SPECIES STRUCTURE AND STAPHYLOCOCCI BIOPROFILE CHARACTERISTICS - CAUSATIVE AGENTS OF PERINATAL INFECTIOUS-INFLAMMATION PATHOLOGY IN CHILDREN OF ORENBURG

Full Text

Перинатальная инфекционно-воспалительная патология (ИВП) - группа заболеваний инфекционного генеза, которые развиваются у детей в течение первых 72 часов после рождения и этиологическими агентами которых выступают неспецифические потенциально патогенные бактерии [11, 12, 15 - 17, 19]. Развитие данной патологии связано с внутриутробным инфицированием плода, а ее приоритетными возбудителями являются грампозитивные кокки, в частности, стафилококки, доля которых в структуре патогенов при локализованных формах перинатальной ИВП (везикулопустулез, конъюнктивит и др.) достигает 75 - 82% [1, 3, 4, 13]. Однако видовой спектр и комплекс биологических, в том числе вирулентных и персистентных, свойств (биопрофиль) стафилококков, выделенных у новорожденных с этой патологией, охарактеризованы не достаточно полно. Решение этого вопроса важно не только для понимания этиологических и патогенетических особенностей развития перинатальной ИВП, но и для разработки рациональных подходов к терапии и профилактике указанных заболеваний. Целью данной работы явился анализ таксономической структуры и биопрофиля стафилококков - возбудителей кожных и глазных форм перинатальной ИВП у новорожденных Оренбурга. В муниципальном клиническом перинатальном центре (г. Оренбург) под нашим наблюдением находились 354 новорожденных с клиническими признаками кожных и глазных форм перинатальной ИВП. Бактериологические исследования у детей с указанной патологией осуществляли на 1 - 3 сутки после рождения путем посева материала из очагов воспаления на питательные среды (кровяной агар, желточносолевой агар, среда Эндо, среда Сабуро) с выделением чистых культур микроорганизмов и видовой (родовой) их идентификацией общепринятыми методами с использованием известных тест-систем [14, 18]. У выделенных культур стафилококков определяли наличие гемолитической [14] и антилизоцимной активности [2], способность к образованию биопленок [21], устойчивость к антимикробным катионным пептидам лейкоцитов (интерцид) [5] и тромбоцитов (тромбодефенсины) человека [7]. Кроме того, дискодиффузионным методом у них оценивали чувствительность к антибиотикам [10]. Полученные данные обработаны методами вариационной статистики [9]. Среди 354 новорожденных с зарегистрированными клиническими признаками перинатальной ИВП у 314 (88,7%) детей имелись симптомы воспалительной патологии кожи или глаз, в том числе у 250 (70,6+2,4%) - диагностированы гнойновоспалительные заболевания кожи, у 64 (18,1+2,0%) - выявлена глазная патология. Среди кожных форм врожденной ИВП лидировали везикулопустулез и пузырчатка (55,4+2,6 и 14,1+1,9% соответственно от всех выявленных случаев перинатальной ИВП), тогда как глазные формы воспалительной патологии были представлены преимущественно конъюнктивитом (16,4+2,0%). Данные бактериологического исследования 211 новорожденных с кожными (n=171) и глазными (n=40) формами перинатальной ИВП свидетельствовали, что общее количество положительных результатов посевов материала из очагов воспаления составило 77,7+2,9%. При этом у новорожденных с кожными поражениями бактерии выделяли чаще, чем у детей с заболеваниями глаз (83,0+2,9 против 55,0+8,0%, p<0,05). От больных детей с кожными и глазными формами врожденной ИВП изолированы и идентифицированы до вида (рода) 164 штамма микроорганизмов, из них 125 (76,2%) культур были представлены стафилококками. Другие микроорганизмы изолировали значительно реже. Так, в структуре выделенной микрофлоры доля грамо-трицательных бактерий, включая энтеробактерии, составила 11,0+2,4%, удельный вес грамположительных палочек (в частности коринебактерий и лактобацилл) - 6,7+2,0%, а энтрококков и грибов Candida - 4,9+1,7 и 1,2+0,9% соответственно. В видовом спектре выделенной стафилококковой флоры доминировали коагула-зоотрицательные стафилококки (КОС), доля которых варьировала в