Отправить статью по E-mail ПОЛУЧЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА РЕКОМБИНАНТНЫХ ФРАГМЕНТОВ БЕЛКА CagA HELICOBACTER PYLORI
- Авторы: Климович А.В1, Самойлович М.П2, Суворов А.Н3
-
Учреждения:
- Санкт-Петербургский государственный университет
- Российский научный центр радиологии и хирургических технологий
- Институт экспериментальной медицины, Санкт-Петербург
- Выпуск: Том 87, № 2 (2010)
- Страницы: 74-79
- Раздел: Статьи
- Дата подачи: 09.06.2023
- Дата публикации: 15.04.2010
- URL: https://microbiol.crie.ru/jour/article/view/13465
- ID: 13465
Цитировать
Полный текст
Аннотация
Цель . Создание рекомбинантных фрагментов белка CagA Helicobacter pylori, их очистка и характеристика. Материалы и методы . Для реализации поставленных задач использованы методы молекулярного клонирования, экспрессии рекомбинантных белков в Escherichia coli, аффинной хроматографии, гель-электрофореза и вестерн-блота, а также различные алгоритмы анализа нуклеотидных и аминокислотных последовательностей. Результаты . Получены 4 рекомбинантных фрагмента белка CagA, содержащих N-терминальный гексагистидиновый мотив. Белок rCagAfr.1 (65 кДа) представляет наиболее консервативный N-концевой участок цитотоксина. Фрагмент rCagAfr.2 (44 кДа) соответствует центральному консервативному участку CagA, в то время как rCagAfr.3 (39 кДа) представляет высоко вариабельный C-концевой участок CagA. Наконец, белок rCagAfr.4 (75 кДа) включает в себя последовательности rCagAfr.2 и rCagAfr.3. Анализ последовательностей рекомбинантных фрагментов позволяет предположить, что rCagAfr.2 и rCagAfr.4 являются высоко иммуногенными белками. Хроматографическая очистка рекомбинантных полипептидов позволила достичь высокой степени чистоты (97%) и высокого выхода целевых белков (около 15 мг/л культуры). Заключение. Использование технологии рекомбинантных белков позволило преодолеть проблему получения чистого белка CagA H.pylori, что открывает новые возможности для создания иммунодиагностических тест-систем, направленных на выявление белка CagA или антител против цитотоксина.
Ключевые слова
Полный текст
ПОЛУЧЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА РЕКОМБИНАНТНЫХ ФРАГМЕНТОВ БЕЛКА CagA HELICOBACTER PYLORI×
Об авторах
А. В Климович
Санкт-Петербургский государственный университет
М. П Самойлович
Российский научный центр радиологии и хирургических технологий
А. Н Суворов
Институт экспериментальной медицины, Санкт-Петербург
Список литературы
- Жебрун А.Б. Инфекция Helicobacter pylori. СПб., Феникс, 2006.
- Altschul S.F., Madden T.L., Schaffer A.A. et al. Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs. Nucl. Acids Res. 1997, 25: 3389-3402.
- Berger B., Wilson D.B., Wolf E. et al. Predicting coiled coils by use of pairwise residue correlations. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1995, 92: 8259-8263.
- Berzofsky J.A. Structural basis of antigen recognition by T lymphocytes: Implications for vaccines. J. Clin. Invest. 1988, 82: 1811-1817.
- Hatakeyama M., Higashi H. Helicobacter pylori CagA: a new paradigm for bacterial carcinogenesis. Cancer Sci. 2005, 96: 835-843.
- Malfertheiner P., Megraud F., O’Morain C. et al. Current concepts in the management of Helicobacter pylori infection: the Maastricht III Consensus Report. Gut. 2007, 56: 772-781.
- Maniatis T., Fritsch E.F., Sambrook J. Molecular cloning: a laboratory manual. Cold Spring Harbor, N.Y., 1982.
- Margalit H., Spouge J.L., Cornette J.L. et al. Prediction of immunodominant helper T cell antigenic sites from the primary sequence. J. Immunol. 1987, 138: 2213-2229.
- Megraud F., Lehours P. Helicobacter pylori detection and antimicrobial susceptibility testing. Clin. Microbiol. Rev. 2007, 20: 280-322.
- Olivares D., Gisbert J.P. Factors involved in the pathogenesis of Helicobacter pylori infection. Rev. Esp. Enferm. Dig. 2006, 98: 374-386.
Дополнительные файлы
