Отправить статью по E-mail Получение и характеристика моноклональных антител к G-белку респираторно-синцитиального вируса
- Авторы: Демидова Н.А.1, Климова Р.Р.1, Кущ А.А.1, Леснова Е.И.1, Масалова О.В.1, Дорофеева А.Д.2, Никонова А.А.2, Федорова Н.Е.1, Зверев В.В.2,3
-
Учреждения:
- ФГБУ «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России
- ФГБНУ «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток имени И.И. Мечникова»
- ФГАОУ ВО «Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова» Минздрава России (Сеченовский Университет)
- Выпуск: Том 97, № 1 (2020)
- Страницы: 7-14
- Раздел: ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
- Дата подачи: 05.03.2020
- Дата принятия к публикации: 05.03.2020
- Дата публикации: 05.03.2020
- URL: https://microbiol.crie.ru/jour/article/view/516
- DOI: https://doi.org/10.36233/0372-9311-2020-97-1-7-14
- ID: 516
Цитировать
Аннотация
Цель работы состояла в получении гибридом, продуцирующих моноклональные антитела (МКА) к G-белку респираторно-синцитиального вируса (РСВ), и в изучении их иммунологических характеристик и вируснейтрализующей активности.
Материал и методы. Мышиные МКА получали с помощью гибридомной технологии. Свойства МКА изучали методами иммуноферментного анализа (ИФА), иммунофлюоресцентного окрашивания (ИФл) зараженных клеток культуры, а также в реакции биологической нейтрализации in vitro (РБН). Взаимное расположение эпитопов, выявляемых МКА на G-белке, определяли с помощью теста аддитивности в ИФА.
Результаты. Гибридизация спленоцитов с клетками миеломы Sp2/0 и первичный скрининг показали, что 75 гибридом продуцируют МКА, взаимодействующие с очищенным вирусом, 17 из которых реагируют также и с рекомбинантным G-белком в ИФА. В РБН 4 гибридомы подавляли РСВ-инфекцию in vitro более чем на 50%. Клонирование этих гибридом позволило выявить 4 моноклона, продуцирующих наиболее активные МКА. МКА 1С11 принадлежали к IgG2a, 3 других (5D4, 5G11 и 6H4) — к IgM. 3 МКА IgM активно реагировали как с РСВ А2 и Long, так и с G-белком, МКА 1С11 были менее активны со всеми антигенами. Все МКА подавляли РСВ-инфекцию, причем МКА 5D4 — практически полностью (98%). ИФл-анализ показал, что все МКА выявляли G-белок РСВ в цитоплазме клеток культуры, наибольшее количество зараженных клеток детектировали с помощью МКА 5D4 (80%). Полученные МКА направлены к двум неперекрывающимся эпитопам на G-белке РСВ.
Заключение. Полученные МКА могут использоваться для обнаружения РСВ в клиническом материале методами ИФА и ИФл. Активность в РБН создает предпосылки для получения на основе МКА гуманизированных рекомбинантных антител и возможность их использования для терапии РСВ-инфекции.
Полный текст
Введение
Острые респираторные инфекции занимают ведущее место в структуре общей заболеваемости населения России. Детская заболеваемость превышает заболеваемость взрослых в среднем в 3,5-4 раза, и за последнее время наблюдается повышение респираторной заболеваемости у детей. Так, с 2004 по 2016 г. заболеваемость острыми респираторными инфекциями увеличилась на 33,4% [1].
Среди возбудителей инфекций особое место занимает респираторно-синцитиальный вирус (РСВ), который является главной причиной инфекций нижних отделов респираторного тракта у детей раннего возраста [2]. К группам риска тяжелого течения РСВ-инфекции относятся недоношенные дети с очень низкой и экстремально низкой массой тела при рождении, люди старшего возраста (старше 65 лет), а также лица с сердечно-сосудистыми заболеваниями и сниженным иммунитетом. Согласно данным Всемирной организации здравоохранения, РСВ ежегодно инфицируются 64 млн человек, из них 160 тыс. человек умирают [3].
