Том 98, № 6 (2021)

Введение. Лактоферрин (ЛФ) представляет собой катионный мономерный гликопротеин, вырабатываемый ацинарными клетками и железами. ЛФ присутствует в разных местах слизистой оболочки в различной концентрации. В связи с разработкой различных вариантов гигиенических и лекарственных средств для лечения воспалительных заболеваний полости рта на основе ЛФ возникла необходимость объективной оценки его антибактериальных и антибиоплёночных свойств с последующим анализом сохранения активности при различных вариантах выделения данного белка из субстрата и хранения.
Цель исследования - повышение эффективности оценки антибактериальной активности ЛФ и продолжительности её сохранения в различных биологических субстратах, содержащих действующее вещество, и отдельных опытных партиях изготовленного препарата с помощью автоматического культивирования. Материалы и методы. В рамках эксперимента использовалась техника микробиологической диагностики с использованием системы автоматического культивирования микробных популяций. Заранее подготовленную бактериальную взвесь инокулировали в питательный бульон и добавляли исследуемые образцы ЛФ с последующим культивированием и анализом возможного антибактериального воздействия трансферринового белка. Для определения чувствительности выделенных штаммов применяли собственную модификацию метода серийных разведений, разработанную на кафедре микробиологии, вирусологии, иммунологии МГМСУ им. А.И. Евдокимова. В работе была использована инфраструктура Уникальной научной установки «Трансгенбанк». Результаты интерпретировали по изменению оптической плотности на длине волны λ = 850 нм. Изучение динамики роста микроорганизмов проводили в нескольких параллелях. Рост бактерий приводил к изменению параметров оптической плотности, на основании которых были построены кривые роста.
Результаты и обсуждение. По результатам экспериментального исследования кривых роста бактериальных популяций отмечены статистически достоверные различия количества жизнеспособных клеток в разные фазы кривых роста при использовании различных образцов ЛФ. Установлена более высокая активность образцов человеческого рекомбинантного ЛФ. При анализе динамики роста выявлены различия в наступлении максимума размножения и его ингибирования при воздействии различных отягощающих факторов в процессе культивирования. Бактериостатическое действие ЛФ реализуется посредством связывания ионов железа, лишая бактерии этого микроэлемента, вызывает ингибирование их развития. Наряду с этим ЛФ проявляет активность против некоторых факторов вирулентности микроорганизмов, расщепляя их по типу сериновых протеаз, и таким образом препятствует их проникновению в клетки человека.
Заключение. Использованная методика автоматического культивирования микроорганизмов в биореакторе позволяет получить воспроизводимые результаты, доступна для широкого использования и может быть рекомендована для получения объективных, сравнимых между собой, достоверных сведений о противомикробных свойствах различных образцов бактерицидного белка ЛФ, выпускаемых отечественной фарминдустрией. Исследуемый субстрат, содержащий рекомбинантный человеческий ЛФ российского производства, характеризуется высокой антибактериальной активностью, сохраняющейся, как минимум, в течение 3 лет.

Введение. Ежегодно в мире регистрируют порядка 1 млн случаев инфекций, вызванных Acinetobacter spp., что составляет 1,8% всех случаев внутрибольничных инфекций. Клинически значимым представителем рода Acinetobacter является Acinetobacter baumannii, о чем свидетельствуют результаты многолетних исследований, проведённых в нашей стране и за рубежом. Внутривидовое типирование микроорганизмов является неотъемлемой частью работы клинического микробиолога при расшифровке вспышек гнойно-септических инфекций в рамках эпидемиологического надзора за инфекциями, связанными с оказанием медицинской помощи. Большинство практикующих микробиологических лабораторий не имеют возможности использовать генотипические методы типирования в силу высоких финансовых затрат.
Цель - разработка диагностической панели для внутривидовой идентификации A. baumannii сиквенс-типов ST 1167, ST 944, ST 208 на основе фенотипических свойств.
Материалы и методы. Изучены внутривидовые признаки 74 штаммов A. baumannii из 4 многопрофильных медицинских организаций крупного промышленного центра с использованием генетических (мультилокусное сиквенс-типирование) и комплекса фенотипических методов (биохимические тесты, биоплёнкообразующая способность, зоны задержки роста вокруг дисков с антибактериальными препаратами, чувствительность к анилиновым красителям, дезинфицирующим средствам и ацинетобактерному бактериофагу). Результаты. Определены фенотипические характеристики 3 ведущих сиквенс-типов A. baumannii (ST 1167, 944, 208). Обсуждение. Сформирован эффективный и экономичный набор дифференцирующих тестов, позволяющих выявить внутривидовые особенности полирезистентных штаммов A. baumannii актуальных сиквенс-типов.
Заключение. Диагностическая панель позволит проводить внутривидовую дифференциацию трёх широко представленных сиквенс-типов A. baumannii в рамках микробиологического мониторинга инфекций, связанных с оказанием медицинской помощи.

