ПОЛУЧЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА РЕКОМБИНАНТНЫХ ФРАГМЕНТОВ БЕЛКА CagA HELICOBACTER PYLORI


Цитировать

Полный текст

Аннотация

Цель . Создание рекомбинантных фрагментов белка CagA Helicobacter pylori, их очистка и характеристика. Материалы и методы . Для реализации поставленных задач использованы методы молекулярного клонирования, экспрессии рекомбинантных белков в Escherichia coli, аффинной хроматографии, гель-электрофореза и вестерн-блота, а также различные алгоритмы анализа нуклеотидных и аминокислотных последовательностей. Результаты . Получены 4 рекомбинантных фрагмента белка CagA, содержащих N-терминальный гексагистидиновый мотив. Белок rCagAfr.1 (65 кДа) представляет наиболее консервативный N-концевой участок цитотоксина. Фрагмент rCagAfr.2 (44 кДа) соответствует центральному консервативному участку CagA, в то время как rCagAfr.3 (39 кДа) представляет высоко вариабельный C-концевой участок CagA. Наконец, белок rCagAfr.4 (75 кДа) включает в себя последовательности rCagAfr.2 и rCagAfr.3. Анализ последовательностей рекомбинантных фрагментов позволяет предположить, что rCagAfr.2 и rCagAfr.4 являются высоко иммуногенными белками. Хроматографическая очистка рекомбинантных полипептидов позволила достичь высокой степени чистоты (97%) и высокого выхода целевых белков (около 15 мг/л культуры). Заключение. Использование технологии рекомбинантных белков позволило преодолеть проблему получения чистого белка CagA H.pylori, что открывает новые возможности для создания иммунодиагностических тест-систем, направленных на выявление белка CagA или антител против цитотоксина.

Полный текст

ПОЛУЧЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА РЕКОМБИНАНТНЫХ ФРАГМЕНТОВ БЕЛКА CagA HELICOBACTER PYLORI
×

Об авторах

А. В Климович

Санкт-Петербургский государственный университет

М. П Самойлович

Российский научный центр радиологии и хирургических технологий

А. Н Суворов

Институт экспериментальной медицины, Санкт-Петербург

Список литературы

  1. Жебрун А.Б. Инфекция Helicobacter pylori. СПб., Феникс, 2006.
  2. Altschul S.F., Madden T.L., Schaffer A.A. et al. Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs. Nucl. Acids Res. 1997, 25: 3389-3402.
  3. Berger B., Wilson D.B., Wolf E. et al. Predicting coiled coils by use of pairwise residue correlations. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1995, 92: 8259-8263.
  4. Berzofsky J.A. Structural basis of antigen recognition by T lymphocytes: Implications for vaccines. J. Clin. Invest. 1988, 82: 1811-1817.
  5. Hatakeyama M., Higashi H. Helicobacter pylori CagA: a new paradigm for bacterial carcinogenesis. Cancer Sci. 2005, 96: 835-843.
  6. Malfertheiner P., Megraud F., O’Morain C. et al. Current concepts in the management of Helicobacter pylori infection: the Maastricht III Consensus Report. Gut. 2007, 56: 772-781.
  7. Maniatis T., Fritsch E.F., Sambrook J. Molecular cloning: a laboratory manual. Cold Spring Harbor, N.Y., 1982.
  8. Margalit H., Spouge J.L., Cornette J.L. et al. Prediction of immunodominant helper T cell antigenic sites from the primary sequence. J. Immunol. 1987, 138: 2213-2229.
  9. Megraud F., Lehours P. Helicobacter pylori detection and antimicrobial susceptibility testing. Clin. Microbiol. Rev. 2007, 20: 280-322.
  10. Olivares D., Gisbert J.P. Factors involved in the pathogenesis of Helicobacter pylori infection. Rev. Esp. Enferm. Dig. 2006, 98: 374-386.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© Климович А.В., Самойлович М.П., Суворов А.Н., 2010

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License.
СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: ПИ № ФС77-75442 от 01.04.2019 г.


Данный сайт использует cookie-файлы

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.

О куки-файлах