THE EFFECTIVENESS OF IMMUNOVAC VP-4 FOR IMMUNOLOGICAL PARAMETERS IN FREQUENTLY AND LONG-TERM ILL CHILDREN

Full Text

ВВЕДЕНИЕ
Одной из актуальных проблем клинической иммунологии является коррекция им-
мунологических нарушений у длительно и часто болеющих детей (ЧДБД) [5].Частота
эпизодов острых респираторных инфекций у ЧДБД (6-8 и более раз в год) объясняет-
ся физиологической незрелостью иммунной системы — количественным и функцио-
нальным дефицитом Т-лимфоцитов, изменением синтеза цитокинов, временным де-
фицитом IgG, частичным дефицитом IgA, дефицитом гранулоцитарного хемотаксиса
и антимикробной активности и др. [1, 3]. Чтобы скорректировать имеющиеся у ЧДБД
иммунные нарушения, применяется широкая группа иммунотропных препаратов.
Среди них важное место занимают иммуномодуляторы бактериального происхожде-
ния, содержащие в своем составе лизаты и компоненты клеточных структур основных
условно патогенных микроорганизмов, являющихся возбудителями респираторных
инфекций. Клинический эффект бактериальных иммуномодуляторов направлен на
снижение числа и тяжести обострений респираторных инфекций [9]. Отличительной
особенностью бактериальных иммуномодуляторов является их способность обладать
одновременно иммуномодулирующим и вакцинальным эффектами. В эту группу от-
носятся импортные препараты БронхоВаксом, Бронхомунал, ИРС-19, Рибомунил,
Имудон, Исмиген, Субреум (капсулированный лизат 18 штаммов Escherichia coli) и др.
Все эти вакцины содержат порядка 7 — 19 компонентов, что предполагает обеспечение
ими протективного эффекта путем формирования антител многих специфичностей.
Хотя они и не вызывают длительного и стойкого протективного иммунитета, но все
же стимулируют специфический антимикробный иммунитет, повышают активность
макрофагов, содержание лизоцима и секреторного IgА [7, 8] .
Бактериальные иммуномодуляторы делятся на две группы : системного действия
(БронхоВаксом, Бронхомунал, Ликопид, Исмиген) и преимущественно топическо-
го действия (ИРС-19, Имудон, Ликопид). Одним из представителей бактериальных
вакцин отечественного производства является Иммуновак ВП-4, созданная в НИИ
вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова. Иммуновак-ВП-4 включает в себя лизаты
четырех условно патогенных микроорганизмов — Staphylococcus aureus, Klebsiella
pneumoniae, Proteus vulgaris, Escherichia coli. Расширение спектра действия препара-
та в отношении различных этиологически значимых микроорганизмов в этом случае
достигалось не за счет увеличения числа компонентов, а за счет подбора антигенов,
обеспечивающих широкий спектр перекрестных реакций с наиболее часто встре-
чающимися патогенными представителями микрофлоры бронхолегочного тракта и
обладающих иммуномодулирующими свойствами.
ВП-4 индуцирует продукцию специфических антител к микробным компонентам
комплекса, активирует гранулоцитарно-макофагальное звено иммунитета, способс-
твует увеличению численности Т-лимфоцитов, стимулирует синтез IgG, IgA, slgA,
повышает уровень интерлейкина-2 и интерферона; применяется для лечения воспа-
лительных и обструктивных заболеваний органов дыхания, включая детей от 3 лет [2].
Высокий терапевтический эффект Иммуновак ВП-4 обусловлен активацией врожден-
ного иммунитета через оптимальное сочетание природных агонистов Tol-like рецепто-
ров в виде липополисахаридов, пептидогликанов, тейхоевых кислот, белковых антиге-
нов клеточных стенок)[4]. С целью повышения эффективности терапии Иммуновак
ВП-4 и выбора критерия эффективности ее применения необходимо оценить специ-
фический иммунный ответ к бактериальным антигенам, входящим в состав вакцины,
как в сыворотке, так и в слюне и назальном секрете. Это особенно важно для вакцин,
применяющихся местно — перорально и интраназально, так как в этом случае в про-
цесс формирования поствакцинального ответа активно вовлекаются факторы местной
иммунологической системы. Так как секреторная иммунологическая система слизис-
тых является одним из важнейших звеньев иммунной системы организма, наравне с
компонентами системного иммунитета, обеспечивающая защиту от инфекционных
