ПОЛУЧЕНИЕ ГИБРИДНОГО БЕЛКА OprF-OprI PSEUDOMONAS AERUGINOSA


Цитировать

Полный текст

Аннотация

Цель. Получение препарата, состоящего из аминокислотных последовательностей двух белков наружной мембраны OprF и OprI P. aeruginosa и изучение его защитных свойств от экспериментальной синегнойной инфекции. Материалы и методы. Нуклеотидные последовательности, кодирующие белок OprF (1 kb), а также его С-концевую область (0,6 kb) и белок OprI (0,25 kb), встроены в плазмиду pQE-30 (QIAGEN). При этом ген oprF (С-концевая область oprF во втором варианте) и ген oprI были объединены и клонированы последовательно в одном векторе. При получении штаммов-продуцентов рекомбинантных белков использованы клетки Еscherichia coli штамма М15 (QIAGEN). Белковые продукты анализировали электрофорезом в полиакриламидном геле по методу Лэммли. Очистку рекомбинантных белков осуществляли методом аффинной хроматографии в колонках с Ni-сефарозой. При анализе защитных свойств рекомбинантных белков использовали живую вирулентную культуру P. aeruginosa штамм РА-170015. Результаты. Получены два гибридных рекомбинантных белка, включающих аминокислотные последовательности белков F и I наружной мембраны (OprF и OprI) P. aeruginosa. Первый рекомбинантный белок включал полноразмерные последовательности OprF и OprI, а второй С-концевую область (включающая 192-342 аминокислотные остатки) OprF и полноразмерную последовательность OprI. Эти рекомбинантные белки в результате двукратной иммунизации защищали мышей от экспериментальной внутрибрюшинной инфекции P. aeruginosa. Наилучшим защитным эффектом обладал гибридный белок, состоящий из полноразмерных последовательностей. Заключение. Полученные результаты открывают перспективу для дальнейшего иммунобиологического тестирования гибридного рекомбинантного белка OprF-OprI с целью создания иммунопрепарата для профилактики синегнойной инфекции.

Об авторах

А А Калошин

НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова, Москва

НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова, Москва

Н А Михайлова

НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова, Москва

НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова, Москва

Е И Леонова

НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова, Москва

НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова, Москва

Список литературы

  1. Гатыпова Е.В., Злыгостев С.А., Калошин А.А., Михайлова Н.А. Получение рекомбинантного белка I наружной мембраны (OprI) Pseudomonas aeruginosa и исследование его антигенных свойств. Журн. микробиол. 2008, 6: 50-53.
  2. Руднов В.А. Антибиотикотерапия госпитальных инфекций, вызванных P. aeruginosa. Русс. мед. журн. 2005, 13 (7): 485-490.
  3. Страчунский Л.С., Решедько Г.К., Стецюк О.У. и др. Сравнительная активностьантисинегнойных антибиотиков в отношении нозокомиальных штаммов Pseudomonas aeruginosa, выделенных в отделениях реанимации и интенсивной терапии России. Клинич. микробиол. антимикроб. химиотерап. 2003, 5: 35-46.
  4. Cornelis P. Pseudomonas: Genomics and molecular biology. Caister Academic Press, 2008.
  5. Doring G., Pier G.B. Vaccines and immunotherapy against Pseudomonas aeruginosa. Vaccine. 2008, 26 (8): 1011-1024.
  6. Kaloshin A.A., Gatypova E.V., Mikhailova N.A. Obtaining recombinant forms of the outer membrane protein F of Pseudomonas aeruginosa and assessment of their immunogenic properties. Appl. Biochem. Microbiol. 2011, 47 (8): 780-788.
  7. Sambrook J.F., Russell D.W. Molecular cloning, 2001.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML

© Калошин А.А., Михайлова Н.А., Леонова Е.И., 2012

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License.

СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: ПИ № ФС77-75442 от 01.04.2019 г.