Колонизационная активность клинических изолятов дрожжевых грибов рода Candida и их антибиотикочувствительность

Полный текст

Введение

Системные кандидозы стали общемировой проблемой, обусловленной высокой смертностью, скоростью распространения инфекции, курсирова­нием резистентных штаммов, особенно в условиях стационара. Полагают, что это связано с развити­ем медицинских технологий и увеличением коли­чества иммунокомпрометированных людей [1][2][3]. Современные исследования направлены на изуче­ние механизмов, лежащих в основе изменения ви­рулентности и адгезивных свойств микроорганиз­мов, демонстрации ими резистентности или проме­жуточной чувствительности в случаях применения рекомендованных концентраций антимикотиков [4][5][6][7][8][9]. Значительное место в исследованиях зани­мают вопросы видового разнообразия и частоты встречаемости разных видов дрожжевых грибов в клинической практике в различных регионах мира, условий, влияющих на устойчивость грибов к антифунгальным препаратам [1][2][10][11].

Задачей исследования было изучение колони­зационной активности и резистентности разных видов дрожжевых грибов рода Candida, выделен­ных в 2014 и 2019 гг. в Москве из клинического материала группы иммунокомпрометированных людей.

Материалы и методы

В работе использовали 75 штаммов дрожже­вых грибов следующих видов: C. albicans, C. parapsilosis, C. glabrata, C. krusei (Pichia kudriavzevii), C. intermedia, C. tropicalis, C. lusitaniae (Clavispora lusitaniae), C. guilliermondii (Meyerozyma guilliermondii). В 2014 г. в Москве выделены 34 штамма (27 штаммов с кожных покровов, 7 — со слизистой ротовой полости) у людей с аллергическими заболе­ваниями в анамнезе (пациенты аллергологтеского центра НИИВС им. ИИ Мечникова). Затем штам­мы были размещены в рабочей коллекции культур дрожжей кафедры биологии почв факультета почво­ведения МГУ им. М.В. Ломоносова. В 2019 г. в ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» выделили 41 штамм со слизистой влагалища пациенток.

Антибиотикочувствительность грибов опре­деляли диско-диффузным методом при помощи расширенного набора дисков с противогрибными препаратами согласно прилагаемой инструкции (НИЦФ, Россия; НИИЭМ им. Пастера, Россия). Использовали агаризованную глюкозо-пептонную среду лабораторного приготовления (агар — 20 г/л, пептон—5 г/л, дрожжевой экстракт—2,5 г/л, глюкоза — 10 г/л). Готовили разведение каждого штамма, соответствующего по плотности 0,5 по

стандарту МакФарланда и содержащего примерно 1,4 х 10⁸ КОЕ/мл. Разведения в объеме 1 мл наноси­ли на поверхность плотной среды в чашках Петри и тщательно растирали шпателем до тех пор, пока поверхность не становилась полностью сухой. Че­рез 15 мин после инокуляции на поверхность пи­тательной среды помещали диски с антибиотиками (амфотерицин В — 40 мкг, нистатин — 80 мкг, клотримазол — 10 мкг, флуконазол — 40 мкг, итраконазол — 10 мкг). Чашки со всеми исследуемыми штаммами параллельно инкубировали при 25°С и 37°С в течение 72 и 24 ч соответственно. Учет ре­зультатов проводили в отраженном свете при помо­щи штангенциркуля. Диаметр зон подавления роста измеряли с точностью до 1 мм. Все штаммы иссле­довали для каждого антибиотика в 3 повторностях.

Результаты

Виды дрожжевых грибов, выделенные в 2014 г., по колонизационной активности можно разделить на 3 группы:

• C. albicans (23,53%);
• C. tropicalis (20,59%), C. guilliermondii (20,59%);
• C. parapsilosis (17,65%), C. glabrata (17,65%).

Виды дрожжевых грибов, выделенные в 2019 г., по частоте выявления можно распределить на 5 групп:

• C. parapsilosis (21,95%);
• C. albicans (17,07%);
• C. tropicalis (12,19%), C. guilliermondii (12,19%);
• C. krusei (9,76%), C. glabrata (9,76%), C. lusitaniae (9,76%);
• C. intermedia (7,32%).

В таблице представлены данные по относи­тельному количеству штаммов дрожжевых грибов, продемонстрировавших резистентность и промежу­точную чувствительность in vitro к антимикотикам.

