Том 95, № 5 (2018)

Цель. Изучить субпопуляционный состав клеток крови экспериментальных животных, привитых клеточным стенкам (КС) Francisella tularensis разных подвидов. Материалы и методы. 210 сертифицированных (НПО «Вектор», Новосибирск) беспородных мышей иммунизировали препаратами КС F. tularensis разных подвидов в дозе 95 мкг по белку. Животных выводили из эксперимента на 3, 7, 10, 14 и 21 сутки наблюдения и определяли фенотип (CD45, CD3, CD4, CD8, CD19, CD69) клеток крови. Результаты. Динамика клеточного баланса лейкоцитов крови у экспериментальных животных зависела от подвидовой принадлежности штамма туляремийного микроба, из которого был выделен препарат. Все исследуемые препараты способствуют развитию клеточного и гуморального иммунитета, что проявляется в увеличении содержания моноцитов и В-лимфоцитов, а также экспрессии маркера активации CD69. КС F. tularensis subsp. mediasiatica А-61 способствуют активации клеточного звена иммунитета экспериментальных животных в большей степени, чем другие препараты. Возможно, что именно этот фактор обусловливает его высокую иммуногенную активность (выживаемость 83%). Заключение. На основании полученных данных существует необходимость дальнейшего детального исследования иммуногенных свойств КС F. tularensis subsp. mediasiatica А-61 в качестве перспективного компонента при конструировании вакцины против туляремии.

Цель. Основной целью работы является установление факторов, обусловливающих вспышки бытовой групповой заболеваемости ГЛПС в зимний период на территории Республики Башкортостан как основы для обоснования профилактических мероприятий. Материалы и методы. Проанализированы данные Управления Роспотребнадзора по Республике Башкортостан (РБ) по заболеваемости ГЛПС в 54 административных районах РБ в зимний период 2016-2017 гг. Обобщены результаты ликвидации эпидемических очагов с бытовой групповой заболеваемостью ГЛПС в зимний период на территории РБ в 20102017 гг. Результаты. Зимняя спорадическая заболеваемость ГЛПС ежегодно регистрируется среди сельского и городского населения степной, лесостепной и лесной зон РБ. Отмечено, что эпидемические очаги с бытовой групповой заболеваемостью ГЛПС наиболее часто возникают на территории лесостепной зоны. Установлено, что заражения ГЛПС бытового типа имеют место в населенных пунктах, в той или иной степени примыкающих к лесным массивам, а также при посещениях городским населением загородных объектов, расположенных на территории активных природных очагов ГЛПС. При этом риск бытового заражения ГЛПС целиком определяются санитарно-гигиеническим состоянием жилых и производственных объектов. Заключение. Основным тактическим приемом предупреждения возникновения эпидемических очагов с бытовой групповой заболеваемостью ГЛПС среди сельского и городского населения РБ является одновременное применение барьерной, поселковой дератизации и дезинфекции на участках высокого риска заражения.

Цель. Получение моноклональных антител (МкАт) к синтетическому тетрасахариду - повторяющемуся звену капсульного полисахарида (КП) Streptococcus pneumoniae серотипа 14 и их иммунохимическая характеристика. Материалы и методы. Для получения гибридомы, продуцирующей МкАт, мышей иммунизировали синтетическим тетрасахаридом, конъюгированным с бычьим сывороточным альбумином (БСА) с последующей гибридизацией В-лимфоцитов с клетками мышиной миеломы. Антитела получали in vitro и in vivo. Иммунохимическую характеристику МкАт к тетрасахариду проводили в реакции иммунопреципитации и с помощью различных вариантов постановки ИФА. Результаты. Впервые получена мышиная гибридома, продуцирующая IgM к тетрасахариду. Титр IgM к тетрасахариду в супернатантах клонов и в асцитической жидкости мышей в ИФА, выявленных с помощью биотинилированого тетрасахарида и синтетического КП, адсорбированных на твердой фазе, был выше по сравнению с использованием твердофазного бактериального КП. В реакции ингибирования ИФА МкАт распознавали соответствующие углеводные эпитопы растворенного в жидкой фазе бактериального КП S. pneumoniae серотипа 14 лучше, чем лиганд тетрасахарида и синтетический КП. Заключение. Для выявления МкАт к тетрасахариду в ИФА в качестве твердофазных антигенов предпочительно использовать синтетические аналоги КП. Полученные МкАт к тетрасахариду могут быть использованы для определения представленности протективного тетрасахаридного эпитопа в КП при разработке пневмококковых вакцин.

