ПОЛУЧЕНИЕ РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЛКА ORF3 ВИРУСА ГЕПАТИТА Е 3 ГЕНОТИПА И ОЦЕНКА ЕГО АНТИГЕННЫХ СВОЙСТВ

Обложка


Цитировать

Полный текст

Аннотация

Цель. Разработка рекомбинантного полипептида - аналога полноразмерного белка ORF3 вируса гепатита Е (ВГЕ) 3 генотипа. Материалы и методы. Штаммы Escherichia coli, плазмидные векторы, биологические и клинические образцы, молекулярно-биологические, биоинформационные, биохимические, биотехнологические, серологические методы. Результаты. Из фекальных экстрактов от свиней из хозяйств Белгородской обл. выделена РНК, которая использована в ОТ-ПЦР для получения фрагмента гена orf3 ВГЕ 3 генотипа. С помощью А/Т-клонирования получена рекомбинантная плазмида со вставкой фрагмента ДНК (230 п.н.), кодирующего N-концевой участок белка ORF3. Рассчитана первичная структура недостающего С-концевого участка белка. Для повышения выхода целевого продукта в клетках E.coli проведена оптимизация кодонов последовательности ДНК, кодирующей полноразмерный белок ORF3. Рассчитанный фрагмент ДНК был химически синтезирован и использован при конструировании рекомбинантной плазмиды экспрессии. Получен рекомбинантный штамм E.coli - продуцент белка ORF3 в составе слитного с в-галактозидазой полипептида. Рекомбинантный белок выделен из телец-включений биомассы штамма-продуцента и хроматографически очищен. Антигенная специфичность полученного рекомбинантного полипептида подтверждена в иммунохимических реакциях (ИФА, Вестерн-блоттинг) с образцами сывороток крови больных гепатитом Е и контрольных групп пациентов. Заключение. Разработан рекомбинантный антиген ORF3 ВГЕ 3 генотипа и показана возможность его применения в диагностических тестах.

Об авторах

Г. И. Алаторцева

НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова

Автор, ответственный за переписку.
Email: noemail@neicon.ru
Россия

А. В. Сидоров

НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова

Email: noemail@neicon.ru
Россия

Л. Н. Нестеренко

НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова

Email: noemail@neicon.ru
Россия

Л. Н. Лухверчик

НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова

Email: noemail@neicon.ru
Россия

А. В. Милованова

НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова

Email: noemail@neicon.ru
Россия

Ю. И. Аммур

НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова

Email: noemail@neicon.ru
Россия

М. И. Михайлов

НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова, Российская медицинская академия последипломного образования

Email: noemail@neicon.ru
Россия

К. К. Кюрегян

НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова, Российская медицинская академия последипломного образования