 

Относительное количество штаммов дрожжевых грибов, продемонстрировавших резистентность и промежуточную чувствительность in vitro к антимикотикам

Relative number of yeast strains demonstrating resistance and intermediate sensitivity in vitro to antimycotics

 

Обсуждение

В исследовании, проведенном с 1992 по 2001 г., сообщалось, что частота выявления с. albicans в качестве доминирующего этиологического агента кандидозов составляла 55,92% [12]. С течением вре­мени во многих странах в качестве инфекционных агентов кандидозов стали выявлять другие виды, ко­торые постепенно заняли ведущее положение, как, например, с. parapsilosis, с. tropicalis, с. glabrata [13]. В исследовании, проведенном в Москве в 2013-2015 гг. в группе больных туберкулезом, были выявлены следующие основные виды: с. albicans (26,9%), С. glabrata (22,07%), с. krusei (16,55%), С. tropicalis (11,72%), с. parapsilosis (6,9%); 15,86% штаммов принадлежали к следующим видам — C. dubliniensis, C. famata, C. guilliermondii, C. kefyr, C. lipolytica, C. lusitaniae, C. norvegensis, C. rugosa, C. zeylanoides (от 1 до 4 штаммов) [14]. Интерес­но, что в нашем исследовании в этот период вре­мени ведущим этиологическим агентом был также с. albicans, но, например, с. guilliermondii занимал второе место по частоте выявления. Однако коли­чество обнаруженных видов грибов было значи­тельно меньше. В нашем случае в течение 5 лет расширился спектр выявляемых видов за счет С. krusei, с. lusitaniae и с. intermedia. В Ростовском регионе в 2019 г. этими видами были обусловлены 26,86% кандидозов. В первую группу видов гри­бов по колонизационной активности переместился С. parapsilosis, а с. albicans занял место во второй группе. Однако разница в частоте выявления меж­ду этими видами в разные периоды времени не­велика — 5,88% в 2014 г. и 4,88% в 2019 г. Виды С. tropicalis и с. guilliermondii в 2019 г. выявлялись значительно реже, практически в 2 раза относи­тельно показателей 2014 г. Очевидно, это связано с появлением в клиническом материале дополнитель­ных трех видов дрожжевых грибов (с. krusei, с. lusitaniae и с. intermedia). Но результатом исследова­ния, требующим особого внимания, является раз­ница в чувствительности к антимикотикам дрожже­вых грибов, выделенных в 2014 и в 2019 гг. Грибы, выделенные в 2014 г., демонстрировали чувстви­тельность in vitro ко всем антифунгальным препара­там. Исключением стали небольшая часть штаммов с. glabrata и с. tropicalis, резистентные к флуконазолу и нистатину соответственно (см. таблицу). Также часть штаммов этих видов продемонстри­ровала промежуточную чувствительность к итраконазолу. В 2019 г., несмотря на меньшую ча­стоту встречаемости в клиническом материале с. albicans, порядка трети штаммов этого вида ока­зались резистентными in vitro к 4 антимикотикам, а к флуконазолу — 71,43% штаммов. Виды кандид, ранее (в 2014 г.) не выявлявшиеся в клинической практике в качестве инвазивных агентов, но вы­деленные в 2019 г., отличаются высокой степенью распространения резистентных штаммов, за ис­ключением с. intermedia (см. таблицу). Некоторые исследователи отмечают, что одной из причин де­монстрации резистентности дрожжевыми гриба­ми, например к флуконазолу, является проведение профилакттеской антифунгальной терапии [2]. Стоит заметить, что устойчивость к азольным антифунгальным препаратам отмечалась у с. glabrata и с. krusei ранее [2][12]. В 2005 г. в Московском регио­не было показано, что порядка 10% штаммов грибов рода Candida, выделенных из клинического матери­ала, демонстрировали резистентность к флуконазолу и итраконазолу [15]. В связи с этим разрабатыва­ются новые антимикотические средства, имеющие другие мишени воздействия, например пептидные или иммунологтеские препараты [3][16].

Таким образом, в настоящее время наиболее высокой степенью колонизационной активности в отношении человеческого организма отличаются C. parapsilosis и C. albicans. При этом происходит значительное изменение видового разнообразия, сопровождающееся выявлением в клиническом материале C. krusei, C. lusitaniae и C. intermedia, причем первые два вида отличаются высоким процентом резистентных штаммов. Среди доминирующих видов дрожжевых грибов также отмечено появление антибиотикоустойчивых штаммов.

Об авторах

Ирина Гавриловна Ахапкина

ФГБНУ Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова

Автор, ответственный за переписку.
Email: isun17@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-5825-2302

Ахапкина Ирина Гавриловна — кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник.

105064, Москва Россия

Анна Марковна Глушакова

ФГБНУ Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова; ФГБОУ ВО Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова

Email: annglushakova@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-4116-4445

Глушакова Анна Марковна — кандидат биологических наук, научный сотрудник НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова; младший научный сотрудник каф. биологии почв факультета почвоведения МГУ им. М.В. Ломоносова.

105064, 119991, Москва

Россия

Евгения Николаевна Родионова

ФГБНУ Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова

Email: fake@neicon.ru
ORCID iD: 0000-0002-2025-2630

Родионова Евгения Николаевна — лаборант.

105064, Москва

Россия

Алексей Владимирович Качалкин

ФГБОУ ВО Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова; ФГБУН Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина, РАН

Email: fake@neicon.ru
ORCID iD: 0000-0002-4494-2468

Россия

Список литературы

Дополнительные файлы