Цель. Оптимизация ускоренного способа генодиагностики коклюша на основе изотермической амплификации для выявления ДНК возбудителя.Материалы и методы. Исследование проводилось на 35 типовых коллекционных штаммах и 169 штаммах Bordetella pertussis, B.parapertussis, B. bronchiseptica, выделенных в бактериологических лабораториях субъектов РФ. В исследование включено 329 клинических образцов, полученных от больных с подозрением на коклюш и контактных с ними лиц, госпитализированных в ИКБ № 1 ДЗМ. Хромосомную ДНК выделяли стандартным методом кипячения из штаммов, из клинических образцов с помощью коммерческих наборов. Выявление и дифференциацию специфических фрагментов генома возбудителей коклюша, паракоклюша и бронхисептикоза в клиническом материале осуществляли с использованием набора «АмплиСенс^® Bordetella multi-FL» (ЦНИИЭ, Москва). Результаты. Проведена оптимизация ранее предложенного способа и разработан ускоренный метод генодиагностики коклюшной инфекции на основе LAMP с детекцией с помощью электрофореза, а также с помощью интеркалирующего красителя. Разработанный способ генодиагностики позволяет выявлять ДНК B.pertussis в течение 4-5 часов от начала исследования в клиническом материале. Аналитическая чувствительность - 10² ГЭ/мл. Оценка валидности показала, что разработанный способ обладает 99,6% чувствительностью и 98,7% специфичностью; прогностическая ценность положительного и отрицательного результата составила 99,6% и 98,7% соответственно; индекс точности (диагностическая эффективность) - 99,4%; отношение правдоподобия положительного и отрицательного результата - 76,6 и 0,004 соответственно. Оценка аналитической надежности в 100% случаев показала сходимость и воспроизводимость методики. Заключение. Диагностический тест по выявлению ДНК B.pertussis методом LAMP позволит увеличить эффективность лабораторной диагностики коклюшной инфекции.

Цель. Определить композиционный состав микробиоты и частоту выявления отдельных бактериальных видов в образцах мокроты у пациентов с бронхиальной астмой (БА), хронической обструктивной болезнью легких (ХОБЛ) и их сочетанной формой. Материалы и методы. Проведено бактериологическое исследование образцов индуцированной мокроты больных хроническими обструктивными заболеваниями легких (БА, ХОБЛ). Результаты. У больных сочетанной формой БА и ХОБЛ обнаружен более разнообразный видовой состав Streptococcus sрp. и Staphylococcus spр., грамотрицательные палочки Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Serratia marcescens, Pseudomonas aeruginosa, Haemophilus influenzae, Burkholderia cepacia, грамположительные палочки и палочковидные бактерии Corynebacterium spр., Actinomyces spр. и Tsukamurella рaurometabola в сравнении с пациентами, страдающими только астмой или ХОБЛ. Отмечено изменение микробного состава (преобладание Streptococcus spр., Neisseria subflava и снижение Enterococcus sрр.) у пациентов с ХОБЛ и сочетанной формой ХОБЛ и БА, осложненных дыхательной недостаточностью, эмфиземой легких и/или диффузным пневмосклерозом. Заключение. Видовое разнообразие респираторной микробиоты является не только фактором риска прогрессирующего течения легочных заболеваний, но и свидетельствует о тех изменениях в структуре ткани легкого, которые происходят в процессе хронического воспаления.

Цель. Изучение функциональных свойств катионных антимикробных пептидов 0-дефенсинов, выделенных из лейкоцитов крови гамадрила Papio hamadryas. Материалы и методы. 0-Дефенсины гамадрила были выделены из экстрактов лейкоцитарной массы методами ультрафильтрации, препаративного электрофореза и обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии. В качестве тестовых микроорганизмов использовали грамотрицательные бактерии Escherichia coli, грамположительные бактерии Listeria monocytogenes и Staphylococcus aureus, грибы Candida albicans. Минимальные ингибирующие концентрации (МИК) определяли, тестируя последовательные разведения исследуемых пептидов методом радиальной диффузии в агарозном геле. Микробоцидное действие оценивали методом подсчета выживших КОЕ после инкубации с пептидами. Влияние 0-дефенсинов на проницаемость мембран E.coli оценивали с помощью хромогенных маркеров о-нирофенил- β-D-галактопиранозида и нитроцефина. Результаты. Сравнительный анализ антимикробных свойств 0-дефенсинов гамадрила показал, что они обнаруживают широкий спектр антимикробного действия, сопоставимый с 0-дефенсином макаки резус RTD-1 и проявляют бактерицидный и фунгицидный эффекты в микромолярных концентрациях. Изучено влияние различных условий среды (низкая и повышенная ионная сила, содержание в среде сыворотки крови) на антимикробную активность 0-дефенсинов. Показано, что 0-дефенсины обладают способностью увеличивать проницаемость наружной мембраны E.coli, однако в отличие от 0-дефенсинов не оказывают заметного влияния на проницаемость внутренней мембраны. Заключение. Выделенные из лейкоцитов крови гамадрила 0-дефенсины являются эффективными антимикробными агентами с широким спектром микробоцидного действия. 0-Дефенсины гамадрила в отличие от 0-дефенсинов сохраняют антимикробную активность в средах с повышенной ионной силой. 0-Дефенсины увеличивают проницаемость наружной, но не цитоплазматической мембраны E.coli, что позволяет предположить механизм антимикробного воздействия этих пептидов, отличный от 0-дефенсинов.

