БИОПЛЕНКА ХОЛЕРНОГО ВИБРИОНА: ПОЛУЧЕНИЕ, ХАРАКТЕРИСТИКА И РОЛЬ В РЕЗЕРВАЦИИ ВОЗБУДИТЕЛЯ В ВОДНОЙ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЕ


Цитировать

Полный текст

Аннотация

Цель. Экспериментальное получение, характеристика и оценка роли биопленки холерного вибриона. Материалы и методы. В серии опытов исследованы 33 штамма Vibrio cholerae eltor О1 и V. cholerae О139 разной эпидемической значимости и происхождения бактериологическим, микроскопическим (светооптическая, люминесцентная, сканирующая электронная микроскопия), молекулярно-генетическим, спектрофотометрическим и статистическим методами. Результаты. Показано формирование биопленки с участием межклеточных связей, пилей и экстрацеллюлярного материала и изменчивость микроорганизма (RO-фенотип и переход в некультивируемое состояние) в разных температурных и субстратных условиях. Выявлена более высокая способность к образованию биопленки выделенных из объектов окружающей среды штаммов по сравнению с изолированными из клинического материала независимо от их эпидемической значимости. Токсигенные штаммы биовара эльтор (из поверхностных водоемов во время вспышки холеры) продемонстрировали наибольшие показатели оптической плотности по сравнению с токсигенными клиническими изолятами и нетоксигенными культурами О1 и О139 серогрупп. Общим для образующих биопленку штаммов является наличие генов mbaA1 и mbaA2, vpsR, toxR, hapA. Заключение. Полученные данные подтверждают роль биопленки в резервации штаммов холерного вибриона разной эпидемической значимости в сапрофитической фазе существования микроорганизма.