Единственным разрешенным средством против РСВ-инфекции в настоящее время является препарат на основе гуманизированных моноклональных антител (МКА) к F-белку РСВ — пали- визумаб. Применение паливизумаба оказывает профилактическое действие и позволяет снизить тяжесть течения заболевания. Эффективность паливизумаба у недоношенных детей с бронхолегочной дисплазией была подтверждена отечественными авторами в результате многоцентрового исследования: у детей, которые относились к группе высокого риска тяжелого течения РСВ-инфекции по причине недоношенности, зарегистрировано снижение частоты госпитализаций после 3 инъекций паливизумаба до 0,3% [4]. Однако применение препарата не предотвращает повторного заболевания, эффективность препарата значительно ниже при лечении доношенных новорожденных и более старших детей, а более аффинные антитела к F-белку (мотавизумаб) вызывали аллергические реакции [5]. Кроме того, высокая стоимость препарата препятствует его широкому использованию. Одним из недостатков препаратов на основе антител к F-белку является появление резистентных штаммов [6].
Для преодоления перечисленных недостатков проводятся исследования, направленные как на усовершенствование средств, специфичных к F-белку, так и на поиск новых подходов, основанных на использовании в качестве мишени других белков РСВ: нуклеопротеина (N), полимеразы (L), белка оболочки G РСВ [7]. В качестве наиболее перспективной мишени рассматривается G-белок — один из двух белков РСВ (наряду с F-белком), индуцирующих нейтрализующие антитела. Опыты на животных показали, что антитела к G-белку оказывают терапевтическое действие, причем в условиях, когда антитела к F-белку неэффективны [8].
Цель настоящей работы состояла в получении МКА, специфически взаимодействующих с G-белком РСВ, и в изучении их иммунологических свойств и вируснейтрализующей активности.
Материал и методы
Использовали РСВ двух эталонных штаммов (A2 и Long, подгруппа А) из коллекции ФГБНУ НИИВС им. И.И. Мечникова. РСВ А2 размножали в перевиваемой клеточной культуре HEp-2 (человек, эпидермоидная карцинома гортани), в среде RPMI, содержащей 5% эмбриональной телячьей сыворотки, глутамин и гентамицин (ООО «ПанЭко», Россия), при 37оС в атмосфере 5% CO2. РСВ Long культивировали с использованием перевиваемой культуры клеток МА-104 (макака резус, эмбриональная почка) в среде Игла МЕМ.
Вирус из культуральной жидкости (КЖ) от зараженных клеток концентрировали и очищали [9]. Для титрования вирусов использовали клетки МА- 104, т.к. на них хорошо проявляется классическое цитопатогенное действие РСВ (образование синцитиев), которое можно учитывать при контроле монослоя с использованием микроскопа.
Титр вирусов рассчитывали по формуле Спирмена-Кербера. Титр РСВ А2 после концентрирования составил 9 Ig тканевой 50% цитопатической дозы в 1 мл (ТЦД50/мл), РСВ Long — 7 lg ТЦД50/мл. Концентрацию белка в вирусном препарате определяли на микроспектрофотометре «NanoDrop» («Thermo Scientific», США) при длине волны 280 нм против 20% сахарозы или с помощью реагента Брэдфорда («Sigma», США) в соответствии с инструкцией.
Мышей линии BALB/c (самки массой 18-20 г), полученных из питомника «Пущино» (Московская обл.), иммунизировали внутрибрюшинно 3 раза с 2-недельным интервалом: 1-е введение — РСВ с полным адъювантом Фрейнда, следующие — с неполным адъювантом Фрейнда («Sigma», США). Доза РСВ А2 при каждой инъекции составляла 100 мкг/мышь. Исследования выполняли согласно Правилам проведения работ с использованием экспериментальных животных1.
