Аннотация
Цель. Получение препарата, состоящего из аминокислотных последовательностей двух белков наружной мембраны OprF и OprI P. aeruginosa и изучение его защитных свойств от экспериментальной синегнойной инфекции. Материалы и методы. Нуклеотидные последовательности, кодирующие белок OprF (1 kb), а также его С-концевую область (0,6 kb) и белок OprI (0,25 kb), встроены в плазмиду pQE-30 (QIAGEN). При этом ген oprF (С-концевая область oprF во втором варианте) и ген oprI были объединены и клонированы последовательно в одном векторе. При получении штаммов-продуцентов рекомбинантных белков использованы клетки Еscherichia coli штамма М15 (QIAGEN). Белковые продукты анализировали электрофорезом в полиакриламидном геле по методу Лэммли. Очистку рекомбинантных белков осуществляли методом аффинной хроматографии в колонках с Ni-сефарозой. При анализе защитных свойств рекомбинантных белков использовали живую вирулентную культуру P. aeruginosa штамм РА-170015. Результаты. Получены два гибридных рекомбинантных белка, включающих аминокислотные последовательности белков F и I наружной мембраны (OprF и OprI) P. aeruginosa. Первый рекомбинантный белок включал полноразмерные последовательности OprF и OprI, а второй С-концевую область (включающая 192-342 аминокислотные остатки) OprF и полноразмерную последовательность OprI. Эти рекомбинантные белки в результате двукратной иммунизации защищали мышей от экспериментальной внутрибрюшинной инфекции P. aeruginosa. Наилучшим защитным эффектом обладал гибридный белок, состоящий из полноразмерных последовательностей. Заключение. Полученные результаты открывают перспективу для дальнейшего иммунобиологического тестирования гибридного рекомбинантного белка OprF-OprI с целью создания иммунопрепарата для профилактики синегнойной инфекции.