Полный текст

ВВЕДЕНИЕ Выяснение причин укоренения холеры в эндемичных странах позволило установить длительную циркуляцию популяции возбудителя в поверхностных водоемах, служащих в качестве резервуара и основного фактора передачи инфекции и играющих определенную самостоятельную роль в эпидемиологии холеры [5, 8]. Здесь возбудитель в результате его выраженной адаптационной способности часто сохраняется в измененных формах и в виде сообществ [7]. Жизненно важным процессом в экологии микроорганизмов является формирование биопленок бактерий как во внешней среде, так и в организме человека. Изучение особенностей формирования биопленок некоторых бактерий in vitro и in vivo показало существование межклеточных контактов, обусловленных наличием фимбрий и перемычек (с образованием трехмерной структуры), слияние клеточных стенок и протопластов [10]. Образование регулируемой системой «Quorum sensing» [19] биопленки происходит через стадии разрозненных одиночных клеток и монослоя [21] с формированием сложного экзополисахаридного матрикса, в котором имеются водные каналы для доставки питательных веществ и выведения переработанных продуктов [16]. Тесные структурные ассоциации клеток в составе биопленки ведут к интенсивному обмену метаболитами (химическая коммуникация) и, возможно, генетическим материалом, приводящим к адаптивной изменчивости функций всего сообщества [20]. Подобная способность возбудителя холеры обеспечивается экспрессией комплекса генов, определяющих его выживаемость не только в организме человека (связанную с патогенными свойствами), но и в неблагоприятных условиях внешней среды. Существование различных механизмов выживания холерного вибриона в окружающей среде, включая формирование биопленки [23], представляет интерес для изучения циклических процессов его адаптации в составе водных экосистем. Цель работы - экспериментальное получение, характеристика и оценка роли биопленки в резервации холерного вибриона. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ Исследована способность формировать биопленку 33 изолятов Vibrio cholerae eltor О1 и V cholerae О139 разной эпидемической значимости из коллекции музея живых культур Иркутского противочумного института: 22 штамма V. cholerae eltor О1, из них 11 выделенных от больных и из объектов окружающей среды (ООС) во время эпидосложнений (генотип ctxAB+ tcpA+) и 11 - от вибриононосителей и из поверхностных водоемов в благополучный период (генотип ctxAB- tcpA-); 11 штаммов V. cholerae О139 серогруппы, включая 4 клинических изолята (генотип ctxAB+ tcpA+) и 7 - из воды и ила открытых водоемов в благополучный период (генотип ctxAB- tcpA-). Исследование штаммов холерного вибриона проводили в соответствии с [4]. Штаммы изучены в мультиплексной ПЦР (М-ПЦР) с использованием праймеров для детекции генов ctxAB, tcpA, toxR [9] и в ПЦР с одной парой праймеров для детекции гена mshQ (определяет персистентный потенциал микроба), hapA (отвечает за продукцию гемагглютининпротеазы), vpsR (кодирует выработку экзополисахарида) и mbaA1, mbaA2 (участвуют в формировании структуры биопленки) [13, 15, 22, 25]. Для получения и исследования биопленки проведено несколько серий опытов. В первой серии исследовали способность вибрионов к образованию биопленки в условиях культивирования в бульоне Хоттингера (пробирочный метод) при 22 и 37°C в течение 24 час инкубации. Результат оценивали визуально по наличию окрашенного 0,1% раствором кристаллического фиолетового ободка на стенках пробирок после трехкратного промывания дистиллированной водой. Во второй серии проводили количественное определение способности вибрионов к образованию биопленки фотометрическим методом. В этом случае устанавливали способность V. cholerae к адгезии на стенках 96-луночной полистироловой планшеты с инкубацией в течение 24 час при 22 и 37°C [11]. После отмывания неприкрепленных клеток, окрашивания 0,1% раствором кристалл-виолета и экстракции красителя измерение оптической плотности (OD) осуществляли на ИФА-анализаторе Multiscan Ascent при длине волны 570 нм [24]. Выполнено два независимых разновременных эксперимента, в которых каждый штамм при обоих температурных режимах тестировался в 12 повторностях. Для статистической обработки результатов применяли двухфакторный дисперсионный анализ: перекрестная классификация, равномерный комплекс, смешанная модель (фактор «штамм» - случайный, фактор «температура» или «опыт» - фиксированный) [1]. В третьей серии опытов с интервалом 7 дней исследовали способность вибрионов к образованию биопленки: каждую культуру в концентрации 108 м.