агентов, факторы местного иммунитета играют значительную роль в патогенезе и
протекании многих заболеваний, особенно респираторного тракта. При этом уровень
специфических иммуноглобулинов в слюне и назальном секрете может служить вы-
сокоинформативным диагностическим и прогностическим признаком. Опубликовано
большое количество статей, посвященных различным аспектам влияния Иммуновак
ВП-4 на параметры клеточного и гуморального иммунитета, однако влияние поли-
компонентной вакцины на мукозальный иммунитет изучено недостаточно. Исходя
из этого, цель работы — изучение динамики показателей мукозального иммунитета
(специфических антител различных изотипов к антигенам S.aureus и K.pneumoniae) в
сыворотке, слюне и назальном секрете и IgG, IgA, sIgA в слюне у больных ЧДБД при
назально-оральном введении поликомпонентной вакцины Иммуновак ВП-4 [6].
МАТ Е Р И А Л Ы И М Е Т О Д Ы
Нами было обследована группа, состоящая из 21 пациента, отнесенных к кате-
гории часто и длительно болеющих детей, обратившихся в консультативно-поли-
клиническое отделение НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова в возрасте от
5 до 11 лет. Из исследования исключались больные с наличием аллергопатологии,
неврологических отклонений. Поликомпонентная вакцина вводилась детям со-
гласно инструкции по применению препарата назально-оральным способом. Курс
включал в себя три назальных и 6-8 пероральных введений препарата с интервалом
3-4 дня. Иммунологическое обследование проводилось до введения вакцины и через
0,5-1,5 месяца после окончания терапии. У пациентов производили сбор венозной
крови, слюны и назального секрета. Для оценки уровня специфических антител G
и А изотипа в слюне нами использовалась общая нестимулированная слюна. Сбор
смешанной нестимулированной слюны (1-2 мл) проводился не менее чем через два
часа после еды. Собранный материал охлаждался при +4°С для снижения актив-
ности пищеварительных ферментов и центрифугировался в течении 20 минут при
1500 g для удаления посторонних включений. Надосадочную жидкость собирали в
пробирки и хранили при -20°С до момента постановки реакции. Сбор назального
секрета проводили следующим образом: в средний носовой проход каждой поло-
вины полости носа помещали на 10 минут стандартные ватные палочки, предвари-
тельно взвешенные в стерильных пластмассовых чашках Петри диаметром 40 мм.
В процессе сбора назального секрета время от времени массировали крылья носа.
После окончания процедуры сбора палочки снова помещались в чашки Петри, пов-
торно взвешивались для определения массы полученного назального секрета и хра-
нились при -20°С до момента постановки реакции. Антитела определяли методом
твердофазного ИФА с помощью моноклональных антител против соответствующих
классов иммуноглобулинов (производства ООО «Полигност») и выражали величи-
ной обратного титра, при котором значение оптической плотности равнялось 0,3.
Определение концентрации иммуноглобулинов классов G, A и секреторно-
го А проводили с использованием коммерческого набора, выпущенного НПЦ
«Медицинская иммунология». Набор представляет собой готовую систему для пос-
тановки РИД по Манчини в модификации Е.В. Чернохвостовой. Согласно много-
численным методическим рекомендациям по работе с биологическими секретами
в тест-системе использовано три типа моноспецифических сывороток: против IgG
человека, против α-цепи IgA молекулы и против секреторного компонента. Таким
образом, по количеству IgA, определяемому в реакции с антисывороткой к α-цепи
IgA-молекулы, мы судили об общем уровне IgA в слюне, а при определении им-
муноглобулинов с антисывороткой к секреторному компоненту мы определяли
суммарное содержание sIgA и свободного секреторного компонента. По разности
этих двух величин мы могли оценить порядковую величину содержания свободного
секреторного компонента в образце слюны. Постановку реакции проводили в соот-
ветствии с инструкцией, прилагаемой к наборам.
Оценка результатов проводилась с использованием стандартных методов ста-
тистического анализа (пакет прикладных программ Статистика 6.1) с учетом харак-
тера распределения признаков. При отсутствии нормального распределения или
