КОЕ. Таким образом, E. cloacae, обладающий неполной чувствительностью к рабочему раствору препарата М, приобрел устойчивость к дезинфектанту на тест-объекте из дерева после 5 воздействия, на тест-объекте из пластика - после 2 воздействия. Изучение действия на E. cloacae препарата А выявило, что на тест-объекте из дерева уже после 2 воздействия по сравнению с фоном отмечено достоверное увеличение количества выросших колоний бактерий - с 19,0+2,3 до 45,3+8,3 КОЕ (р<0,05). После 3 - 9 воздействий количество бактерий (39,7+2,6 - 110,0+14,2) продолжало статистически значимо превышать количество колоний фона при неполном бактерицидном действии. Сходные результаты были получены и на пластике. После 2 воздействия произошло увеличение количества колоний с 10,0+1,9 (фон) до 56,3+6,1 (р<0,05). После 3 - 9 воздействий количество бактерий (42,3+6,2 - 91,7+18,3) сохранялось повышенным, но бактерицидное действие препарата оставалось неполным. После 10 воздействия ДС на дереве и пластике выросло соответственно >300 КОЕ. Контрольные исследования выявили >300 КОЕ. Таким образом, E. cloacae с неполной чувствительностью к препарату А приобрел устойчивость к дезинфектанту на тест-объектах из дерева и пластика после 10 воздействия. Оценка действия на E. cloacae препарата Ф позволила установить, что на дереве количество колоний по сравнению с фоном возросло после 4 воздействия с 7,3+2,2 до 180,0+14,2 (р<0,05) и в дальнейшем после 5 - 9 воздействий держалось примерно на таком же уровне (96,0+12,2 - 172,0+6,5). После 10 воздействия и контрольных исследований количество микроорганизмов составило >300 КОЕ. На пластике по 97 7. ЖМЭИ 5 № 33 сравнению с фоном (149,7+16,3) после 2 - 8 воздействий отмечено статистически значимое снижение количества микроорганизмов до 10,0+4,8 - 77,3+12,9. Однако после 9 воздействия количество КОЕ возросло до 135,0+10,7, т. е. до исходного уровня. После 10 воздействия и контрольных исследований количество колоний оказалось >300. Таким образом, E. cloacae с неполной чувствительностью к препарату Ф оказался устойчивым к дезинфектанту на тест-объектах из дерева и пластика после 10 воздействия. Оценка влияния на E. cloacae препарата Б показала, что на дереве в течение девяти воздействий количество бактерий колебалось от 1,0+1,1 - 8,0+2,6 до 23,3+5,4 - 58,3+12,5, оказываясь то ниже, то выше фонового показателя (39,3+5,9). После 10 и 11 воздействий количество микроорганизмов возросло до 216,7+28,6 и 258,3+11,4 соответственно. После 12 и контрольных исследований количество колоний составило > 300. Таким образом, E. cloacae с неполной чувствительностью к препарату Б приобрел устойчивость к дезинфектанту на тест-объекте из дерева после 12 воздействия. Полученные данные свидетельствуют, что устойчивость возбудителей ГСИ к дезинфектантам может происходить не только под воздействием низких концентраций препаратов, но и при использовании средств дезинфекции в бактерицидной концентрации.

About the authors

V. I Sergevnin

Perm State Medical Academy, Russia

T. V Klyukina

Perm Region Hospital for War Veterans, Russia

E. O Volkova

Perm Region Hospital for War Veterans, Russia

N. I Reshetnikova

Perm Region Hospital for War Veterans, Russia

L. G Kudryavtseva

Administration of the Federal Service of Surveillance for Protection of Consumers Rights and Human Welfare of Perm Region, Russia

References

Supplementary files