к./мл по 0,3 мл помещали в пробирки с 3 мл автоклавированной речной воды, содержащей субстрат (хитин, 1,0 мкл), а также в пробирки с 3 мл автоклавированной воды (контроль) при 4 и 22°С в течение трех месяцев. Определение холероген-ности полученных в этой серии опытов субкультур токсигенного штамма проводили посредством внутрикишечного заражения взвесью холерного вибриона (в дозе 107 м.к./мл) кроликов-сосунков в возрасте 9 - 12 дней массой 100 - 120 г [18]. В четвертой серии выявление формируемой холерным вибрионом биопленки проводили с использованием метода микроскопии (светооптической и люминесцентной). Для постановки эксперимента 1 мл 18-час бульонной культуры холерного вибриона добавлялся к 9,0 мл автоклавированной водопроводной воды. Полученная суспензия разливалась по 2,0 мл в стерильные пробирки в трех вариантах: взвесь культуры в воде; взвесь культуры с добавлением кристаллического (порошкообразного) хитина (1 мг); взвесь культуры с добавлением коллоидного хитина (50 мкл суспензии с концентрацией 140 мг/мл) [3] с содержанием пробирок при 22°С. Приготовленные из биопленки со дна пробирки в разные сроки (от 72 ч до трех месяцев) мазки фиксировали 10% формалином в этаноле в течение 30 мин, окрашивали кристаллическим фиолетовым (0,1% водный раствор), параллельно - толуидиновым синим (0,5% водный и 0,1% раствор в 30% этаноле) - 30 - 60 мин [6] и просматривали под микроскопом. Антиген О1 в составе биопленки выявляли в реакции иммунофлуоресценции с препаратами коммерческого диагностического флюоресцирующего холерного адсорбированного иммуноглобулина или конъюгированными с флюоресцеин-изотиоционатом моноклональными антителами ФИТЦ-МКА О1 (F8612). Нефиксированные (высушенные) мазки или препарат «раздавленная капля» окрашивали раствором акридинового оранжевого (АО) на цитратно-фосфатном буфере (ЦФБ, рабочий раствор 1:6000) [6]. Микросъемку проводили на микроскопе «Karl Zeiss» с видеосистемой. На заключительном этапе исследований для сканирующей электронной микроскопии проводили щадящую процедуру фиксации препаратов (с максимальным сохранением образованной микроорганизмом биопленки) и обеззараживание материала. Культуру холерного вибриона в конечной концентрации 107 м.к./ мл в объеме 20,0 мл каждого штамма помещали во флаконы с 200 мл автоклавированной речной воды, содержащие на дне стерильные покровные стекла, и инкубировали при 18 - 22°С. В разные (от 1 до 12 мес.) сроки покровные стекла отмывали трехкратно дистиллированной водой и подвергали фиксации по [2] в нашей модификации. После проведения контроля специфической стерильности покровные стекла с образцами биопленки напылялись золотом в вакуумной напылительной установке «BALZERS SCD-004» Sputter Coater, Германия и исследовались в сканирующем электронном микроскопе Philips SEM525M в режиме высокого вакуума, ускоряющего напряжения 30 кВт и разрешения 8 нм. РЕЗУЛЬТАТЫ Исследование в условиях лаборатории возможности штаммов холерного вибриона, выделенных при разных эпидемиологических ситуациях, формировать биопленку показало, что их адаптационная способность различна и в определенной мере связана с условиями существования. В бульоне Хоттингера, рН 7,6 (первая серия опытов) формирование холерным вибрионом биопленки проявляется уже к концу суток. Выявлена высокая способность прикрепления клеток к стенке пробирок при 22°C токсигенного вибриона эльтор О1 серогруппы (И-1330, выделен из поверхностного водоема на фоне вспышки в г. Владивосток, 1999 г.) и нетоксигенного вибриона О139 серогруппы (И-16, выделен из водоема в месте сброса сточных вод городских очистных сооружений г. Иркутск), усиливающего образование биопленки в присутствии хитина. Во второй серии опытов количественное определение способности вибрионов разной эпидемической значимости к образованию биопленки при двух температурных режимах