Миеломные и гибридомные клетки культивировали в среде RPMI-1640, содержащей 4,5 г/л глюкозы, 3 мМ глутамина, 60 мкг/мл гентамицина (ООО «ПанЭко», Россия) с добавлением 20% эмбриональной телячьей сыворотки («Gibco», «Invitrogene», США) и 0,2 ЕД/мл инсулина («Lilly», Франция). Культивирование проводили в СО2-инкубаторе при 37°С в атмосфере 5% СО2. Для слияния использовали клетки мышиной миеломы Sp2/0, не продуцирующие собственные иммуноглобулины.
Суспензию спленоцитов мыши смешивали с клетками Sp2/0 в соотношении 2:1 и добавляли раствор PEG/DMSOSolution («Hybri-Max™», «Sigma», США). После слияния клетки ресу- спендировали в селективной среде гипоксантин-аминоптерин-тимидин («Hybri-Max™», «Sigma», США), вносили в 96-луночные панели и инкубировали при 37°С в атмосфере 5% СО2. Клетки культивировали в селективной среде гипоксантин-аминоптерин-тимидин в течение 14 дней после слияния. КЖ из лунок, содержащих гибридные клетки, тестировали на наличие антител к РСВ и G-белку в иммуноферментном анализе (ИФА).
ИФА антител к РСВ в сыворотках крови мышей, в КЖ от гибридных клеток, а также МКА проводили в непрямом варианте: вносили по 50 мкл РСВ в концентрации 10 мкг/мл в 0,1 М фосфатно-солевом буфере, pH 7,2 в лунки 96-луночных планшетов MAXISORP NUNC-IMMUNO PLATE («Thermo Scientific», США) на 24 ч при 4°С. После отмывки фосфатно-солевым буфером с 0,1% раствором Твин-20 в лунки вносили сыворотки мышей в серийных разведениях или КЖ из лунок с гибридомами и инкубировали в течение 1 ч при 37оС. После отмывки добавляли козьи антитела к иммуноглобулинам мыши, меченные пероксидазой («Сорбент», Россия), в разведении 1:500. В качестве субстрата использовали тетраметилбензидина гидрохлорид («US Biomedical», США). Для торможения реакции добавляли 1N серную кислоту. Оптическую плотность (ОП) измеряли на планшетном иммуноферментном анализаторе «Sunrise» («Tecan», Швейцария) при длине волны 450 нм, ре- ференс-волна 620 нм. За титр антител принимали обратное разведение, ОП которого в 2 раза превосходила ОП отрицательных контролей — преиммунных мышиных сывороток или КЖ из лунок, не содержащих гибридные клетки.
Для анализа G-белка РСВ в лунки 96-луноч- ных планшетов MAXISORP NUNC-IMMUNO PLATE («Thermo Scientific», США) вносили рекомбинантный G-белок («Sino Biological», Республика Корея) РСВ А2 в концентрации 0,5 мкг/мл в фосфатно-солевом буфере и инкубировали в течение 18 ч при 4°С. Затем вносили КЖ из лунок с гибридными клетками или МКА и выполняли ИФА.
Тест аддитивности МКА проводили согласно [10] и использовали для выяснения вопроса о том, распознают ли МКА различающиеся или близкие эпитопы. Панели сенсибилизировали препаратом концентрированного очищенного РСВ А2, как описано выше. Каждую пару МКА в насыщающих антиген концентрациях, подобранных в предварительных экспериментах, добавляли в отдельные лунки или одновременно в одну лунку панели. Затем определяли количество связанных с вирусом МКА в непрямом ИФА. Результаты выражали как индекс аддитивности (ИА), который сравнивает ОП, полученные в двух вариантах (для одного МКА и смеси) при стандартных условиях реакции. ИА вычисляли для каждой пары МКА по формуле:
ИА = {[2 х A1+2/(A1 + A2)] - 1} χ 100%, где Al и A2 — ОП МКА, нанесенных отдельно, A1+2 — ОП смеси МКА. ИА будет стремиться к нулю, если оба МКА распознают один и тот же эпитоп, и стремиться к 100%, если 2 эпитопа топографически не связаны.
