МЕМБРАНОСВЯЗАННЫЕ ПРОТЕАЗЫ OMPT+ И OMPT - ШТАММОВ ХОЛЕРНОГО ВИБРИОНА


Цитировать

Полный текст

Аннотация

Цель. Выявление протеаз в наружных мембранах (НМ) отрТ+ и отрТ -штаммов холерного вибриона О1 и О139 серогрупп. Материалы и методы. Специфически стерильные препараты НМ получали лизисом живых клеток холерных вибрионов 4,5 М раствором мочевины с последующим дифференциальным центрифугированием и обработкой нуклеазами. Экстракцию белков НМ, предварительно обработанных саркозинатом натрия, проводили Тритоном Х-100 в присутствии ЭДТА. Протеазный и полипептидный спектры изучали в субстратном и SDS-электрофорезе. Чувствительность протеаз к ингибиторам определяли в диффузионном тесте в агарозном геле, содержащим субстрат, с использованием соевого ингибитора трипсина (СИТ) и фенилметилсульфонилфторида (ФМСФ). Наличие гена ompT определяли в ПЦР с использованием специфических праймеров. Результаты. По данным ПЦР 13 штаммов Vibrio cholerae О1 и 3 штамма V. cholerae О139, выделенные из клинического материала, а также 22 штамма V. cholerae О1, изолированные из объектов окружающей среды, содержали ген ompT. Два штамма V. cholerae О1, выделенные от человека, 9 штаммов V. cholerae О1 и 2 штамма V. cholerae О139, выделенные из окружающей среды, не имели ompT гена. С помощью ДСН- и энзим-электрофореза в полиакриламидном геле обнаружены количественные и качественные различия в составе полипептидов и протеаз, гидролизующих желатин, казеин и протаминсульфат, НМ ompT+ и ompT - штаммов холерных вибрионов. Ингибирование экстрактов НМ ФМСФ и СИТ приводило к снижению их протеолитической активности. Заключение. В препаратах и экстрактах НМ ompT+ и ompT - V. cholerae обнаружено до трех протеаз, часть из которых может быть отнесена к омптиноподобным.

Об авторах

С. Н Козлов

Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока

В. Б Николаев

Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока

Е. Ю Марков

Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока

Л. Я Урбанович

Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока

Л. В Миронова

Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока

Список литературы

  1. Марков Е.Ю., Урбанович Л.Я., Голубинский Е.П. и др. Наружные мембраны холерного вибриона как потенциальный компонент химической вакцины. Журн. микробиол. 1995, 2: 86-89.
  2. Марков Е.Ю. Поверхностные структуры и антигены холерного вибриона, бруцелл и туляремийного микроба. Автореф. дис. д-ра биол. наук. Иркутск, 2000.
  3. Мишанькин Б.Н., Шипко Е.С., Атарова Г.Т. и др. Способность 0mpT+ и 0mpT-штаммов холерных вибрионов гидролизовать антимикробный пептид протаминсульфат. Акт. вопр. инфекц. патол. Ростов-на-Дону, 2009, с. 426-430.
  4. Мишанькин Б.Н., Шипко Е.С., Дуванова О.В. и др. Способность холерного вибриона активировать плазминоген человека в условиях in vitro. В: Материалы проблемной комиссии Координационного научного совета по санитарной охране территории. Ростов-на-Дону, 2010, 23, с.110-113.
  5. Николаев В.Б., Марков Е.Ю., Урбанович Л.Я. и др. Протеазный спектр наружных мембран Vibrio cholerae О1 и О139 серогрупп. Журн. инфекц. патол. 2009, 16 (3): 43-47.
  6. Сабирова А.Р., Рудакова Н.Л., Шагимарданова Е.И. и др. Мембраносвязанные металлопротеиназы бактерий. Ученые записки Казанского университета. Естественные науки. 2011, 153 (2): 89-95.
  7. Baneyx F., Georgiou G. In vivo degradation ofsecreted fusion proteins by the Escherichia coli outer membrane protease 0mpT. J. Bacteriol. 1990, 172 (1): 491-494.
  8. Chakrabarti S.R., Chaudhuri K., Sen K. et al. Porins of Vibrio cholerae: purification and characterization of 0mpU. J. Bacteriol. 1996, 178 (2): 524-530.
  9. Eren E., Murphy M., Goguen J.et al. An active site water network in the plasminogen activator Pla from Yersinia pestis. Structure. 2010, 18 (7): 809-818.
  10. Hecker M., Antelmann H., Buttner K. et al. Gel-based proteomics of Gram-positive bacteria: a powerful tool to address physiological questions. Proteomics. 2008, 8 (2324): 4958-4975.
  11. Heussen C., Dowdle E. Electrophoretic analysis of plasminogen activators in polyacrylamide gels containing sodium dodecyl sulfate and copolymerized substrates. Anal. Biochem. 1980, 102 (1): 196-202.
  12. Hwang B.Y., Varadarajan N., Li H. et al. Substrate specificity of the Escherichia coli outer membrane protease 0mpP. J. Bacteriol. 2007, 189 (2): 522-530.
  13. Johnston K.H., Gotschlich E.C. Isolation and characterization ofthe outer membrane of Neisseria gonorrhoeae. J. Bacteriol. 1974, 119 (1): 250-257.
  14. Kramer R., Zandwijken D., Egmond M. et al. In vitro folding, purification and characterization of Escherichia coli outer membrane protease 0mpT. Eur. J. Biochem. 2000, 267 (3): 885-893.
  15. Laemmli U., Favre M. Maturation of the head of bacteriophage T4. I. DNA packaging events. J. Mol. Biol. 1973, 80 (4): 575-599.
  16. Merrell D., Bailey C., Kaper J. et al. The ToxR-mediated organic acid tolerance response of Vibrio cholerae requires 0mpU. J. Bacteriol. 2001, 183 (9): 2746-2754.
  17. Mizushima S., Ishida M., Miura T. Subfractionation of protoplast membrane and enzyme localization in Bacillus megaterium. J. Biochem. 1966, 60 (3): 256-261.
  18. Schnaitman C.A. Protein composition of the cell wall and cytoplasmic membrane of Escherichia coli. J. Bacteriol. 1970, 104 (2): 890-901.
  19. Stumpe S., Schmid R., Stephens D. et al. Identification of 0mpT as the protease that hydrolyses the antimicrobial peptide protamine before it enters growing cells of Escherichia coli. J. Bacteriol. 1998, 180 (15): 4002-4006.
  20. Thomassin J.L., Brannon J.R., Gibbs B.F. et al. 0mpT outer membrane proteases of enterohemorrhagic and enteropathogenic Escherichia coli contribute differently to the degradation of human LL-37. Infect. Immun. 2012, 80 (2): 483-492.
  21. White C.B, Chen Q., Kenyon G.L. et al. A novel activity of 0mpT. Proteolysis under extreme denaturing conditions. J. Biol. Chem. 1995, 270 (22): 12990-12994.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© Козлов С.Н., Николаев В.Б., Марков Е.Ю., Урбанович Л.Я., Миронова Л.В., 2013

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License.
СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: ПИ № ФС77-75442 от 01.04.2019 г.


Данный сайт использует cookie-файлы

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.

О куки-файлах