показало, что штаммы V. cholerae eltor обладают широким диапазоном способности образовывать биопленку - от еле видимого кольца на границе двух сред со значением оптической плотности от чуть выше фоновых (OD570=0,20) до мощной толстой пленки с экстинцией OD570 до 4,33. Культуры V. cholerae O139 проявляют меньший размах показателя (в пределах OD570 0,30 - 3,04). В отдельных независимых опытах при проведении дисперсионного анализа общую фенотипическую изменчивость признака у всех исследованных штаммов разлагали на дисперсию, определяемую различиями между штаммами, изменением температуры, взаимодействием между этими факторами и остаточную дисперсию. Полученные результаты показали, что влияние особенностей штаммов на изменчивость OD570 высоко значимо (соответственно в первом и втором опытах F=168,64, P<0,001 и F=58,87, P<0,001). Доли влияния фактора «штамм» составили 41,7 и 58,7%. Эти данные позволили установить значительный вклад в общую вариабельность изучаемого признака биологических особенностей исследованных штаммов. Однако они не позволяют сделать однозначного и окончательного вывода о роли этого фактора в контроле фенотипического проявления способности к образованию биопленки, поскольку при таком анализе нельзя исключить действия неконтролируемых внешних факторов. При проведении дисперсионного анализа признака как при 22°C, так и при 37°C общую изменчивость OD570 разлагали на дисперсию, зависящую от различий между штаммами, особенностями опытов, взаимодействием между этими факторами и остаточную дисперсию Молекулярно-генетическая характеристика штаммов V. cholerae V. cholerae eltor О1 V. cholerae О139 Источник выделения Опре деляемые гены человек ООС человек ООС человек ООС токсигенные нетоксигенные токсигенные нетоксигенные сtxAB 8/8* 3/3 0/6 0/5 4/4 0/7 tcpA 8/8 3/3 0/6 0/5 4/4 0/7 toxR 8/8 3/3 6/6 5/5 4/4 7/7 hap A 8/8 3/3 4/6 4/5 4/4 4/7 mshQ 8/8 3/3 3/6 5/5 4/4 0/7 mbaA1 7/8 3/3 6/6 5/5 4/4 1/7 mbaA2 8/8 3/3 6/6 5/5 4/4 6/7 vpsR 8/8 3/3 6/6 5/5 4/4 5/7 Примечание. ных штаммов. * Наличие гена/количество исследован- Оказалось, что при обеих тем- О1 и О139 серотрупп пературах выращивания вклад различий между штаммами в общую изменчивость изучаемого признака высоко достоверен (при первой из них: F=63,81, P<0,001, при второй: F=70,86, P<0,001). Доля влияния фактора «штамм» при 22°C составила 31,4%, а при 37°C - 42,9%. Полученные результаты свидетельствует о том, что разные штаммы в целом имеют неодинаковую способность к образованию биопленки. Сравнение средних значений OD570 у вибрионов из разных серогрупп выявило, что независимо от их эпидемической значимости штаммы, выделенные из объектов окружающей среды, обладают более высокой способностью к образованию биопленки по сравнению с изолированными из клинического материала. При этом наибольшие показатели оптической плотности при формировании биопленки продемонстрировали токсигенные штаммы биовара эльтор, выделенные из поверхностных водоемов во время вспышки холеры, по сравнению с токсигенными клиническими изолятами и нетоксигенны-ми культурами О1 и О139 серогрупп. Молекулярно-генетическое исследование штаммов показало, что общим для образующих биопленку штаммов является наличие генов, кодирующих «архитектуру» биопленки - mbaA1 и mbaA2, выработку экзополисахарида - vpsR; регуляторного гена toxR и отвечающего за экспрессию гемагглютининпротеазы - hapA (табл.). В третьей серии опытов при культивировании штаммов при 22°С в автоклавированной речной воде с хитином выявлена фенотипическая изменчивость клеток. На третьей неделе от начала эксперимента среди типичных колоний в S-форме эпидемического токсигенного вибриона эльтор И-1330 обнаружены сморщенные, сухие колонии, агглютинирующиеся холерными О- и RO-сыворотками, стабильные при пассажах на плотной питательной среде (казеиново-дрожжевой агар, рН 7,6), с сохранившимися основными генами вирулентности - ctxA, tcpA, toxR и вызывающие выраженный холерогенный эффект у кроликов-сосунков. В условиях культивирования при 4°С происходят более глубокие изменения в морфологии вибрионов (кокковидные с плотной стенкой клетки, подобные некультивируемым формам вибриона). Высев в ходе исследования из пробирок на плотные