ВКЛЮЧЕНИЕ САЙТ-СПЕЦИФИЧЕСКИХ МУТАЦИЙ В КОНСЕРВАТИВНЫЕ УЧАСТКИ РА-ГЕНА ПРИВОДИТ К АТТЕНУАЦИИ ВИРУЛЕНТНОГО ШТАММА ВИРУСА ГРИППА A/WSN/33

Обложка


Цитировать

Полный текст

Аннотация

Иель. Исследование возможности получения аттенуированных вариантов вируса гриппа с помощью включения специально подобранных сайт-специфических мутаций консервативную последовательность РА-гена (концевую часть СООН-домена РА-ена) вирулентного штамма. Материалы и методы. В работе был использован вирулентный штамм вируса гриппа A/WSN/33. Включение сайт-специфических мутаций РА-ген вирулентного штамма A/WSN/33 проводили с помощью двуступенчатой мутационной ПЦР. Клонирование осуществляют, используя GoldenGate реакцию. Использовали 8-плазмидную трансфекционную систему на основе вектора pH W2000. Трансформацию проводили на рубидиевых компетентных бактериальных клетках штамма DH5a. Трансфекцию делали при помощи реагента LipofectamineLTX(Invitro-;гп) в кокультуре клеток 293Т и MDCK. Результаты. Показано, что трансфектанты, содержащие замену F658A в СООН-домене РА-гена, приобрели ts-фенотип и резко снизили способность к размножению в легких мышей. Включение замены F658A в СООН-домен РА-гена в комбинации с включением в геном вирулентного штамма ts-мутаций из генов ХА штаммов вируса гриппа приводило к получению трансфектантов, обладающих фенотипическими характеристиками, типичными зля кандидатов в живые гриппозные вакцины. Заключение. Показана возможность получения аттенуированных вариантов вируса гриппа путем включения специально подобранных сайт-специфических мутаций в консервативную последовательность РА-гена.

Об авторах

А. А. Ртищев

НИИ вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова

Автор, ответственный за переписку.
Email: noemail@neicon.ru
Россия

Р. Р. Минтаев

НИИ вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова

Email: noemail@neicon.ru
Россия

В. Ю. Кост

НИИ вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова

Email: noemail@neicon.ru
Россия

И. Б. Коптяева

НИИ вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова

Email: noemail@neicon.ru
Россия

И. И. Акопова

НИИ вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова

Email: noemail@neicon.ru
Россия

К. В. Лисовская

НИИ вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова

Email: noemail@neicon.ru
Россия

С. Г. Маркушин

НИИ вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова

Email: noemail@neicon.ru
Россия

Список литературы

  1. Алексадрова Г.И., Климов А.И. Живая вакцина против гриппа. Санкт-Петербург. Наука, 1994.
  2. Гендон Ю.З., Маркушин С.Г., Цфасман Т.М. и др. Новые холодоадаптированные штаммы-доноры аттенуации для живых вакцин против гриппа. Вопросы вирусологии. 2013, 1: 11-17.
  3. Da Costa В., Sausset A., Munier S. et al. Temperature-sensitive mutants in the influenza A virus RNA polymerase: alterations in the PA linker reduce nuclear targeting of the PB1 -PA dimer and result in viral attenuation. J. Virol. 2015, 89 (12): 6376- 6390.
  4. Hickman D., Hossain J., Song H. et al. An avian live attenuated master backbone for potential use in epidemic and pandemic influenza vaccines. J. Gen. Virol. 2008, 89: 2682-2690.
  5. Hoffmann E., Neumann G., Hobom G. et al. Ambisense approach for the generation o: influenza A virus: vRNAand mRNA synthesis from one template. Virology. 2000,267 (2) 310-317.
  6. Jin H., Zhou H., Lu B. et al. Imparting temperature sensitivity and attenuation in ferret; to A/Puerto Rico/8/34 influenza vims by transferring the genetic signature for temperature sensitivity from cold-adapted A/Ann Arbor/6/60. J. Virol. 2004, 78 (2): 995-998.
  7. Parkin N., Chiu P., Coelingh K. Genetically engineering live attenuated influenza A viru.' vaccine candidates. J. Virol. 1997, 71 (4): 2772-2778.
  8. Pena L., Vincent A., Ye J. et al. Modifications in the polymerase genes of a swine-likc triple-reassortant influenza vims to generate live attenuated vaccines against 2009 pandemic H1N1 viruses. J. Virol. 2011, 85 (1): 456-469.
  9. Solorzano A.,Li Yo., Perez D.R. Alternative live - attenuated influenza vaccines based or. modification in the polymerase genes protect against epidemic and pandemic flu. J. Virol 2010,84 (9): 4587-4596.
  10. Song H., Nieto G., Perez D. A new generation of modified live-attenuated avian influenza viruses using a two-strategy combination as potential vaccine candidates. J. Virol. 2007,81 (17):9238-9248.
  11. Subbarao E.K., Kawaoka Y.,Murphy B.R. Rescue of an influenza A virus wild-type '227PB2 gene and a mutant derivative bearing a site-specific temperature - sensitive and attenuating mutation. J. Virol. 1993, 67 (12): 7223- 7227.
  12. Subbarao K., ParkE., Lawson C.etal. Sequential addition temperature-sensitive missense mutations into the PB2 gene of influenza A transfectant viruses can effect an increase in temperature sensitivity and attenuation and permits the rational design of a genetically engineered live influenza A virus vaccine. J. Virol. 1995, 69 (10): 5969-5977.
  13. Zhou B., Li Yo., Speer S. et al. Engineering temperature sensitive live attenuated influenza vaccines from emerging viruses. Vaccine. 2012, 30 (24): 3691-3702.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© Ртищев А.А., Минтаев Р.Р., Кост В.Ю., Коптяева И.Б., Акопова И.И., Лисовская К.В., Маркушин С.Г., 2017

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License.
СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: ПИ № ФС77-75442 от 01.04.2019 г.


Данный сайт использует cookie-файлы

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.

О куки-файлах