Для проведения реакции биологической нейтрализации in vitro КЖ от моноклонов инкубировали с РСВ А2 (инфекционная множественность 104 ТЦД50/мл) в течение 2 ч при 37оС в присутствии 5% СО2 и затем вносили на монослой клеток МА-104. Через 1 ч обработанные клетки промывали средой без сыворотки и вносили среду поддержки с 2% эмбриональной телячьей сывороткой, содержащую двойную концентрацию глутамина. Цитопатогенное действие вируса на клетки оценивали через 72-96 ч, когда оно развивалось в инфицированной, но не обработанной культуре.
В зараженных клетках проводили непрямой иммунофлюоресцентный анализ (ИФл-анализ). Клетки МА-104 в концентрации 4 χ 104 клеток/мл вносили в лунки 24-луночных панелей с покровными стеклами, на следующий день заражали РСВ с инфекционной множественностью 104 ТЦД50/мл.
Через 4 сут после заражения клетки фиксировали метанолом 20 мин при -20оС. На фиксированные препараты наносили МКА и инкубировали 1 ч при 37оС. Затем промывали фосфатно-солевым буфером и наслаивали антимышиную сыворотку, меченную ФИТЦ («Dako», Дания). Клетки докрашивали Evans blue («Biochem», Франция). Окрашивание наблюдали с помощью флюоресцентного микроскопа «AxioScope A1» («Carl Zeiss», Германия) при длине волны 520-560 нм. Результаты оценивали по количеству окрашенных клеток и выражали в условных обозначениях: +++ соответствовали количеству окрашенных клеток >50%; ++ — 10-50%; + — единичные окрашенные клетки.
Субтипы МКА и типы легких цепей определяли методом ИФА с помощью набора «Pierce Rapid ELISA Mouse mAb Isotiping Kit» («Thermo Scientific», США) в соответствии с инструкцией: КЖ от МКА вносили в лунки планшета, предварительно сорбированного антителами к иммуноглобулинам мыши классов G (IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3), IgA и IgM, а также к субтипам легкой цепи каппа и лямбда. После инкубации добавляли поливалентный конъюгат к IgG+IgA+IgM, меченный пероксидазой, затем субстрат тетраметилбензидин гидрохлорид. Принадлежность МКА определяли по максимальному сигналу с определенным субтипом иммуноглобулина и типом легкой цепи.
Результаты
Анализ иммунного ответа 5 мышей на введение очищенного РСВ А2 показал, что минимальная активность антител к РСВ в ИФА соответствовала титру 4х10-5, максимальная — 7,8х10-5. МКА в сыворотках крови всех мышей нейтрализовали инфекционную активность РСВ в титрах от 1:40 до 1:160. Для опытов по гибридизации клеток были выбраны 2 мыши с максимальной активностью в обеих реакциях. В результате экспериментов по слиянию спле- ноцитов отобранных мышей с клетками миеломы было получено 236 гибридных культур, устойчивых к селективной среде гипоксантин-аминоптерин-тимидин. Через 7-14 дней был проведен анализ МКА в КЖ в ИФА, который показал присутствие МКА, взаимодействующих с РСВ А2 в 75 КЖ (32%) от гибридных клеток. Анализ КЖ от гибридных культур в ИФА с G-белком показал, что 17 (23%) из 75 клонов реагировали с G-белком (рис. 1, а). КЖ от данных гибридом были изучены в реакции биологической нейтрализации in vitro (рис. 1, б).
Рис. 1. Активность взаимодействия антител, продуцируемых гибридными культурами, с цельным РСВ и с G-белком РСВ. а — взаимодействие антител в КЖ с цельным вирусом РСВ А2 и G-белком в ИФА; б — вируснейтрализующая активность КЖ от гибридом, продуцирующих антитела к G-белку РСВ.
