КОНСТРУИРОВАНИЕ РЕКОМБИНАНТНЫХ АТТЕНУИРОВАННЫХ БАКТЕРИЙ BORDETELLA PERTUSSIS ГЕНОТИПА PTXP3

Обложка


Цитировать

Полный текст

Аннотация

Цель. Конструирование рекомбинантных бактерий B. pertussis генотипа ptxP3 и характеристика их генетической и биологической стабильности. Материалы и методы. В качестве реципиента при конструировании аттенуированных бактерий генотипа ptxP3 использованы вирулентные бактерии B. pertussis 475 генотипа ptxР1, применяемые для производства вакцины АКДС в Российской Федерации. Мутантные бактерии B. pertussis 475 получены в результате аллельного обмена между нативной копией целевой последовательности в составе хромосомы и ее мутантной копией в рекомбинантной суицидной плазмиде, переданной в реципиентную бактерию с помощью коньюгации. Конструирование рекомбинантных плазмид осуществлено стандартными методами генетической инженерии. Структура модифицированных участков хромосомы аттенуированных бактерий определена с помощью ПЦР и секвенирования фрагментов амплификации. Стабильность структуры и свойств аттенуированных бактерий определена после 15 пассажей бактерий на питательной среде и 5 - в организме мышей. Результаты. Сконструированы изогенные аттенуированные бактерии РtxP1 B. pertussis 4M и РtxP3 B. pertussis 4М^, продуцирующие коклюшный токсин (КТ), лишенный ферментативной токсической активности, и не продуцирующие дермонекротический токсин. Промоторная область оперона ptx аттенуированных бактерий РtxP3 B. pertussis 4М^ содержит мутацию, характерную для «нового» генотипа циркулирующих в настоящее время вирулентных бактерий B. pertussis и увеличивающую продукцию КТ. Структура модифицированных фрагментов ДНК и свойства аттенуированных бактерий не изменяются при хранении и пассажах на питательной среде и в организме мышей. Заключение. Сконструированы рекомбинантные аттенуированные бактерии B. pertussis 4М^ «нового» генотипа ptx*P3 и показана перспективность направленной генноинженерной модификации изогенных бактерий B. pertussis для создания инновационных препаратов для профилактики коклюша.

Об авторах

Е. Г. Семин

Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи

Автор, ответственный за переписку.
Email: noemail@neicon.ru
Россия

Л. Н. Синяшина

Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи

Email: noemail@neicon.ru
Россия

А. Ю. Медкова

Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи

Email: noemail@neicon.ru
Россия

Г. И. Каратаев

Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи

Email: noemail@neicon.ru
Россия

Список литературы

  1. Алексеева И.А., Чупринина Р.П., Борисова В.Н. Сравнительный анализ безопасности и эффективности отечественных и зарубежных комплексных вакцин, содержащих цельноклеточную коклюшную вакцину. Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2012, 3(64): 48-54.
  2. Борисова О.Ю., Пименова А.С., Попова О.П. и др. Структура популяции штаммов возбудителя коклюша на территории России. Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2016, 4(86): 22-27.
  3. Захарова М.С. Влияние вакцинации на эпидемиологию коклюша в СССР. В кн.: Эпидемиология и иммунопрофилактика коклюша в СССР, ВНР, НРБ и ЧССР. М., 1985.
  4. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование. М., Мир, 1984.
  5. МУК 4.2.2317-08. Методические указания. Издание официальное. Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. М., 2009.
  6. Перелыгина О. В., Алексеева И. А. Безопасность комбинированных вакцин с цельноклеточным коклюшным компонентом. Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2016, 6 (91): С. 62-69.
  7. Пименова А.С., Борисова О.Ю., Цвиркун О.В. и др. Эффективность применения молекулярно-генетической диагностики при обследовании очагов коклюшной инфекции. Журн. инфекция и иммунитет. 2017, 7(2): 162-170.
  8. Синяшина Л.Н., Синяшина Л.С., Семин Е.Г. и др. Конструирование генетически аттенуированных бактерий Bordetella pertussis, утративших активность дермонекротического токсина и продуцирующих измененную нетоксичную форму коклюшного токсина. Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 2010, 3: 31-36.
  9. Mielcarek N., Debrie A.S., Raze D. et al. Live attenuated B. pertussis as a single-dose nasal vaccine against whooping cough. PLoS Pathog. 2006, 2 (7): 65-69.
  10. Mooi F.R. Bordetella pertussis and vaccination: the persistence of a genetically monomorphic pathogen. Infect. Genet. Evol. 2010, 10 (1): 36-49.
  11. Sato Y, Sato H. Development of acellular pertussis vaccines. Biologicals. 1999, 27: 61-67.
  12. WHO. Expert committee on biological standardization. Recommendation to Assure the Quality, Sаfety and Efficacy of Acellular Pertussis Vaccines. Geneva, 17-20 October. 2011.
  13. WHO. Weekly epidemiological record. 2014, 89(21).

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© Семин Е.Г., Синяшина Л.Н., Медкова А.Ю., Каратаев Г.И., 2018

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License.
СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: ПИ № ФС77-75442 от 01.04.2019 г.


Данный сайт использует cookie-файлы

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.

О куки-файлах