при неизвестном его типе для описания характера распределения вычисляли ме-
дианы и интерквартильный размах (25 и 75 процентили). Достоверность различий
между исследуемыми группами оценивали с помощью метода Манна-Уитни. Для
проверки достоверности различий признаков внутри групп до и после лечения при-
меняли критерий Вилкоксона для парных сравнений. Связь признаков оценивали
непараметрическим методом ранговой корреляции (ρ) по Спирмену-Вилкоксону.
Значимыми считали различия при р< 0,05.
Р Е З У Л ЬТАТ Ы И О Б С У Ж Д Е Н И Е
Данные по содержанию антибактериальных антител в сыворотке, слюне и на-
зальном секрете ЧДБД приведены в табл. 1. Было установлено, что уровень бакте-
риальных специфических антител колебался в различных диапазонах в зависимости
как от природы антигена, так и от вида исследуемого биоматериала. Титры антител
всех трех изотипов к S. aureus в исследуемых биопрепаратах — сыворотке, слюне и
назальном секрете, были на порядок выше, чем к K. pneumoniae. При этом в сыво-
ротке крови титры специфических бактериальных антител G-изотипа более, чем в
10 раз, превышали соответствующие титры А-изотипа, а титры антител М-изотипа
были более, чем в 10 раз, ниже титров А изотипа.
Уровень исследуемых бактериальных антител в сыворотке был наивысшим по
сравнению с их уровнем в назальным секрете и слюне. Так, величина обратных тит-
ров антител G-изотипа в сыворотке могла быть более 100 000, А-изотипа — более
20 000, причем значения уровеня специфических антител А-изотипа в сыворотке и
назальном секрете были одного порядка, а G-изотипа в сыворотке превышал на по-
рядок данный показатель в назальном секрете. Самым низким был показатель уров-
ня бактериальных антител в слюне — его медиана обратных титров в исследуемых
группах не превышала 100.
Проводя анализ динамики изучаемых параметров в результате применения
Иммуновак ВП-4 мы отметили статистически достоверное повышение уровня
IgА к обоим антигенам, причем почти в 2 раза, повышение уровня IgG к K. pneumoniae
и понижение уровня стафилококковых IgМ. Уровень стафилококковых
IgG в сыворотке у детей до Ме 11904,0 (3629,0—15458,0) и после вакцинации — Ме
11644,5 (3496,0—19261,0) практически не изменялся. Назально-оральное введение
ВП-4 приводило к усилению локального синтеза специфических иммуноглобулинов.
Происходило достоверно значимое повышение уровня IgА как к S. aureus, так и к
K. pneumoniae, уровень антител G-изотипа в назальном секрете достоверно не из-
менялся. Обратные титры антител А изотипа к обоим исследуемым антигенам ста-
тистически достоверно повышались у детей после вакцинации. Однако следует от-
метить, что это повышение от изначального уровня для стафилококковых антител
(Ме=15,0) до поствакцинального (Ме=31,5) было более чем в 2 раза, а для антител
данного изотипак K. pneumoniae — в 1,75 раза. Изменение уровня антител G изо-
типа к обоим антигенам в слюне в процессе вакцинации не носило достоверного
характера.
Таким образом, комбинированная назально-оральная схема введения ВП-4 че-
рез 0,5-1,5 месяца приводит к статистически достоверному повышению в сыворот-
ке, слюне и назальном секрете уровня IgА как к S. aureus, так и к K. pneumoniae и
понижению уровня стафилококковых IgМ в сыворотке. Можно также утверждать,
что уровень специфических антител IgA изотипа к различным инфекционным
агентам может служить не только критерием неинвазивной диагностики данного
инфекционного процесса и состояния иммунной недостаточности организма, но и
применяться для оценки эффективности вакцинации.
В рамках нашего исследования ЧДБД были представлены двумя подгруппами.
В первую подгруппу были отнесены пациенты с частыми эпизодами ОРВИ, как
правило, с пиком заболеваемости в осенне-зимний период, без каких-либо систем-
ных заболеваний. Во вторую подгруппу вошли также часто болеющие дети, но с хро-
ническими ЛОР-заболеваниями, такими как гнойные синуситы, рецидивирующие
отиты, хронический тонзиллит.
Были выявлены изменения в показателях мукозального гуморального им-
мунитета у ЧДБД, различия по отношению к условно здоровым детям и между
подгруппами. Так, около 67% обследуемых нами часто болеющих детей первой