Fig. 1. The activity of the interaction of antibodies produced by hybrid cultures, with whole RSV and with RSV G protein. a — interaction of antibodies in supernatants with whole RSV A2 virus and G protein in ELISA; b — virus-neutralizing activity of supernatants from hybridomas producing antibodies to the G protein of RSV.
Для последующего клонирования были отобраны 4 гибридные культуры (2B10, 3E8, 3F5 и 4G6), взаимодействующие с G-белком и нейтрализующие РСВ-инфекцию более чем на 50%. В результате опытов по клонированию были отобраны по одному моноклону от каждой культуры — 4 гибридомы, продуцирующие МКА к G-белку. Иммунологические, иммуноцитохимические и биологические свойства МКА представлены в табл. 1 и на рис. 2.
Таблица 1. Свойства МКА к G-белку РСВ
Table 1. The properties of the Mabs to the RSV G protein
МКА Mabs | Изотип Ig, тип легкой цепи Ig isotype, light chain type | ИФА: ОП450 с КЖ* ELISA: optical density with supernatants | Реакция биологической нейтрализации in vitro, % ингибирования Reaction of neutralization in vitro, % inhibition | ИФл-анализ** Immunofluor escence assay** | ||
|---|---|---|---|---|---|---|
РСВ А2 | РСВ Long | G-белок G protein | ||||
1С11 | Ig2a, κ | 1,48 | 0,34 | 0,31 | 60 | + |
5D4 | IgM, κ | 2,50 | 2,39 | 2,02 | 98 | +++ |
5G11 | IgM, κ | 2,30 | 2,58 | 2,36 | 60 | ++ |
6H4 | IgM, κ | 2,38 | 2,46 | 2,31 | 50 | + |
Примечание. *Показатели ОП при анализе МКА в КЖ от гибридом; ОП отрицательных контролей = 0,03; **ИФл — сравнительная оценка эффективности обнаружения инфицированных клеток, зараженных РСВ А2 в реакции иммунофлюоресценции.
Note. *Optical density indicators in the analysis of Mabs in supernatants from hybridomas; Optical density of negative controls = 0.03; "Immunofluorescence assay — a comparative evaluation of the detection efficiency of infected cells infected with RSV A2 in the immunofluorescence reaction.
Рис. 2. ИФл-анализ взаимодействия МКА с клетками МА-104, инфицированными РСВ А2. а — МКА к вирусу гепатита, отрицательный контроль; б — МКА 5D4, количество окрашенных клеток 80% (+++); в — МКА 5G11, количество окрашенных клеток 20% (++); г — МКА 6H4, единичные окрашенные клетки (+); зеленая окраска — ФИТЦ, красная — докраска Evans blue. Рисунок продублирован на обложке журнала.
Fig. 2. IF analysis of the interaction of Mabs with MA-104 cells infected with RSV A2. a — Mabs for hepatitis virus, negative control; b — Mabs 5D4, the number of stained cells 80% (+++); c — Mabs 5G11, the number of stained cells 20% (++); d — Mabs 6H4, single stained cells (+); green color — FITC, red — Evans blue. The picture is duplicated on the cover of the magazine.
Определены субтипы моноклональных иммуноглобулинов. Результаты изотипирования МКА показали, что МКА 1С11 принадлежали к изотипу IgG2a, 3 других — к классу IgM. Во всех моноклональных Ig был каппа-тип легкой цепи.
Результаты ИФА показали, что МКА 5D4, 5G11 и 6H4 одинаково интенсивно с ОП > 2,0 реагировали как со штаммом РСВ А2, к которому были получены, так и со штаммом РСВ Long и с G-белком РСВ. МКА 1С11 достаточно активно взаимодействовали с РСВ А2, но слабее — с РСВ Long и с G-белком. Важно отметить, что 3 из 4 МКА проявили значительную вируснейтрализующую активность, подавляя развитие РСВ-инфекции на 60-98%.
