НОВЫЕ ПОДХОДЫ К ВЫЯВЛЕНИЮ ВОЗБУДИТЕЛЯ ЛЕГИОНЕЛЛЕЗА В КЛИНИЧЕСКИХ ОБРАЗЦАХ И ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ МЕТОДОМ ПЦР


Цитировать

Полный текст

Аннотация

Цель. Подбор перспективных мишеней для разработки на их основе тест-систем для выявления ДНК легионелл в исследуемом материале в ПЦР с электрофоретическим и гибридизационно-флуоресцентным учетом результатов. Материалы и методы. В исследованиях использовали 22 штамма Legionella pneumophila, 3 штамма Legionella spp. и 30 культур гетерологичных микроорганизмов; клинический материал и пробы из объектов окружающей среды. Анализ геномов проводили с использованием программы Mega 3.1.Подбор праймеров осуществляли с помощью программы Primer Express и алгоритма BLAST и зондов формата TaqMan на сайте www.genscript.com. Результаты. Проведен анализ 712 нуклеотидных последовательностей легионелл на наличие новых видоспецифичных и консервативных для L. pneumophila локусов. Для анализа были выбраны фрагменты генов жизнеобеспечения: fliC, mompS, ftsZ, dotA, dnaX, trpS, rpoB, rnp, proA, gspA. Установлено, что наиболее перспективными ДНК-мишенями являются гены ftsZ и mompS. На основе выбранных локусов сконструированы ПЦР тест-системы для выявления ДНК возбудителя легионеллеза в биологическом материале и объектах окружающей среды, охарактеризована их диагностическая ценность. Заключение. Проведенные исследования показали перспективность использования генов жизнеобеспечения ftsZ и mompS для конструирования новых препаратов для генной диагностики легионеллеза.

Об авторах

С. А Портенко

Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб», Саратов

Н. А Осина

Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб», Саратов

Т. В Бугоркова

Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб», Саратов

В. В Кутырев

Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб», Саратов

Список литературы

  1. Карбышев Г.Л., Терентьев А.Н., Веркина Л.М. и др. Конструирование препаратов для серологической диагностики легионеллеза. Конструирование и экспериментальные исследования легионеллезного серогруппы 1 антигенного полимерного диагностикума. Проблемы ООИ. 2006, 92: 52-54.
  2. Карпова Т.И., Дронина Ю.Е., Тартаковский И.С. и др. Природные биопленки легионелл и их роль в эпидемиологии инфекции: методы изучения и моделирования. Журн. микробиол. 2008, 2: 13-16.
  3. Онищенко Г.Г., Лазикова Г.Ф., Чистякова Г.Г. и др. Эпидемиологические версии расследования вспышки легионеллеза в г. Верхняя Пышма. Журн. микробиол. 2008, 2: 77-82.
  4. Тартаковский И.С. Болезнь легионеров: итоги 25-летнего изучения инфекции, проблемы и перспективы исследования. Вест. РАМН. 2001, 11: 11-14.
  5. Темежникова Н.Д. Лабораторная диагностика легионеллеза. Клин. лаб. диагн. 2008, 11: 34 39.
  6. Федоров Ю.Н., Янов Д.С., Кибирев Я.А. и др. Современные технологии в диагностике особо опасных инфекционных болезней. Саратов, 2003: 184-185.
  7. Castilla J., Barricarte A., Aldaz J. et al. A large Legionnaires' disease outbreak in Pamplona, Spain: early detection, rapid control and no case fatality. Epidemiol. Infect. 2007, 30: 1-10.
  8. Cloud J.L., Carrol K.C., Pixton P. et al. Detection of Legionella species in respiratory specimens using PCR with sequencing confirmation. J. Clin. Microbiol. 2000, 38 (5): 1709-1712.
  9. Diederen B.M., Peeters M.F Evaluation of two new immunochromatographic assays (Rapid U Legionella antigen test and SD Bioline Legionella antigen test) for detection of Legionella pneumophila serogroup 1 antigen in urine. J. Clin. Microbiol. 2006, 44 (8): 2991-2993.
  10. Fields B.S., Benson R.F, Besser R.E. Legionella and legionnaires'disease: 25 years of investigation. din. Microbiol. Rev. 2002, 15: 506-526.
  11. Koide M., Haranaga S., Higa F et al. Comparative evaluation of Duopath Legionella lateral flow assay against the conventional culture method using Legionella pneumophila and Legionella anisa strains. Jpn. J. Infect. Dis. 2007, 60 (4): 214-216.
  12. Wilson D.A., Yen-Lieberman B., Reischl U. et al. Detection ofLegionella pneumophila by real-time PCR for the mip gene. J. Clin. Microbiol. 2003, 41 (7): 3327-3330.
  13. Yzerman E.P., den Boer J.W, Lettinga K.D. et al. Sensitivity of three serum antibody tests in a large outbreak of Legionnaires' disease in the Netherlands. J. Med. Microbiol. 2006, 55 (5): 561-566.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© Портенко С.А., Осина Н.А., Бугоркова Т.В., Кутырев В.В., 2013

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License.
СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: ПИ № ФС77-75442 от 01.04.2019 г.


Данный сайт использует cookie-файлы

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.

О куки-файлах