Email: noemail@neicon.ru
Россия

С. В. Жаворонок

Белорусский государственный медицинский университет

Email: noemail@neicon.ru
Россия

В. В. Зверев

НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова

Email: noemail@neicon.ru
Россия

Список литературы

  1. Алаторцев В.Е., Алаторцева Г.И. Патент РФ. 1992. № 2043409 на изобретение «Штамм бактерий Escherichia coli, используемый для получения рекомбинантных белков».
  2. Алаторцев В.Е., Алаторцева Г.И. Патент РФ.1992. № 2071501 на изобретение «Вектор pEL5a, предназначенный для экспрессии чужеродной ДНК».
  3. Алаторцева Г.И., Сидоров А.В., Нестеренко Л.Н. и.др. Получение рекомбинантного аналога гликопротеина Е вируса Varicella zoster: клонирование, экспрессия и исследование антигенных свойств. Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2016, 15, 1(86): 77-85.
  4. Алаторцева Г.И., Сидоров А.В., Нестеренко Л.Н. и др. Получение рекомбинантного белка ORF3 вируса гепатита Е 1 генотипа с применением метода оптимизации кодонов. Журн. микробиол. 2017, 6: 63-72.
  5. Алаторцева Г.И., Сидоров А.В., Нестеренко Л.Н. и др. Получение рекомбинантного аналога капсидного белка вируса гепатита Е 1: клонирование, экспрессия, очистка, оценка антигенных свойств. Журн. микробиол. 2017, 6: 72-80.
  6. Поляков А.Д. Особенности эпидемиологического процесса гепатита Е в Белгородской области. Научные ведомости. Сер. Медицина. Фармация, 2016, 5(226), вып. 33:79-83.
  7. Практическая химия белка. Ред. Дарбре А. М., 1989.
  8. Солонин С.А., Мальцева Н.С., Троценко О.Е. и др. Циркуляция вируса гепатита Е на территории Хабаровского края. Дальневосточный журнал инфекционной патологии. 2010, 16: 31-36.
  9. Altschul S., Gish W., Miller W. et al. Basic local alignment search too. J. Molecular. Biology. 1990, 215(3):403-410.
  10. Fogeda M., de Ory F., Aveltyn A. et al. Differential diagnosis ofhepatitis E virus, cytomegalovirus and Epstein-Barr virus infection in patients with suspected hepatitis E. J. Clin. Virol. 2009, 45(3): 259-261.
  11. Graff J., Torian U. et al. A bicistronic subgenomic mRNA encodes both the ORF2 and ORF3 proteins of hepatitis E virus. J. Virol. 2006, 80: 5919-5926.
  12. Hyams C., Mabayoje D.A., Copping R. et al. Serological cross reactivity to CMV and EBV causes problems in the diagnosis of acute hepatitis E virus infection. J. Med. Virol. 2014, 86(3): 478-483.
  13. Khudyakov Y.E., Khudyakova N.S., Fields H.A. et al. Epitope mapping in proteins of hepatitis E virus. Virology. 1993, 194(1): 89-96.
  14. Khudyakov Y. E., Khudyakova N.S, Jue D.L. et al. Comparative characterization of antigenic epitopes in the immunodominant region of the protein encoded by open reading frame 3 in Burmese and Mexican strains of hepatitis E virus. J. Gen. Virol. 1994, 75 (3): 641-646.
  15. Koonin E.V., Gorbalenya A.E., Purdy M.A. et al. Computer-assisted assignment of functional domains in the nonstructural polyprotein of hepatitis E virus: delineation of an additional group of positive-strand RNA plant and animal viruses. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1992, 89(17): 8259-8263.
  16. Ma H., Song X., Li Z. et al. Varying abilities of recombinant polypeptides from different regions of hepatitis E virus ORF2 and ORF3 to detect anti-HEV immunoglobulin M. J. Med. Virol. 2009, 81(6): 1052-1061.
  17. Obriadina A., Meng J.H., Ulanova T. et al. A new enzyme immunoassay for the detection of antibody to hepatitis E virus. J. Gastroenterol Hepatol. 2002, Suppl 3:360-364.
  18. Towbin H., Staehlin T., Gordon Y. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1979, 76(9):4350-4359.
  19. Yarbough P.O., Tam A.W., Fry K.E. et al. Hepatitis E virus: identification of type-common epitopes. J. Virol. 1991, 659(11): 5790-5797.
  20. Zhou Y.H., Purcell R.H., Emerson S.U. An ELISA for putative neutralizing antibodies to hepatitis E virus detects antibodies to genotypes 1, 2, 3, and 4. Vaccine. 2004, 22(20): 2578-2585.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© Алаторцева Г.И., Сидоров А.В., Нестеренко Л.Н., Лухверчик Л.Н., Милованова А.В., Аммур Ю.И., Михайлов М.И., Кюрегян К.К., Жаворонок С.В., Зверев В.В., 2018

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License.
СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: ПИ № ФС77-75442 от 01.04.2019 г.


Данный сайт использует cookie-файлы

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.

О куки-файлах