Введение. В связи с возрастающим участием женщин в космических полётах встают вопросы о влиянии факторов полёта на состояние женского организма и, в частности, на стабильность, видовые и количественные изменения микрофлоры влагалища. Для изучения влияния отдельных факторов космического полёта на организм наиболее удобными являются модельные эксперименты, в частности, «сухая» иммерсия.
Целью данной работы является сравнительная оценка состояния микробиоты влагалища у 6 женщин-испытателей до и после 3-суточного пребывания в «сухой» иммерсии.
Материалы и методы. Всем испытателям выполнена микроскопия вагинального отделяемого, окрашенного по Граму, и культуральное исследование в соответствии с медицинской технологией «Интегральная оценка состояния микробиоты влагалища. Диагностика оппортунистических вагинитов». Видовую идентификацию микроорганизмов проводили методом MALDI-TOF-MS-анализа.
Для количественной оценки изменения состояния влагалищной микрофлоры и микрофлоры цервикального канала использовали эубиотический индекс, отражающий отношение числа положительных состояний микробиоты (до эксперимента — по отношению к норме, после эксперимента — по отношению к состоянию до эксперимента) к числу отрицательных.
Результаты. После 3-суточной «сухой» иммерсии у испытателей, которые до изоляции имели высокий титр аэробных микроорганизмов, количество аэробной микрофлоры существенно увеличилось, при этом количество протективных видов снижалось. У испытателей, которые до изоляции имели низкий титр аэробных микроорганизмов, количество аэробной микрофлоры уменьшилось, а количество лактобацилл повысилось, что говорит об активации колонизационной резистентности микрофлоры влагалища. У испытателей, у которых до изоляции обнаруживалась существенная обсеменённость анаэробной условно-патогенной микрофлорой, количество всех анаэробов, включая лактобациллы, снижалось. Эубиотический индекс, рассчитанный для цервикального канала, после 3-суточной иммерсии снизился. Полученные данные свидетельствуют о том, что после 3-суточной изоляции наблюдалось ухудшение состояния микрофлоры.

Введение. Инфекции мочевыводящих путей (ИМП), вызванные уропатогенными Escherichia coli (UPEC), ежегодно поражают 150 млн человек.
Цель: характеристика внегоспитальных штаммов UPEC, выделенных от пациентов с ИМП в Ярославле в 2016–2017 гг.
Материалы и методы. Чувствительность штаммов UPEC (n = 20) к антимикробным препаратам определяли методом серийных разведений; гены антибиотикорезистентности и вирулентности, филогруппы, О-серогруппы и сиквенс-типы идентифицировали методом ПЦР и полногеномного секвенирования. Вирулентность штаммов изучали на модели личинок Galleria mellonella.
Результаты. Штаммы UPEC отнесены к категориям лекарственно-резистентных (n = 11) и множественно лекарственно-резистентных (n = 9) патогенов. Выявлены гены β-лактамаз bla_TEM (n = 10), bla_CTX-M (n = 6), интегроны класса 1 (n = 8) и генные кассеты dfrA17-aadA5 (n = 2), dfrA1 (n = 1) и aacA4-cmlA1 (n = 1). Идентифицированы гены вирулентности UPEC: адгезинов fimH, papG, sfaS, focG, afa/draBC, csgA, сидерофоров iroN, fyuA, iutA, факторов противодействия иммунитету макроорганизма ompT и traT, токсинов hlyA, cnf1, usp, транспортёра капсулы kpsMTII, колицина cvaC, островов патогенности I₅₃₆, II₅₃₆, III₅₃₆, IV₅₃₆, IIJ₉₆ и II_CFT073. Определены высоковирулентные и слабовирулентные для личинок G. mellonella штаммы UPEC с LD₅₀ 10⁴–10⁵ и 10⁶–10⁷ КО соответственно. Идентифицированы филогруппы A, B1, B2, E и F, серогруппы О2, О4, О6, O9, O11, О15, О18, О25, О75 и O89, известные сиквенс-типы ST14, ST58, ST69, ST73, ST93, ST127, ST131, ST141, ST165, ST297, ST457, ST537, ST744, ST1434 и впервые найденные в данном исследовании ST9239 и ST10102.
Заключение. Выявленное генетическое разнообразие внегоспитальных штаммов UPEC согласуется с мировой тенденцией распространения патогенов человека, обладающих одновременно высокой вирулентностью и множественной лекарственной устойчивостью. Это позволяет проспективно охарактеризовать текущую эпидемиологическую ситуацию, дать прогноз её развития, а также определить оптимальные направления терапии.