питательные среды показал отсутствие роста микроба на 21 день культивирования у эпидемического вибриона эльтор И-1330 (физраствор с хитином) и выделенного из водоемов в благополучный период вибриона эльтор И-638 (речная вода) с полным переходом на 91 день всех взятых в эксперименты этой серии штаммов в некультивируемое состояние. В этих пробах при окрашивании акридиновым оранжевым и просмотре посредством люминесцентной микроскопии препарата «раздавленная капля» обнаруживаются подвижные округлой формы клетки, единичные и собранные в конгломераты, имеющие зеленое свечение. В ПЦР выявляется исходный набор генетических детерминант каждого штамма холерного вибриона. В четвертой серии опытов с использованием метода светооптической и люминесцентной микроскопии выявлена способность эпидемических и неэпидемических штаммов холерного вибриона эльтор к образованию биопленки с сохранением в ней жизнеспособных клеток длительное время. Признаками формирования биопленки с самого начала эксперимента являются наличие периферически располагающейся части из прилегающих друг к другу вибрионов; тяжи; полиморфизм вибрионов (наряду с типичными кокковидные и полые формы) и розоватая или базофильная субстанция - экзополисахаридный матрикс [3]. Окрашивание препаратов холерной люминесцирующей сывороткой О1 обнаруживает периферическую структуру и отходящие от нее тяжи из специфически светящихся полиморфных клеток - прозрачная зеленоватая субстанция, содержащая специфически окрашенные изолированные клетки и их конгломераты. Описанная структура имеет полости по типу каналов. Прижизненная окраска препаратов АО выявляет частички коллоидного хитина с прикрепленными вибрионами зеленого цвета в виде микроколонии с окружающим ее экзополисахаридным матриксом (красновато-оранжевого цвета). Электронно-микроскопическое изучение препаратов выявило особенности цитоархитектоники полученной в эксперименте (30 - 150 суток) биопленки четырех штаммов V.cholerae О1 и О139 в S- и R-форме. Установлено, что в первые (30 сут) сроки морфология вибрионов О1 серогруппы представлена в виде типичной и полой формы клеток с дальнейшим образованием (60 сут) тяжей из этих клеток и формированием микроколоний преимущественно из округлой формы Рис. 1. Морфология токсигенного V. cholerae О139 (гладкая S-форма). а - исходная культура, б - 120 сут инкубации. х9600 СЭМ. Рис. 2. Морфология токсигенного V. cholerae О139 (шероховатая R-форма). а - исходная культура, б - 120 сут инкубации. х9600 СЭМ. клеток (120 сут). В отдаленный срок (150 сут) морфология биопленки представлена подвергшимися лизису конгломератами и изолированными клетками типичной и округлой (кокковидной) формы. У вибриона О139 серогруппы (рис. 1) через 30 сут эксперимента выявляется состоящая из округлых форм с включенными в нее диффузно типичными клетками вибриона колония. Через 60 - 90 сут - значительное утолщение и укрупнение последней, а также располагающиеся диффузно с пилями отдельные в состоянии деления клетки. Через 120 сут - гроздевидные скопления из клеток округлой формы, погруженных в плотный матрикс, а также вновь формирующаяся из типичных форм вибриона микроколония. В дальнейший срок (150 сут) наблюдается лизис составляющих элементов. Исследование штамма V. cholerae O1 в R-форме через 30 сут выявило делящиеся клетки, а также сформированную (60 сут) микроколонию из плотно упакованных округлой и типичной формы клеток с дальнейшей (90 сут) ее деструкцией и сохранением по периферии клеток типичной и округлой формы. Через 120 сут - скопления из округлой формы клеток в виде тяжа и гроздевидных микроколоний. В более поздний срок исследования - типичной и округлой форм клетки вибрионов, их небольшие скопления. Для биопленки, формируемой вибрионом О139 серогруппы в R-форме (рис. 2) через 30 сут характерны типичные вибрионы и округлой формы с отчетливо выраженными пилями и соединительными тяжами клетки, объединенные между собой в виде микроколонии, нередко многослойные, иногда с сетчатой структурой матрикса и немногочисленными в нем вибрионами. Через 60 сут, наряду с типичной формы вибрионами и подвергшимися лизису их скоплениями, имеют место клетки с полым центром и утолщенной клеточной