DESIGN OF HEPATITIS E VIRUS GENOTYPE 1 RECOMBINANT ORF3 PROTEIN BY CODON OPTIMIZATION METHOD

G. I. Alatortseva; Алаторцева Г. И.; A. V. Sidorov; Сидоров А. В.; L. N. Nesterenko; Нестеренко Л. Н.; L. N. Luhverchik; Лухверчик Л. Н.; M. V. Zhukina; Жукина М. В.; I. I. Amiantova; Амыантова И. И.; A. V. Milovanova; Мылованова А. В.; D. S. Vorobev; Воробьев Д. С.; Yu. I. Ammur; Аммур Ю. И.; M. I. Mikhailov; Михайлов М. И.; K. K. Kyuregyan; Кюрегян К. К.; V. S. Kichatova; Кичатова B. С.; I. A. Potemkin; Потемкин И. А.; O. V. Isaeva; Исаева О. В.; E. Yu. Malinnikova; Малинникова Е. Ю.; A. A. Karlsen; Карлсен А. А.; V. M. Blinov; Блинов В. М.; Z. Sh. Nurmatov; Нурматов З. Ш.; A. Z. Nurmatov; Нурматов А. З.; O. T. Kasymov; Касымов О. Т.; S. V. Zhavoronok; Жаворонок С. В.; V. V. Zverev; Зверев В. В.

doi:10.36233/0372-9311-2017-6-63-72

ПОЛУЧЕНИЕ РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЛКА ORF3 ВИРУСА ГЕПАТИТА Е 1 ГЕНОТИПА С ПРИМЕНЕНИЕМ МЕТОДА ОПТИМИЗАЦИИ КОДОНОВ

Авторы: Алаторцева Г.И.¹, Сидоров А.В.¹, Нестеренко Л.Н.¹, Лухверчик Л.Н.¹, Жукина М.В.¹, Амыантова И.И.¹, Мылованова А.В.¹, Воробьев Д.С.¹, Аммур Ю.И.¹, Михайлов М.И.², Кюрегян К.К.², Кичатова B.С.², Потемкин И.А.², Исаева О.В.², Малинникова Е.Ю.², Карлсен А.А.², Блинов В.М.¹, Нурматов З.Ш.³, Нурматов А.З.³, Касымов О.Т.³, Жаворонок С.В.⁴, Зверев В.В.¹
Учреждения:
1. НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова
2. НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова, Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования
3. НПО «Профилактическая медицина», Бишкек
4. Белорусский государственный медицинский университет
Выпуск: Том 94, № 6 (2017)
Страницы: 63-72
Раздел: Статьи
Дата подачи: 10.04.2019
Дата публикации: 28.12.2017
URL: https://microbiol.crie.ru/jour/article/view/232
DOI: https://doi.org/10.36233/0372-9311-2017-6-63-72
ID: 232

Цитировать

Полный текст

Аннотация
Об авторах
Список литературы
Дополнительные файлы
Статистика

Аннотация

Цель. Получение рекомбинантного аналога полноразмерного белка ORF3 вируса гепатита Е (ВГЕ) 1 генотипа. Материалы и методы. Штаммы Escherichia coli, плазмидные векторы, серологический и клинический материал, иммуноферментные тест-системы. Молекулярно-биологические, биоинформационные, биотехнологические, биохимические и серологические методы. Результаты. Из препарата РНК ВГЕ 1 генотипа, выделенного от больного из Киргизии, получена рекомбинантная плазмида, содержащая ДНК копию субгеномной вирусной РНК. С использованием данной плазмиды получены штаммы E.coli - продуценты рекомбинантного антигена ORF3 ВГЕ 1 генотипа в виде слитного с Р-галактозидазой E.coli полипептида, содержащего полноразмерную копию белка ORF3. Для повышения уровня экспрессии рекомбинантного белка проведена оптимизация кодонов клонированного фрагмента кДНК. Рекомбинантный белок ORF3 выделен из телец-включений биомассы штамма-продуцента и очищен методом эксклюзионной хроматографии. Антигенная специфичность полученного полипептида подтверждена методами иммуноферментного анализа и вестерн-блоттинга со специфическими сыворотками. Заключение. Разработан рекомбинантный антиген ORF3 ВГЕ 1 генотипа и экспериментально показана возможность его применения в диагностических тестах.

Ключевые слова

вирус гепатита Е, ВГЕ 1 генотипа, ген orf3, рекомбинантный антиген ORF3, ИФА, вестерн-блоттинг