подгруппы в период ремиссии имели низкий уровень sIgA в слюне, который ста-
тистически значимо отличался от показателя практически здоровых детей (р<0,01)
(табл. 2). У 27% детей этой группы параллельно можно было наблюдать снижение
уровня общего IgA в слюне. В 23% случаев было выявлено повышение концентра-
ции IgG в слюне. Следует отметить, что все три показателя в пределах нормы были
зафиксированы только у 13% пациентов этой группы. Для ЧДБД с хронической
ЛОР-патологией снижение sIgA не было характерным, в отличие от детей первой
подгруппы. Такое снижение было выявлено только в двух случаях (4% от числа об-
следованных). При этом значительно большее число пациентов (34%) имели сни-
женный уровень IgA в слюне. В 20% случаев регистрировались высокие значения
иммуноглобулина, определяемого с анти-сывороткой к секреторному компоненту.
Такое соотношение показателей позволило нам предположить, что для представи-
телей этой подгруппы, скорее всего, было свойственно наличие свободного секре-
торного компонента в высоких концентрациях. Также как и в первой подгруппе,
около 20% ЧДБД с хронической ЛОР-патологией имели повышенный уровень IgG
в слюне.
В результате проведенного курса лечения ВП-4 уже через две недели после
последнего приема препарата было отмечено статистически значимое нарастание
уровня IgG и sIgA (р<0,05) (табл. 2). При последующем обследовании уровень IgG в
слюне сохранял тенденцию к повышению, хотя отличие величины этого показателя
через 1 — 1,5 месяца после лечения от исходного уровня уже не было статистически
достоверным.
Уровень sIgA в слюне ЧДБД после вакцинотерапии ВП-4 достигает максималь-
ного уровня примерно через 1 месяц после окончания курса лечения, причем кон-
центрация иммуноглобулина этого класса возрастает практически в четыре раза. В
дальнейшем, через 1 — 1,5 месяца, происходит снижение количества sIgA в слюне, и
его уровень становится вполне сопоставимым с исходными величинами.
В отношении IgA была отмечена тенденция к увеличению его концентрации в
слюне. При этом следует отметить, что исходно среднее значение этого показателя по
группе было несколько ниже возрастной нормы. Максимального значения концен-
трация IgA достигает через 1 месяц после окончания курса вакцинотерапии ВП-4.
Через 1 — 1,5 месяца уровень IgA в слюне снижается, однако среднее значение нахо-
дится в пределах границ возрастной нормы, в отличие от исходного значения.
У ЧДБД без локальных очагов инфекции респираторного тракта имеет место
выраженное снижение sIgA в слюне, которое в ряде случаев сопровождается парал-
лельным снижением IgA в слюне. Такая картина, на наш взгляд, говорит о низкой
иммунологической реактивности слизистой верхних дыхательных путей у детей с
частыми эпизодами о респираторной инфекции.
В отличие от представителей этой подгруппы, ЧДБД с хроническими ЛОР-за-
болеваниями характеризуются сниженным уровнем IgA в слюне, но не sIgA. Таким
образом, ЧДБД, имеющие различные клинические особенности, достаточно ярко
различаются по характеру изменений в уровня иммуноглобулинов слюны, что мо-
жет быть использовано в качестве дополнительного диагностического признака.
Вакцинотерапия ВП-4 позволила нормализовать уровень иммуноглобулинов в слю-
не у ЧДБД. Было отмечено нарастание IgG и sIgA в слюне, что свидетельствует о
повышении локальной иммунологической реактивности носоглотки. Антигенные
составляющие поликомпонентной вакцины индуцировали местный синтез IgG и
sIgA, осуществляющих основную роль в защите респираторного тракта и слизистых
верхних дыхательных путей.

About the authors

E. P. Foshina

Mechnikov Research Institute of Vaccines and Sera

Author for correspondence.
Email: fake@neicon.ru
Moscow Russian Federation

T. A. Serova

Mechnikov Research Institute of Vaccines and Sera

Email: fake@neicon.ru
Moscow Russian Federation

I. B. Bisheva

Mechnikov Research Institute of Vaccines and Sera

Email: fake@neicon.ru
Moscow Russian Federation

O. V. Slatinova

Mechnikov Research Institute of Vaccines and Sera

Email: fake@neicon.ru
Moscow Russian Federation

References

Supplementary files