Введение. Чувствительность Mycobacterium tuberculosis к противотуберкулёзным препаратам устанавливается с помощью фенотипических и молекулярных методов. Анализ целого генома штаммов M. tuberculosis даёт возможность предсказывать резистентность к лекарствам для большого числа медикаментов. Для этого разработано несколько видов программного обеспечения.
Цель работы - определить чувствительность M. tuberculosis к антитуберкулёзным препаратам с помощью фенотипического и генотипического анализа, а также полногеномного секвенирования с использованием программного обеспечения «Mykrobe».
Материалы и методы. Исследовали 34 мультирезистентных штамма M. tuberculosis, выделенных из клинических материалов 34 пациентов в Болгарии. Все они были подтверждены фенотипически с помощью «BACTEC MGIT 960 System». Для определения резистентности к противотуберкулёзным средствам первого и второго ряда пользовались тестами для линейной гибридизации «Geno Type MTBDR plus v.1.0» и «Geno Type MTBDR sl v.1.0». Штаммы M. tuberculosis секвенировали с помощью «MiSeq». Для электронной резистограммы применяли программное обеспечение «Mykrobe v.0.8.1».
Результаты. Все три метода — фенотипический анализ, генетический анализ и электронная резистограмма с помощью программного обеспечения «Mykrobe» — дали сопоставимые результаты чувствительности/резистентности исследуемых штаммов. Все фенотипически доказанные штаммы, резистентные к рифампицину и изониазиду, были подтверждены на 100% с помощью программного обеспечения «Mykrobe». Мутация С-15Т является маркером для резистентности к изониазиду у исследуемых нами штаммов со сполиготипом SIT41. Мы наблюдали 75% (21/28) совпадения результатов по «BACTEC» и «Mykrobe» в отношении резистентности к этамбутолу. Фенотипически 87% (n = 27) штаммов были устойчивы к стрептомицину, и лишь 59% (n = 19) доказаны программным обеспечением «Mykrobe» как таковые. Сравнивая фенотипическую и генотипическую резистентность к офлоксацину, амикацину и канамицину, мы наблюдали совпадение результатов на 100%.
Выводы. Секвенирование целого генома относительно дорого и трудоёмко, но представляет собой ценный инструмент эпидемиологического генотипирования и определения восприимчивости к лекарственным средствам.

Нетифоидные штаммы Salmonella enterica представляют большую опасность для здоровья человека. Проблема сальмонеллёзов осложняется прогрессирующим распространением нечувствительности к антибиотикам среди клинических и сельскохозяйственных штаммов S. enterica. Настоящий обзор литературы обобщает современные сведения о механизмах устойчивости S. enterica к антибиотикам и иллюстрирует многообразие и сложность молекулярных систем, обеспечивающих антибиотикорезистентность (АР) у S. enterica. Описан спектр природной резистентности и тщательно охарактеризованы адаптивные (приобретённые) механизмы устойчивости к представителям основных классов антибиотиков, включая β-лактамы, фторхинолоны, аминогликозиды, тетрациклины, нитрофураны, сульфонамиды, фосфомицин, хлорамфеникол (левомицетин) и полимиксины (колистин). Перечислены генетические детерминанты резистентности, передающиеся горизонтальным путём. В обзоре проанализированы только те варианты молекулярных механизмов АР, клиническая значимость которых была доказана комплексом корректных генетических (секвенирование) и биохимических (подтверждение спектра гидролизируемых β-лактамов) исследований. Описаны общие характеристики устойчивости к антибиотикам у нетифоидных сальмонелл. У многих штаммов S. enterica наблюдаются сочетание различных механизмов АР и множественная резистентность. Поднят вопрос о неоднородности распространения резистентности среди различных групп/серотипов внутри вида S. enterica. В частности, некоторые клональные комплексы с признаками резистентности оказываются более успешными патогенами человека и животных. Сальмонеллы, как и большинство других бактерий, демонстрируют неканонический вид устойчивости к антибиотикам — биоплёночную резистентность, которая реализуется за счёт нескольких механизмов, главными из которых являются фильтрующая/сорбционная способность биоплёночного матрикса и трансформация биоплёночных клеток в дормантные и персистирующие формы.
Несмотря на то что функциональная значимость молекулярных ансамблей, определяющих устойчивость к антибиотикам, однотипна для всех энтеробактерий, конкретизация механизмов резистентности у сальмонелл является необходимым звеном для разработки молекулярно-диагностических систем оценки чувствительности сальмонелл к антимикробным препаратам.