ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МУЛЬТИПЛЕКСНОЙ ПЦР ДЛЯ АНАЛИЗА ПОЛИКОМПОНЕНТНЫХ ПРОБИОТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ


Цитировать

Полный текст

Аннотация

Цель. Разработка мультиплексной ПЦР для индикации и дифференцированного анализа КОЕ в пробиотическом препарате, содержащем три различных вида бифидобактерий (Bifidobacterium bifidum, B. longum, B.adolescentis) и два вида лактобацилл (Lactobacillus acidophilus, L.plantarum). Материалы и методы. Применена мультиплексная ПЦР с праймерами к генам 16S рРНК пяти видов бактерий. Образцы бактериальных колоний снимали с плотной питательной среды и переносили в пробирку для постановки мультиплексной ПЦР. Бактериальные лизаты использовали в качестве матрицы-мишени для амплификации и определения наличия искомых ампликонов. Результаты. Разработана мультиплексная ПЦР для выявления КОЕ каждого штамма бифидобактерий и лактобацилл в образцах 5-компонентного пробиотика с точностью до вида. Отработан набор реагентов и показана высокая воспроизводимость и специфичность метода мультиплексной ПЦР с точностью 90-95% случаев. Заключение. Разработанный метод мультиплексной ПЦР рекомендуется использовать для контроля КОЕ каждого бактериального компонента в комплексном пробиотическом препарате.

Об авторах

И. И Вайншток

ЗАО «Партнер», Москва

И. Ю Щит

ГНЦ прикладной микробиологии и биотехнологии, Оболенск, Московская обл.

В. М Бондаренко

НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи, Москва

И. Б Бродский

ЗАО «Партнер», Москва

Список литературы

  1. Бондаренко В.М. Поликомпонентные пробиотики: механизм действия и терапевтический эффект при дисбиозах кишечника. Фарматека. 2005, 20: 46-54.
  2. Бондаренко В.М. Обоснование и тактика назначения в медицинской практике различных форм пробиотических препаратов. Фарматека. 2012, 11: 89-99.
  3. Бондаренко В.М., Мацулевич Т.В. Дисбактериоз кишечника как клинико-лабораторный синдром: современное состояние проблемы. ГЭОТАР-медиа. М., 2007.
  4. Falagas M.E., Betsi G.I., Athanasiou S. Probiotics for prevention of recurrent vulvovaginal candidiasis: A review. J. Antimicrob. Chemother. 2006, 58: 266-272.
  5. FAO/WHO. Health and nutritional properties of probiotics in food including powder milk with live lactic acid bacteria. Report of a joint FAO/WHO expert consultation on evaluation of health and nutritional properties of probiotics in food including powder milk with live lactic acid bacteria. Basel, Switzerland, WHO, 2001.
  6. Kwon H.S., Yang E.H., Yeon S.W, Kang B.H., Kim T.Y. Rapid identification of probiotic Lactobacillus species by multiplex PCR using species-specific primers based on the region extending from 16S rRNA. FEMS Microbiol. Let. 2004, 239: 267-275.
  7. Kwon H.S., Yang E.H., Yeon S.W, Kang B.H., Kim T.Y Rapid identification of potentially probiotic Bifidobacterium species by multiplex PCR using species-specific primers based on the region extending from 16S rRNA through 23S rRNA. FEMS Microbiol. Let. 2005, 250: 55-62.
  8. Logan A.C., Katzman M. Major depressive disorder: probiotics may be an adjuvant therapy. Med. Hypotheses. 2005, 64 (3): 533-538.
  9. Matsuki T., Watanabe K., Tanaka R., Fukuda M., Oyaizu H. Distribution of bifidobacterial species in human intestinal microflora examined with 16S rRNA-gene-targeted species-specific primers. Appl. Environ. Microbiol. 1999, 65: 4506-4512.
  10. Matsuki T., Watanabe K., Tanaka R. Genus- and species-specific PCR primers for the detection and identification of bifidobacteria. Curr. Issues Intest. Microbiol. 2003, 4: 61-69.
  11. Mitsuoka T. Bifidobacteria and their role in human health. J. Indust. Microbiol. 1990, 6: 263268.
  12. Preidis G.A., Versalovic J. Targeting the human microbiome with antibiotics, probiotics, and prebiotics. Gastroenterology enters the metagenomics era. Gastroenterology. 2009, 136: 20152031.
  13. Reiff C., Kelly D. Inflammatory bowel disease, gut bacteria and probiotic therapy. Int. J. Med. Microbiol. 2010, 300: 25-33.
  14. Song Y.L., Kato N., Liu C.X., Matsumiya Y., Kato H., Watanabe K. Rapid identification of 11 human intestinal Lactobacillus species by multiplex PCR assays using group- and species-specific primers derived from the 16S-23S rRNA intergenic spacer region and its flanking 23S rRNA. FEMS Microbiol.Let. 2000, 187: 167-173.
  15. Walter J., Tannock G. W., Tilsala-Timisjarvi A., Rodtong S., Loach D., Munro M., Alatossava K. T. Detection and identification of gastrointestinal Lactobacillus species by using denaturing gradient gel electrophoresis and species-specific PCR primers. Appl. Environ. Microbiol. 2000, 66 (1): 297303.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© Вайншток И.И., Щит И.Ю., Бондаренко В.М., Бродский И.Б., 2013

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License.
СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: ПИ № ФС77-75442 от 01.04.2019 г.


Данный сайт использует cookie-файлы

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.

О куки-файлах