Все полученные клоны выявляли РСВ в зараженных клетках, но с разной активностью (табл. 1, рис. 2). ИФл-анализ показал, что МКА выявляли G-белок РСВ в цитоплазме клеток, наибольшее количество зараженных клеток детектировали с помощью МКА 5D4 и 5G11.
Топографические связи между эпитопами определяли в тесте аддитивности (табл. 2). Метод требует использования антител в специально подобранных концентрациях, полностью насыщающих антиген. Низкие ИА получены для всех МКА при сочетании «самих с собой» (от 1,6 до 4,2%), что свидетельствует об адекватных условиях проведения реакции. Для пар МКА 5D4-6H4, 5D4-5G11 и 6H4-5G11 ИА составил 8,3-12,1%, что говорит о перекрывающихся или близко расположенных на G-белке эпитопах, распознаваемых данными МКА. ИА для пар МКА 1С11 с остальными МКА были >40%, следовательно, эпитоп, связывающийся с МКА 1С11, расположен в отдалении от эпитопов для МКА 5D4, 6H4 и 5G11.
Таблица 2. Индексы аддитивности для МКА к G-белку РСВ (M ± т, %)
Table 2. Additivity index for Mabs to G-protein of RSV (M ± m, %)
МКА | 5D4 | 6H4 | 5G11 | 1C11 |
|---|---|---|---|---|
5D4 | 1,6 ± 0,3 | 8,3 ± 2,8 | 11,3 ± 0,5 | 41,6 ± 3,1 |
6H4 | - | 2,1 ± 0,6 | 12,1 ± 0,8 | 40,7 ± 4,2 |
5G11 | - | - | 3,5 ± 0,7 | 42,4 ± 2,6 |
1C11 | - | - | - | 4,2 ± 3,1 |
Обсуждение
В настоящей работе получены 4 гибридомы, продуцирующие МКА к G-белку РСВ. G-белок более изменчив по сравнению с F-белком, который зачастую используется для получения препаратов для профилактики РСВ-инфекции, в то же время его введение оказывает протективное действие. В последнее время G-белок привлекает внимание исследователей благодаря ряду свойств, которые открывают перспективу использования его для разработки терапевтических препаратов и вакцин. Белок содержит небольшой, но высококонсервативный центральный домен (CCD) [7] и проявляет иммуногенность при введении здоровым людям [11]. В ССD G-белка обнаружен хемокиновый мотив CX3C, который взаимодействует с хемокиновым рецептором CX3CR1 на клетках хозяина, что приводит к нарушениям противовирусного ответа [12]. Установлено, что МКА, направленные на ССD.
оказывают противовирусное действие при РСВ-инфекции на модели зараженных мышей, блокируя развитие заболевания и улучшая иммунный ответ [13]. G-белок взаимодействует с эпителиальными клетками респираторного тракта пациентов, индуцируя инфекционный процесс. Показано, что антитела к G-белку эффективно подавляют воспаление [14]. Дальнейшее изучение антигенной структуры и функций G-белка необходимо для определения новой стратегии борьбы с РСВ-инфекцией [15].
МКА, полученные в настоящей работе, связываются с двумя эпитопами G-белка, при взаимодействии проявляют аддитивный эффект, выявляют вирусный антиген в зараженных клетках культуры и могут использоваться для обнаружения РСВ в клиническом материале методами иммунофлюоресценции, иммунопероксидазного окрашивания и ИФА. Вируснейтрализующая активность МКА создает предпосылки для получения на их основе гуманизированных рекомбинантных антител. Дальнейшие исследования покажут возможность и эффективность применения полученных МКА к G-белку в сочетании с МКА к F-белку РСВ для профилактики и терапии РСВ-инфекции.