Цель. Изучение механизма противовирусного действия и оценка клинической эффективности, безопасности и переносимости терапии препаратом Фортепрен^® у пациентов с хронической рецидивирующей герпесвирусной инфекцией генитальной локализации. Материалы и методы. Клинические исследования проходил лекарственный препарат Фортепрен^® (натрия полипренилфосфат) раствор для инъекций, 4 мг/мл, который вводили пациентам, прошедшим базовый курс препарата Ацикловир-Акри^® для снятия острой фазы заболевания. Исследование проводили на 80 пациентах мужского и женского пола, отобранных в процессе скрининга с подтвержденным диагнозом хроническая рецидивирующая герпесвирусная инфекция генитальной локализации (ХРГВИ). Было сформировано 2 группы. Пациентам 1 группы (экспериментальной) Фортепрен^® в дозе 2 мл (8 мг) вводили внутримышечно на стадии ремиссии трехкратно с интервалом в 21 день на 3±2, 24±2 и 45±2 сутки после окончания 10-дневного базового курса лечения острой фазы заболевания с применением препарата ацикловир таблетки по 400 мг - 13±2, 34±2 и 55±2 день от начала исследования. Пациентам 2 группы (контрольной) раствор плацебо в объеме 2 мл вводили внутримышечно на стадии ремиссии трехкратно на 3±2, 24±2 и 45±2 сутки после окончания базового курса лечения острой фазы заболевания с применением препарата ацикловир таблетки по 400 мг - 13±2, 34±2 и 55±2 день от начала исследования. Для оценки эффективности применения препарата Фортепрен^® использовали такие критерии как: увеличение продолжительности межрецидивного периода, уменьшение частоты рецидивов за весь период наблюдения; снижение выраженности рецидивов, оцененное в баллах, изменение иммунологических показателей по динамике изменения продукции основных цитокинов. Результаты. В 1 группе пациентов межрецидивный период за весь период проведения исследования статистически значимо увеличился с 29,36±2,16 до 42,98±3,29 суток. В то время как во 2 группе изменения этого показателя не отмечено. Соответственно у пациентов 1 группы отмечено статистически достоверное сокращение частоты рецидивов ХРГВИ с 3,03±0,02 до начала лечения до 1,94±0,19 во время лечения при отсутствии снижения частоты рецидивов в контроле. Оценка в баллах выраженности рецидивов ХРГВИ у пациентов группы 1 указывает на эффективность данной схемы лечения. Сумма баллов средних значений балла выраженности признаков ХРГВИ статистически достоверно снизилась в 1 группе с 7,36±0,35 баллов на 1 визите до начала лечения до 4,75±0,35 баллов во время лечения. Во 2 группе изменений не отмечено. Уровень лейкоцитарного вирус-индуцированного интерферона (ЛВИ-ИФН) у пациентов экспериментальной группы повысился к завершению клинического исследования с 36 до 64% по сравнению с контрольной группой, в которой не наблюдалось прироста титров ЛВИ-ИФН. Оценка продукции ИФНа, ИФ^, ИЛ-10, KH-12p40, HH-12p70, ИЛ-15, ИЛ-2, ИЛ-4, МИФ-1а, ФНОа показала увеличение их количества к завершению исследования у пациентов, получавших препарат Фортепрен^®, по сравнению с контрольной группой. Заключение. Показана эффективность применения препарата Фортепрен^® в дозе 2 мл (8 мг) при внутримышечном введении пациентам с хронической рецидивирующей герпесвирусной инфекцией генитальной локализации на стадии ремиссии трехкратно с интервалом в 21 день на 3±2, 24±2 и 45±2 сутки после окончания 10-дневного базового курса лечения острой фазы заболевания с применением препарата ацикловир.