Список литературы

Алаторцев В.Е., Алаторцева Г.И. Патент РФ, 1992, № 2071501 на изобретение «Вектор pEL5a, предназначенный для экспрессии чужеродной ДНК».
Алаторцев В.Е., Алаторцева Г.И. Патент РФ, 1992, № 2043409 на изобретение «Штамм бактерий Escherichia coli, используемый для получения рекомбинантных белков».
Алаторцева Г.И. Получение рекомбинантных белков, содержащих антигенные детерминанты вируса гепатита Е, и создание на их основе диагностических тест-систем: Автореф. дисс. канд. биол. наук. М., 2000.
Алаторцева Г.И., Сидоров А.В., Нестеренко J1.H. и др. Получение рекомбинантного аналога гликопротеина е вируса Varicella zoster: клонирование, экспрессия и исследование антигенных свойств. Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2016, 15, 1 (86): 77-85.
Гловер Д. Новое в клонировании ДНК. Методы. М., 1989.
Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование. М., Мир, 1984.
Солонин С.А., Мальцева Н.С., Троценко О.Е. и др. Циркуляция вируса гепатита Е на территории Хабаровского края. Дальневосточный журнал инфекционной патологии. 2010, 16:31-36.
Claudia P., Ravasi М.Е. et al. Expression of codon optimized genes in microbial systems: current industrial applications and perspectives. Front. Microbiol. 2014, 5: 2-8.
Graff J., Torian U. et al. Abicistronic subgenomic mRNA encodes both the ORF2 and ORF3 proteins of hepatitis E virus. J. Virol. 2006, 80: 5919-5926.
Hyams C., Mabayoje D.A., Copping R. et al. Serological cross reactivity to CMV and EBV causes problems in the diagnosis of acute hepatitis E virus infection. J. Med. Virol. 2014, 86 (3): 478-483.
Khudyakov Y.E., Khudyakova N.S., Fields H.A. et al. Epitope mapping in proteins of hepatitis E virus. Virology. 1993, 194 (1): 89-96.
Khudyakov Y.E., Khudyakova N.S., Jue D.L. et al. Comparative characterization of antigenic epitopes in the immunodominant region of the protein encoded by open reading frame 3 in burmese and mexican strains of hepatitis E virus. J. Gen. Virol. 1994, 75 (3): 641-646.
Koonin E.V., Gorbalenya A.E., Purdy M.A. et al. Computer-assisted assignment of functional domains in the nonstructural polyprotein of hepatitis E virus: delineation of an additional group of positive-strand RNA plant and animal viruses. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1992, 89 (17): 8259-8263.
Kumar S., Tamura K., Nei M. MEG A3: Integrated software for molecular evolutionary genetics analysis and sequence alignment. Briefings Bioinformatics. 2004, 5: 150-163.
Kyte J., Doolittle R.F. A simple method for displaying the hydropathic character of a protein. J. Mol. Biol. 1983, 157 (1): 105-132.
Ma H., SongX., Li Z. et al. Varying abilities of recombinant polypeptides from different regions of hepatitis E virus ORF2 and ORF3 to detect anti-HEV immunoglobulin M. J. Med. Virol. 2009,81 (6): 1052-1061.
Nair V.P., Anang S., Subramani C. et al. Endoplastic reticulum stress induced synthesis of a novel viral factor mediates efficient replication of genotype-1 hepatitis E. PLoS Pathol. 2016, 12 (4): el005521.
Obriadina A., Meng J.H., Ulanova T. et al. A new enzyme immunoassay for the detection of antibody to hepatitis E virus. J. Gastroenterol Hepatol. 2002, Suppl 3: 360-364.
Resenchuk S.М., Blinov V.M. Alignment service: creation and processing of alignments of sequences of unlimited length. Comput. Appl. Biosci. (CABIOS). 1995, 11 (1): 7-11.
Towbin H., Staehlin Т., Gordon Y. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1979, 76 (9): 4350-4359.
Yarbough P.O., Tam A.W., Fry K.E. et al. Hepatitis E virus: identification of type-common epitopes. J. Virol. 1991, 65 (11): 5790-5797.
Yonglin Yang, Shaoli Lin, Yuchen Nan et al. A linear surface epitope in a proline-rich region of ORF3 product of genotype 1 hepatitis E virus. Viruses. 2016, Aug 18;8 (8): pii: E227.
Zhou Y., Zhao C., Tian Y. et al. Characteristics and functions of HEVproteins. Adv. Exp. Med. Biol. 2016,948: 17-38.

Дополнительные файлы

Доп. файлы

Действие

1. JATS XML

Скачать

Имя пользователя
Пароль
Запомнить меня

Забыли пароль?	Регистрация

Имя пользователя
Пароль
Запомнить меня

Забыли пароль?	Регистрация

ПОЛУЧЕНИЕ РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЛКА ORF3 ВИРУСА ГЕПАТИТА Е 1 ГЕНОТИПА С ПРИМЕНЕНИЕМ МЕТОДА ОПТИМИЗАЦИИ КОДОНОВ

Полный текст

Аннотация

Ключевые слова

Об авторах

Г. И. Алаторцева

А. В. Сидоров

Л. Н. Нестеренко

Л. Н. Лухверчик

М. В. Жукина

И. И. Амыантова

А. В. Мылованова

Д. С. Воробьев

Ю. И. Аммур

М. И. Михайлов

К. К. Кюрегян

B. С. Кичатова

И. А. Потемкин

О. В. Исаева

Е. Ю. Малинникова

А. А. Карлсен

В. М. Блинов

З. Ш. Нурматов

А. З. Нурматов

О. Т. Касымов

С. В. Жаворонок

В. В. Зверев

Список литературы

Дополнительные файлы

Данный сайт использует cookie-файлы