Об авторах
Н. А. Демидова
ФГБУ «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России
Email: ailande@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0003-1961-9789
Демидова Наталья Андреевна — младший научный сотрудник
123098, Москва
РоссияР. Р. Климова
ФГБУ «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России
Email: regi.k@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-4147-8444
Климова Регина Рафаиловна — кандидат биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории клеточной инженерии Института вирусологии им. Д.И. Ивановского
123098, Москва
РоссияА. А. Кущ
ФГБУ «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России
Автор, ответственный за переписку.
Email: vitallku@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-3396-5533
Кущ Алла Александровна — доктор биологических наук, профессор, руководитель отдела молекулярной вирусологии, заведующий лабораторией клеточной инженерии Института вирусологии им. Д.И. Ивановского
123098, Москва
РоссияЕ. И. Леснова
ФГБУ «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России
Email: wolf252006@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-2801-6843
Леснова Екатерина Ивановна — научный сотрудник лаборатории клеточной инженерии Института вирусологии им. Д.И. Ивановского
123098, Москва
РоссияО. В. Масалова
ФГБУ «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России
Email: ol.mas@mail.ru
ORCID iD: 0000-0001-5571-5669
Масалова Ольга Владимировна — доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник лаборатории клеточной инженерии Института вирусологии им. Д.И. Ивановского
123098, Москва
РоссияА. Д. Дорофеева
ФГБНУ «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток имени И.И. Мечникова»
Email: d0r0feeva@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-2501-2847
Дорофеева Анастасия Дмитриевна — младший научный сотрудник ФГБНУ «НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова»
105064, Москва
РоссияА. А. Никонова
ФГБНУ «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток имени И.И. Мечникова»
Email: sana80@list.ru
ORCID iD: 0000-0001-9610-0935
Никонова Александра Александровна — кандидат биологических наук, заведующий лабораторией молекулярной биотехнологии отдела вирусологии
105064, Москва
РоссияН. Е. Федорова
ФГБУ «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России
Email: ninani@mail.ru
ORCID iD: 0000-0001-8466-7993
Федорова Наталья Евгеньевна — кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник лаборатории клеточной инженерии Института вирусологии им. Д.И. Ивановского
123098, Москва
РоссияВ. В. Зверев
ФГБНУ «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток имени И.И. Мечникова»;ФГАОУ ВО «Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова» Минздрава России (Сеченовский Университет)
Email: vitalyzverev@outlook.com
ORCID iD: 0000-0002-0017-1892
Зверев Виталий Васильевич — доктор биологических наук, профессор, акад. РАН, научный руководитель ФГБНУ «НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова»; заведующий кафедрой микробиологии, вирусологии, иммунологии, ФГАОУ ВО «Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова» Минздрава России (Сеченовский Университет)
105064, Москва,
127994, Москва
РоссияСписок литературы
- Заплатников А.Л., Гирина А.А., Бурцева Е.И., Свинцицкая В.И., Казакова С.А., Леписева И.В. и др. Современные возможности иммунопрофилактики вирусных и бактериальных респираторных инфекций у детей. Русский медицинский журнал. Медицинское обозрение. 2018; 2(1-2): 93-8.