стенкой. Наглядны скопления в виде грозди винограда из округлой формы клеток, выявляющиеся на 90 - 120 сут, а также клеточный детрит. В поздний срок (150 сут) - микроколония из типичных вибрионов и единичных округлой формы клеток. ОБСУЖДЕНИЕ Результаты проведенных экспериментов с V. cholerae eltor О1 и V. cholerae О139 разной эпидемической значимости и различного происхождения позволили наблюдать формирование биопленки и изменчивость микроорганизма в его основных формах - переход в стабильный шероховатый RO-фенотип (сохраняющий исходный набор генов патогенности), экспрессирующий необходимый для построения биопленки экзополисахарид и переход в некультивируемое состояние. Деструкция клеточных элементов обеспечивает поступление питательных веществ и возникновение повторных циклов размножения и иммобилизации клеток. Такая пластичность и высокие адаптивные свойства позволяют вибриону приспосабливаться к существованию при попадании в окружающую среду и приводят к длительной персистенции в водных объектах даже в условиях резко континентального климата. Примером может служить расследование причин обнаружения на протяжении 2,5 месяцев 2006 г. вибриона О139 серогруппы (наряду с RO-вариантом микроба и вибрионами не О1/О139) из проб воды и ила р. Ангары в г. Иркутск в месте глубинного выпуска правобережных очистных сооружений, когда было установлено длительное сохранение микроорганизмов рода Vibrio в иловых отложениях на этапах очистки сточных вод канализационноочистных сооружений, предположительно в составе биопленки. Все это подтверждает данные Donlan R.M., Costerton J.W. [17] о том, что в биопленочных сообществах более 99,9% бактерий растут в естественных водных экосистемах не в виде свободно плавающих клеток, а прикрепляются к любым твердым поверхностям абиотической и (или) биотической природы, образуя биопленки, имеющие в своем составе экзополисахаридный матрикс, при этом бактериальные клетки составляют не более 15% их объема [12]. Обнаружение в препаратах для микроскопирования вибрионов (кокковидных или имеющих форму овала), скомпонованных в виде конгломератов, отмечено и в наших ранних экспериментальных работах при получении и описании некультивируемых форм вибрионов. В данном исследовании обнаружение таких структур (конгломератов) позволяет рассматривать их как одну из форм образованной вибрионом биопленки. О существовании холерного вибриона в виде биопленки в поверхностном водоеме свидетельствует также факт более длительного (несколько дней) пребывания возбудителя в воде поверхностного водоема во время вспышки холеры в г. Владивосток (1999 г.) в сравнении со сроком прекращения выделения культур от больных холерой. Указанный токсигенный штамм из поверхностного водоема во время вспышки холеры в сравнении с клиническим изолятом на этой же вспышке обнаружил большие показатели оптической плотности (оценке биопленки по количественным показателям). Количественное определение способности вибрионов к образованию биопленки выявило, что этот показатель является характеристикой штаммов и определяется их биологическими особенностями. В целом величина этого признака у V. cholerae, выделенных из объектов окружающей среды, выше, чем у клинических изолятов. Очевидно, что такие свойства являются следствием адаптации холерного вибриона к существованию в природе, в этих условиях для увеличения выживаемости ему выгоднее агрегированное состояние. Можно полагать, что естественный отбор в природных условиях посредством образования биопленки направлен на поддержание гомеостаза популяции холерного вибриона. Полученные в настоящем исследовании данные согласуются с положением Б.Л.Черкасского [14], согласно которому одним из этапов развития пандемии холеры является попадание завезенного на территорию токсигенного вибриона в водную популяцию, где он не только сохраняет исходный патогенный потенциал, но и, образуя биопленку, способен к обмену генетической информацией [20]. Таким образом, формирование биопленки способствует резервации вирулентных штаммов холерного вибриона (в сапрофитической фазе существования микроорганизма) в случае их появления на территории в результате заноса или в межэпидемический период (на эндемичных территориях).
×

