ПОЛУЧЕНИЕ РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЛКА ТЕПЛОВОГО ШОКА 70 КДА ЧЕЛОВЕКА В БАКУЛОВИРУСНОЙ СИСТЕМЕ ЭКСПРЕССИИ И ОЦЕНКА ЕГО ПРОТИВОВИРУСНОЙ АКТИВНОСТИ

Цель. Получение рекомбинантного белка теплового шока 70 кДа (БТШ70) человека в бакуловирусной системе экспрессии и оценка его противовирусной активности. Материалы и методы. Для получения рекомбинантного БТШ70 использовалась бакуловирусная система экспрессии. Сконструирована плазмида pFastBacHTb-Hsp70, у которой в рамку считывания гена БТШ70 введена последовательность, кодирующая 6 гистидиновых остатков. pFastBacHTb-Hsp70 трансформировали компетентные клетки МАХ Efficiency DH 10 Bac и выделяли рекомбинантную бакмиду Bac-Нsp70. Для получения бакуловируса, экспрессирующего БТШ70, Bac-Нsp70 трансфицировали клетки Sf-9. Выделение и очистку БТШ70 проводили методом аффинной металл-хелатной колоночной хроматографии с использованием ионов Ni 2+. Защитную эффективность рекомбинантного БТШ70 человека оценивали в отношении инфекции ВЭЛ у мышей. Результаты. На основе бакуловирусной системы экспрессии Bac-to-Bac сконструирована рекомбинантная бакмида Bac-Нsp70. При трансфекции Bac-Нsp70 клеток Sf-9 получен бакуловирус, экспрессирующий БТШ70 человека. Культивирование рекомбинантного бакуловируса в клетках Sf-9 и применение метода аффинной металл-хелатной хроматографии позволило выделить очищенный препарат БТШ70. В опытах на мышах, инфицированных вирусом ВЭЛ, выявлен достоверный уровень их защиты от гибели при введении БТШ70 в дозе 15,0 мкг/мышь. Заключение. Использование бакуловирусной системы экспрессии белков, линии клеток насекомых Sf-9 для накопления рекомбинантных бакуловирусов и метода аффинной металл-хелатной хроматографии с применением ионов Ni 2 + позволяет получить высокоочищенный рекомбинантный БТШ70 человека, обладающий выраженной противовирусной активностью.

рекомбинантный белок теплового шока 70 кДа, бакуловирусная система экспрессии, линия клеток SF-9, аффинная металл-хелатная хроматография, экспериментальная инфекция ВЭЛ, мыши