- Tripp R.A., Power U.F., Openshaw P.J.M., Kauvar L.M. Respiratory syncytial virus: targeting the G protein provides a new approach for an old problem. J. Virol. 2018; 92(3): e01302-17. DOI: http://doi.org/10.1128/JVI.01302-17
- Pebody R., Moyes J., Hirve S., Campbell H., Jackson S., Moen A., et al. Approaches to use the WHO respiratory syncytial virus surveillance platform to estimate disease burden. Influenza Other Respir. Viruses. Available at: http://onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1111/irv.12667
- Чубарова А.И., Давыдова И.В., Виноградова И.В., Дегтярева Е.А., Кешишян Е.С., Сафина А.И. и др. Эффективность паливизумаба в снижении частоты госпитализации детей с РСВ инфекцией в группах высокого риска: проспективное наблюдательное многоцентровое исследование. Вестник Российской академии медицинских наук. 2017; 72(4): 282-9. DOI: http://doi.org/10.15690/vramn855
- O’Brien K.L., Chandran A., Weatherholtz R., Jafri H.S., Griffin M.P., Bellamy T., et al. Efficacy of mot a vizumab for the prevention of respiratory syncytial virus disease in healthy Native American infants: a phase 3 randomised double-blind placebocontrolled trial. Lancet Infect. Dis. 2015; 15(2): 1398-408. DOI: http://doi.org/10.1016/S1473-3099(15)00247-9
- Bates J.T., Keefer C.J., Slaughter J.C., Kulp D.W., Schief W.R., Crowe J.E. Escape from neutral ization by the respiratory syncytial virus-specific neutralizing monoclonal antibody palivizumab is driven by changes in on-rate of binding to the fusion protein. Virology. 2014; 454-455: 139-44. DOI: http://doi.org/10.1016/j.virol.2014.02.010
- Jorquera P.A., Tripp R.A. Respiratory syncytial virus: prospects for new and emerging therapeutics. Expert. Rev. Respir. Med. 2017; 11(8): 609-15. DOI: http://doi.org/10.1080/17476348.2017.1338567
- Boyoglu-Barnum S., Todd S.O., Chirkova T., Barnum T.R., Gaston K.A., Haynes L.M., et al. An anti-G protein monoclonal antibody treats RSV disease more effectively than an anti-F monoclonal antibody in BALB/c mice. Virology. 2015; 483: 117-25. DOI: http://doi.org/10.1016/j.virol.2015.02.035
- Ueba O. Respiratory syncytial virus. I. Concentration and purification of the infectious virus. Acta. Med. Okayama. 1978; 32(4): 265-72.
- Xiang K., Cheng Y., Zhou M., Sun L., Ji Y., Wang Y., et al. Production of monoclonal antibody against EP0 protein of pseudorabies virus and determination of its recognized epitope. Monoclon. Antib. Immunodiagn. Immunother. 2014; 33(6): 409-13. DOI: http://doi.org/10.1089/mab.2014.0046
- Power U.F., Nguyen T.N., Rietveld E., de Swart R.L., Groen J., Osterhaus A.D., et al. Safety and immunogenicity of a novel recombinant subunit respiratory syncytial virus vaccine (BBG2Na) in healthy young adults. J. Infect. Dis. 2001; 184(11): 1456-60. DOI: http://doi.org/10.1086/324426
- Haynes L.M., Jones L.P., Barskey A., Anderson L.J., Tripp R.A. Enhanced disease and pulmonary eosinophilia associated with formalin-inactivated respiratory syncytial virus vaccination are linked to G glycoprotein CX3C-CX3CR1 interaction and expression of substance P. J. Virol. 2003; 77(18): 9831-44. DOI: http://doi.org/10.1128/JVI.77.18.9831-9844.2003
- Boyoglu-Barnum S., Todd S.O., Meng J., Barnum T.R., Chirkova T., Haynes L.M., et al. Mutating the CX3C motif in the G protein should make a live respiratory syncytial virus vaccine safer and more effective. J. Virol. 2017; 91(10): e02059-16. DOI: http://doi.org/10.1128/JVI.02059-16
- Cortjens B., Yasuda E., Yu X., Wagner K., Claassen Y.B., Bakker A.Q., et al. Broadly reactive anti-resp i ra tory syncytial virus G antibodies from exposed individuals effectively inhibit infection of primary airway epithelial cells. J. Virol. 2017; 91(10): e02357-16. DOI: http://doi.org/10.1128/JVI.02357-16
- Boyoglu-Barnum S., Chirkova T., Anderson L.J. Biology of infection and disease pathogenesis to guide RSV vaccine development. Front. Immunol. 2019; 10: 1675. DOI: http://doi.org/10.3389/fimmu.2019.01675
Дополнительные файлы