Цель. Изучить качественный состав, количественное содержание микроорганизмов, оценить жизнеспособность и функциональный статус нейтрофилов в ротовой жидкости пациентов, использующих съемные и несъемные СОК. Материалы и методы. В настоящем исследовании использовалась свободная ротовая жидкость 100 пациентов в возрасте от 21 до 79 лет. Определение качественного и количественного состава микрофлоры проводилось методом ПЦР с помощью системы «Фемофлор-16» (ООО «НПО ДНК-технология», Россия). Определение общего числа лейкоцитов проводили в камере Горяева, анализ их жизнеспособности осуществляли при окраске трипановым синим, для исследования показателей лизосомальной активности нейтрофилов использовали акридиновый оранжевый, кислородзависимый метаболизм изучали с помощью НСТ-теста, фагоцитарную функцию определяли по поглощению частиц латекса. Результаты. У лиц, использующих зубные протезы, изменяется качественный и количественный состав микрофлоры полости рта. Способ гигиенического ухода за СОК значимым образом не влияет на состав микрофлоры ротовой жидкости пациентов. У лиц, использующих СОК, установлено снижение общего количества лейкоцитов и их жизнеспособных форм в свободной ротовой жидкости, при этом отмечена стабильность функционирования жизнеспособных нейтрофилов у пациентов со съемными СОК и значительное снижение фагоцитарной способности и микробицидного кислородзависимого потенциала нейтрофилов при применении несъемных СОК. Заключение. Инородное тело в виде съемной или несъемной СОК изменяет функционирование факторов врожденной противоинфекционной защиты слизистой оболочки полости рта, что может стать причиной развития инфекционных осложнений при протезировании.

Цель. Характеристика микропейзажа небных миндалин у здоровых студентов в зависимости от времени года. Материалы и методы. Обследованы 40 студентов без патологии ротоглотки в возрасте 17-30 лет (23±3,5) при отсутствии хронического тонзиллита при фарингоскопии, признаков острой респираторной инфекции, приема антибиотиков в течение 1 месяца до проведения исследования и перенесенной ангины в анамнезе в течение последних 5 лет. Обследование проводилось трехкратно, раз в сезон: 99 осенью с 16.10 по 02.11, зимой с 27.01 по 06.03, весной с 02.04 по 19.04. Результаты. Для нормального микропейзажа здоровых лиц в возрасте 17-30 лет характерно присутствие Streptococcus viridans, Streptococcus pyogenes, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Candida albicans, Neisseria, Micrococcus, Bacillus и Pseudomonas aeruginosa как постоянных представителей. Присутствие S. pyogenes и P. aeruginosa в структуре микропейзажа небных миндалин не сопровождалось какими-либо клиническими симптомами со стороны их носителей. Существует сезонная динамика увеличения частоты встречаемости условно патогенной флоры на небных миндалинах в весенний период и снижение роста всех микроорганизмов зимой.

Обязательным требованием к культурам клеток, используемым в научных исследованиях и биотехнологическом производстве, является отсутствие их контаминации вирусами. Нами описан случай незапланированного выделения в культуре клеток почки эмбриона макаки-резуса МА-104 ортореовируса млекопитающих. ПЦР-анализ на наличие реовирусной РНК всех вероятных источников реовируса (трипсин, эмбриональная сыворотка коров, клинические образцы, культура клеток) не выявил вирусной РНК ни в одном из образцов. Важным условием активации репродукции реовируса в культуре клеток МА-104 являлось наличие в культуральной среде трипсина. Полученные результаты подчеркивают актуальность контроля на наличие контаминации реовирусами реактивов животного происхождения и клеточных культур. Поскольку реовирусы ассоциированы с заболеваниями человека, такой контроль на фармацевтическом производстве представляется обязательным.

Эффективность регенерации обеспечивается нормальным течением обменных и регуляторных реакций, поэтому регенеративная терапия должна быть направлена на выявление и устранение причин дисметаболизирующих воздействий. Микробиоценоз является неотъемлемой частью целостного организма человека, принимает участие в реализации всех обменных реакций носителя. Коррекция дисбиоза способствует восстановлению регенеративных процессов, для развития этого направления необходима разработка нового поколения пробиотических препаратов.

В течение последних десятилетий значительно возрос интерес мирового сообщества к проблеме сепсиса. Несмотря на достижения современной фундаментальной и клинической медицины, сепсис по-прежнему отличает значительная распространенность и высокая летальность. В статье обсуждены вопросы распространенности сепсиса в различных странах; показано, что ежегодно диагностируются миллионы случаев генерализованных гнойно-септических инфекций, отмечается устойчивый рост регистрируемого сепсиса в индустриально развитых странах, доля тяжелого сепсиса в структуре патологии на различных территориях варьирует от 2 до 43%. Сепсис по-прежнему остается в числе ведущих причин смерти больных, характеризуясь существенным размахом госпитальной летальности (от 30,6 до 80,4%). Перечислены категории больных, относящиеся к группам высокого риска развития сепсиса. Обращено внимание на эпидемиологические проявления этого патологического синдрома в педиатрии. Показаны особенности этиологического спектра возбудителей сепсиса, возрастающая этиологическая значимость микроорганизмов с множественной антибиотикоустойчивостью (Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter spp., MRSA, VRE и др.). Учитывая клиникоэпидемиологическую, социальную и экономическую значимость сепсиса, изучение его эпидемиологических аспектов является важнейшим направлением работы здравоохранения.