ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ДНК В ОТДЕЛЬНЫХ КЛЕТКАХ YERSINIA PESTIS МЕТОДОМ ПРОТОЧНОЙ ЦИТОФЛУОРИМЕТРИИ: СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ НЕОДНОРОДНОСТИ В КУЛЬТУРАХ ШТАММОВ С РАЗЛИЧНЫМИ БИ ОЛОГИЧЕСКИМИ СВОЙСТВАМИ

Цель . Сравнительный анализ штаммов Yersinia pestis с различными биологическими свойствами по содержанию ДНК в отдельных клетках. Материалы и методы . Использовали вирулентный штамм 231, авирулентный штамм КМ 260 (12) [231], являющийся его изогенной (бесплазмидной) производной, и вакцинный штамм ЕV НИИЭГ. Готовили 2-суточные агаровые культуры исследуемых штаммов, выращенные при 28°C, а также их субкультуры, полученные путем подращивания исходных культур при аэрации на жидкой питательной среде при 37°С. Фиксированные бактерии окрашивали по ДНК смесью бромида этидия и митрамицина, а затем исследовали на проточном цитофлуориметре для определения в исследуемых бактериальных популяциях долевого соотношения клеток с относительно низким и высоким содержанием ДНК. Степень неоднородности бактериальной популяции оценивали по значению коэффициента вариации ДНК гистограмм. Результаты . К 6 ч роста при 37°C в оптически неплотных бактериальных культурах устанавливалась высокая степень неоднородности по содержанию ДНК на клетку, связанная с активацией в бактериях процесса репликации ДНК. К 48 ч роста эта неоднородность полностью исчезала в культурах вирулентного штамма и сохранялась в культурах авирулентного штамма возбудителя чумы. Вакцинный штамм занимал промежуточное положение по исследуемым показателям. Заключение . Дальнейшие исследования неоднородности культур возбудителя чумы по содержанию ДНК на клетку могут стать основой для оперативной дифференциации штаммов по степени патогенности (опасности) для человека, а значит, и требований по обеспечению безопасных условий работы с данным микроорганизмом.

проточная цитометрия. содержание ДНК на клетку, микробиология отдельных клеток