Об авторах

Е. С Куликалова

Иркутский научно-исследовательский противочумный институт

Иркутск

Л. Я Урбанович

Иркутский научно-исследовательский противочумный институт

Иркутск

С. Г Саппо

Иркутский научно-исследовательский противочумный институт

Иркутск

Л. В Миронова

Иркутский научно-исследовательский противочумный институт

Иркутск

Е. Ю Марков

Иркутский научно-исследовательский противочумный институт

Иркутск

В. В Мальник

Лимнологический институт

Иркутск

В. М Корзун

Иркутский научно-исследовательский противочумный институт

Иркутск

С. К Миткеева

Иркутский научно-исследовательский противочумный институт

Иркутск

С. В Балахонов

Иркутский научно-исследовательский противочумный институт

Иркутск

Список литературы

  1. Закс Л. Статистическое оценивание. М., Статистика, 1976.
  2. Кузнецов О.С. Экспериментальные подходы к изучению тонкой трехмерной морфологии клеток возбудителей чумы, холеры, сибирской язвы и некоторые особенности их поверхностных ультраструктур. Дис.канд. биол. наук. Саратов, 2010.
  3. Куликалова Е.С., Саппо С.Г., Урбанович Л.Я. и др. Модель биопленки холерного вибриона как механизм выживания в поверхностных водоемах. Сибирский экологический журнал. 2014, 1: 17-25.
  4. Лабораторная диагностика холеры: Методические рекомендации МУК 4.2.2218-07. М., Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2007.
  5. Литвин В.Ю., Марамович А.С., Гинцбург А.Л. Стратегия адаптивной изменчивости холерных вибрионов в природных водоемах. Вестн. РАМН. 2001, 11: 20-24.
  6. Луппа Х. Основы гистохимии. М., Мир, 1980.
  7. Марамович А.С., Погорелов В.И., Урбанович Л.Я. и др. Холера эльтор в Латинской Америке. Журн. микробиол. 2001, 5: 82-89.
  8. Марамович А.С., Урбанович Л.Я., Куликалова Е.С. и др. Роль и значение поверхностных водоемов в становлении и развитии VII пандемии холеры. Эпидемиология и инфекционные болезни. 2009, 2: 21-25.
  9. Миронова Л.В., Балахонов С.В., Урбанович Л.Я. и др. Определение геномных маркеров патогенности штаммов Vibrio cholerae, выделенных в Сибири и на Дальнем Востоке. Бюлл. ВСНЦ СО РАМН. 2004, 1 (2): 132-138.
  10. Овнанян К.О. Ультраструктурная архитектоника межклеточных контактов в биопленках бактерий in vitro и in vivo. Доклады Национальной академии наук Армении им. А.А. Трчунян. 2009, 1 (109): 78-85.
  11. Романова Ю. М., Алексеева Н. В., Смирнова Т. А. и др. Способность к формированию биопленок в искусственных системах у различных штаммов Salmonella typhimurium. Журн. микробиол. 2006, 4: 38-42.
  12. Сергиев В.П. Болезни человека как отражение внутривидовой борьбы. Журн. микро-биол. 2007, 3: 97-102.
  13. Смирнова Н.И., Кутырев В.В. Эволюция генома возбудителя холеры. Молекул. генетика. 2004, 4: 3-13.
  14. Черкасский Б.Л. Глобальная эпидемиология. М., Практическая медицина, 2008.
  15. Bomchil N., Watnick P., Kolter R. Identification and characterization of a Vibrio cholerae gene, mbaA, involved in maintenance of biofilm architecture. J. Bacteriol. 2003, 185 (4): 1384-1390.
  16. Costerton J. W, Lewandowski Z., DeBeer D. et al. Biofilms, the customized microniche. J. Bacteriol. 1994, 176 (8): 2137-2142.
  17. Donlan R.M., Costerton J.W. Biofilms: survival mechanisms ofclinically relevant microorganisms. Clin. Microbiol. Rev. 2002, 15: 167-193.
  18. Dutta N.K., Habbu M.K. Experimental cholera in infant rabbits: a method for chemotherapeutic investigation. Brit. J. Pharmacol. 1955, 10: 153-159.
  19. Huq A., Whitehouse C.A., Grim C.J. et al. Biofilms in water, its role and impact in human disease transmission. Curr. Opin. Biotechnol. 2008, 19 (3): 244-247.
  20. Meibom K.L., Blokesch M., Dolganov N.A. Chitin induces natural competence in Vibrio cholerae. Science. 2005, 310 (5755): 1824-1827.
  21. Moorthy S., Watnick PJ. Identification of novel stage-specific genetic reguirements through whole genome transcription profiling ofVibrio cholerae biofilm development. Mol. Microb^l. 2005, 57 (6): 1623-1635.
  22. Toma G., Kuroki Н., Nakasone N. et al. Minor pilin subunits are conserved in Vibrio cholerae type IV pili. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2002, 23: 35-40.
  23. Wai S.N., Mizunoe Y, Ybshida S.-I. How Vibrio cholerae survive during starvation. FEMS Microbiology. 1999, 180: 123-131.
  24. Watnick P.I., Kolter R. Steps in the development of a Vibrio cholerae El Tor biofilm. Mol. MiCTobiol. 1999, 34: 586-595.
  25. Yildiz F.H., Dolganov N.A., Schoolnik G.K. VpsR, a member of the response regulators of the two-component regulatory systems, is required for expression of vps biosynthesis genes and EPSETr-associated phenotypes in Vibrio cholerae O1 El Tor. J. Bacteriol. 2001, 183: 17161726.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML

© Куликалова Е.С., Урбанович Л.Я., Саппо С.Г., Миронова Л.В., Марков Е.Ю., Мальник В.В., Корзун В.М., Миткеева С.К., Балахонов С.В., 2015

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License.

СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: ПИ № ФС77-75442 от 01.04.2019 г.


Данный сайт использует cookie-файлы

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.

О куки-файлах