диапазоне 76,5 - 83,3% (в среднем - 82,4+3,4%) с лидерством Staphylococcus epidermidis, S. haemolyticus и S. xylosus (29,6+4,1; 25,6+3,9 и 16,0+3,3% соответственно). Удельный вес представителей других видов КОС (S. warneri, S. hominis, S. saprophyticus и S. сapitis) был значительно меньше: 0,8-4,8%. Среди стафилококков, изолированных от новорожденных с кожными и глазными формами перинатальной ИВП, доля штаммов S. aureus не превышала 16,7 - 23,5% и в среднем составила 17,6+3,4%. Учитывая, что приоритетными возбудителями кожных и глазных форм перинатальной ИВП являлись стафилококки, у 78 выделенных культур этих микроорганизмов (КОС - n=56; S. aureus - n=22) определен комплекс биологических свойств (биопрофиль), включающий их вирулентные и персистентные характеристики, а также антибиотикорезистентность. Анализ особенностей биопрофиля стафилококков показал, что КОС достоверно не отличались от золотистых стафилококков по наличию гемолитической активности (82,1+5,2 против 83,3+7,8%, p>0,05), но значительно чаще проявляли антилизоцим-ную активность (75,0+5,8 против 33,3+9,8%, p<0,05). Кроме того, не отмечено существенных различий между изученными изолятами КОС и S. aureus по индексу их устойчивости к бактерицидному действию антимикробных катионных пептидов лейкоцитов (интерцид) и тромбоцитов (тромбодефенсины) человека (92,9+3,8 против 95,5+8,3% и 40,4+5,2 против 54,5+6,7%, p>0,05). Способностью образовывать биопленки обладали 82,1+5,2% штаммов КОС и 91,7+6,8% изолятов S. aureus (p>0,05), но выраженность этого свойства у золотистых стафилококков в 2,2 раза превышала таковую у КОС (2,06+0,34 против 0,92+0,08 ус.ед.; p<0,05). Поскольку при врожденных ИВП показана антимикробная терапия [8, 12, 13, 16], большое значение имеет информация об устойчивости возбудителей к антибиотикам. В этой связи у 78 штаммов стафилококков как приоритетных возбудителей кожных и глазных форм перинатальной ИВП определена чувствительность к антибиотикам с разным механизмом действия. Результаты проведенного тестирования свидетельствовали о том, что среди выделенных культур стафилококков почти половина (56,9+6,1%) проявляла резистентность к пенициллину, одна треть (31,6+10,7%) - к ампициллину и лишь каждый десятый штамм (9,1+4,8%) - к оксациллину. В то же время, стафилококки относительно редко (4,8 - 14,3%) обнаруживали устойчивость к цефалоспоринам 1 - 3 поколений (цефазолин, цефуроксим, цефотаксим), рифампицину и тетрациклину, хотя доля штаммов стафилококков, резистентных к линкозаминам (линкомицин) и макролидам (эритромицин), была довольно велика (34,7+6,9 и 39,1+7,3% соответственно). Необходимо отметить наличие в группе возбудителей кожных и глазных форм ИВП у новорожденных определенной части стафилококков, устойчивой к име-пенему и ципрофлоксацину (16,7+15,2 и 18,6+5,1% соответственно), то есть к антибиотикам, которые практически не используются в неонатологической практике, но нередко применяются для лечения инфекционно-воспалительной патологии у взрослого населения. С другой стороны, несмотря на широкое клиническое употребление гентамицина, резистентность к нему среди стафилококков - возбудителей кожных форм перинатальной ИВП у новорожденных - была на низком уровне (4,6+2,6%). Кроме того, при этой патологии редко выделяли стафилококки, устойчивые к норф-локсацину (2,3+2,2%). Следует заметить, что частота встречаемости полиантибиоти-корезистентных штаммов стафилококков (то есть устойчивых к 3 и более антибиотикам из разных групп) не превышала 10%. Анализируя представленный материал в общем контексте проблемы перинатальной ИВП, необходимо подчеркнуть несколько ключевых моментов. Хотя перинатальная ИВП принадлежит к относительно часто встречающимся заболеваниям новорожденных (10 - 180 случаев на 1000 живорожденных детей) и занимает 1 - 3 место среди причин младенческой смертности [6, 11, 15, 17, 20], большинство регистрируемых нозологических форм данной патологии у детей Оренбурга относится к локализованным воспалительным процессам с поражением кожи и глаз. При этом в таксономическом спектре возбудителей этой патологии приоритетное место занимают стафилококки и, прежде всего, КОС. Однако имеющиеся сообщения об эволюции видовой структуры возбудителей ИВП у новорожденных с тенденцией к увеличению этиологической роли энтеробактерий, неклостридиальных анаэробов и др. [1, 12, 13] определяют необходимость проведения в родовспомогательных учреждениях систематического микробиологического мониторинга с применением современных методов детекции таксономической принадлежности патогенов. Участие стафилококков и других представителей потенциально патогенных микроорганизмов в развитии перинатальной ИВП обусловлено особенностями этиопато-генеза данных заболеваний. Возникновение данной патологии этиологически связано с наличием в материнском организме потенциальных возбудителей, а патогенетически - с внутриутробным инфицированием плода, главным образом, за счет гематогенной транслокации патогенов от матери к плоду (то есть трансплацентарно), что фактически свидетельствует об эндогенном характере врожденных инфекционно-воспалительных заболеваний [4, 6, 19]. В этой связи, кардинальных успехов по снижению распространенности перинатальной ИВП, очевидно, можно добиться лишь путем своевременного выявления и эффективной ликвидации у женщин репродуктивного возраста (прежде всего, в период гестации) очагов хронической инфекции и бессимптомного носительства (персистенции) потенциально патогенных микроорганизмов, что, безусловно, является трудной задачей, стоящей перед акушерами-гинекологами. Нельзя исключить, что часть (17,0 - 45,0%) случаев кожных и глазных форм врожденной ИВП, когда бактериологические посевы материала оказались стерильными, этиологически связана с микроорганизмами, для выявления которых требуется применение не рутинных, а специальных микробиологических технологий (ПЦР, анаэробное или микроаэрофильное культивирование и др.), не использованных в настоящей работе и пока, к сожалению, не нашедших широкого внедрения в клинической практике. Анализ биопрофиля стафилококков, выделенных от новорожденных с кожными и глазными формами перинатальной ИВП, показал, что данные микроорганизмы вне зависимости от их таксономической принадлежности (S. aureus или КОС) характеризуются выраженным патогенным потенциалом, который определяется наличием у них комплекса вирулентных и персистентных свойств, включая гемолитическую, лизоцимную (чаще у S. aureus) и антилизоцимную (чаще у КОС) активность, способность к образованию биопленок и устойчивость к катионным антимикробным белкам (пептидам) лейкоцитов и тромбоцитов. Экспрессия стафилококками указанных патогенных признаков, обеспечивая их выживание при контакте с эффекторами иммунитета на этапе транслокации от матери к плоду, очевидно, способствует развитию инфекционно-воспалительного процесса у ребенка, иногда еще в утробе матери. В этой связи, патогенный биопрофиль стафилококков может использоваться в качестве критерия для поиска и идентификации у беременных потенциальных возбудителей перинатальной ИВП с целью их последующей направленной (селективной) элиминации. С другой стороны, настораживает факт значительного распространения среди возбудителей ведущих форм перинатальной ИВП у детей Оренбурга антибиотикорезистентных культур стафилококков, проявляющих, в частности, устойчивость к пе-нициллинам, традиционно широко используемым в неонатологической практике [1, 13]. Эти обстоятельства требуют проведения микробиологического мониторинга для оперативного внесения изменений в региональный регистр антибиотикорезистент-ности приоритетных возбудителей перинатальной ИВП у детей Оренбурга [4, 6].

About the authors

V. A Gritsenko

Research Institute of Cellular and Intracellular Symbiosis, Orenburg, Russia

T. V Biryukova

Orenburg State Medical Academy, Russia

A. A Vyalkova

Orenburg State Medical Academy, Russia

Yu. B Ivanov

Research Institute of Cellular and Intracellular Symbiosis, Orenburg, Russia

References

Supplementary files