Отправить статью по E-mail ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ДЕТЕРМИНАНТЫ СЕКРЕТИРУЕМЫХ ИНГИБИТОРОВ ЛИЗОЦИМА ИАНТИЛИЗОЦИМНЫЙ ФЕНОТИП ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ
- Авторы: Перунова НБ1, Андрющенко СВ1, Бухарин ОВ1, Perunova NB2, Andryuschenko SV2, Bukharin OV2
-
Учреждения:
- Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза, Оренбург
- Выпуск: Том 89, № 6 (2012)
- Страницы: 8-12
- Раздел: Статьи
- URL: https://microbiol.crie.ru/jour/article/view/13691
- ID: 13691
Цитировать
Полный текст
Аннотация
Цель. Определение взаимосвязи генетических детерминант секретируемых ингибиторов лизоцима с антилизоцимным фенотипом энтеробактерий. Материалы и методы. Материалом для исследования послужили по 50 культур негемолитических Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, изолированных из фекалий пациентов с I - II степенью дисбиоза кишечника, и Salmonella enterica,
выделенных от больных ОКИ и реконвалесцентных сальмонеллезных бактерионосителей. Выделение
матричной ДНК исследуемых штаммов для ПЦР проведено комплектом "ДНК-Экспресс" ("Литех",
Россия). ПЦР-скрининг генов секретируемых ингибиторов лизоцима ivyC и pliC осуществлен на
основе праймеров и реагентов ООО "Синтол". Детекция ампликонов производилась методом агарозного гель-электрофореза. Определение общей антилизоцимной активности (АЛА) осуществляли чашечным методом, секретируемого и сорбционного компонента АЛА - фотометрическим
методом по О.В.Бухарину и др. (1999) и по В.Ю.Соколову и А.П.Луда (1987) соответственно.
Результаты. Скрининг наличия генов хромосомной локализации: ivyC у эшерихий и клебсиелл и
pliC у сальмонелл методом ПЦР показал их убиквитарное распространение среди исследованных
культур. Поиск гомолога гена pliС, характерного для плазмиды вирулентности K. pneumoniae, выявил положительный результат в 19±,5% случаев. Наиболее низкий уровень АЛА отмечался у
носителей только гена ivyC, составляя в среднем 2,8±0,6 мкг/мл.ОП, тогда как у всех энтеробактерий, имеющих ген pliC, значения АЛА в среднем составляли 4±0,3 мкг/мл.ОП. Заключение.
Антилизоцимная активность энтеробактерий является частью общего механизма лизоцимрезистентности микроорганизмов и определяется наличием генов секретируемых ингибиторов лизоцима.
Применение молекулярно-генетического подхода в виде разработанной экспериментальной тест-системы на основе метода ПЦР позволило выявлять гены секретируемых ингибиторов лизоцима в
скрининговом режиме. Высокий уровень секреторной АЛА сопряжен с наличием гена pliC, тогда
как у носителей гена ivyC выявляли более низкие значения признака.
выделенных от больных ОКИ и реконвалесцентных сальмонеллезных бактерионосителей. Выделение
матричной ДНК исследуемых штаммов для ПЦР проведено комплектом "ДНК-Экспресс" ("Литех",
Россия). ПЦР-скрининг генов секретируемых ингибиторов лизоцима ivyC и pliC осуществлен на
основе праймеров и реагентов ООО "Синтол". Детекция ампликонов производилась методом агарозного гель-электрофореза. Определение общей антилизоцимной активности (АЛА) осуществляли чашечным методом, секретируемого и сорбционного компонента АЛА - фотометрическим
методом по О.В.Бухарину и др. (1999) и по В.Ю.Соколову и А.П.Луда (1987) соответственно.
Результаты. Скрининг наличия генов хромосомной локализации: ivyC у эшерихий и клебсиелл и
pliC у сальмонелл методом ПЦР показал их убиквитарное распространение среди исследованных
культур. Поиск гомолога гена pliС, характерного для плазмиды вирулентности K. pneumoniae, выявил положительный результат в 19±,5% случаев. Наиболее низкий уровень АЛА отмечался у
носителей только гена ivyC, составляя в среднем 2,8±0,6 мкг/мл.ОП, тогда как у всех энтеробактерий, имеющих ген pliC, значения АЛА в среднем составляли 4±0,3 мкг/мл.ОП. Заключение.
Антилизоцимная активность энтеробактерий является частью общего механизма лизоцимрезистентности микроорганизмов и определяется наличием генов секретируемых ингибиторов лизоцима.
Применение молекулярно-генетического подхода в виде разработанной экспериментальной тест-системы на основе метода ПЦР позволило выявлять гены секретируемых ингибиторов лизоцима в
скрининговом режиме. Высокий уровень секреторной АЛА сопряжен с наличием гена pliC, тогда
как у носителей гена ivyC выявляли более низкие значения признака.
Об авторах
Н Б Перунова
Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза, ОренбургИнститут клеточного и внутриклеточного симбиоза, Оренбург
С В Андрющенко
Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза, ОренбургИнститут клеточного и внутриклеточного симбиоза, Оренбург
О В Бухарин
Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза, ОренбургИнститут клеточного и внутриклеточного симбиоза, Оренбург
N B Perunova
S V Andryuschenko
O V Bukharin
Список литературы
- Андрющенко С.В. , Бухарин О.В., Перунова Н.Б., Иванова Е.В. Увеличение копийности плазмидной ДНК как возможный механизм усиления антилизоцимного признака бактерий под действием хлорамфеникола. Журн. микробиол. 2011, 6: 8-13.
- Бондаренко В.М., Петровская В.Г., Яблочков А.Л. Антилизоцимный фактор Klebsiella pneumoniae: природа, биологические функции и генетический контроль. Журн. микробиол. 1994, 1: 22-28.
- Бухарин О.В. Персистенция патогенных бактерий. М., Медицина, 1999.
- Бухарин О.В., Кириллов Д.А., Кириллов В.А. Скрининг плазмид у бактерий рода Bacillus, обладающих антилизоцимной активностью. Журн. микробиол. 2006, 1: 3-6.
- Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование. М., Мир, 1984.
- Abergel C., Monchois V., Byrne D. et al. Structure and evolution of the Ivy protein family, unexpected lysozyme inhibitors in gram-negative bacteria. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2007, 104: 6394-6399.
- Callewaert L., Aertsen A., Deckers D. et al. A new family of lysozyme inhibitors contributing to lysozyme tolerance in gram-negative bacteria. PLoS Pathog. 2008, 4: e1000019.
- Chen Y.T., Chang H.Y., Lai Y.C. et al. Sequencing and analysis of the large virulence plasmid pLVPK of Klebsiella pneumoniae CG43. Gene. 2004, 337: 189-198.
- Deckers D., Masschalck B., Aertsen A. et al. Periplasmic lysozyme inhibitor contributes to lysozyme resistance in Escherichia coli. Cell. Mol. Life Sci. 2004, 61 (10): 1229-1237.
- Hiroshi N. Molecular basis of bacterial outer membrane permeability revisited. Microbiol. Mol. Biol. Rev. 2003,67 (4): 593-656.
- Monchois V., Abergel C., Sturgis J. et al. Escherichia coli ykfE ORFan gene encodes a potent inhibitor of C-type lysozyme. J. Biol. Chem. 2001, 276: 18437-18441.
- Wu K.M., Li L.H., Yan J.J. et al. Genome sequencing and comparative analysis of Klebsiella pneumoniae NTUH-K2044, a strain causing liver abscess and meningitis. J. Bacteriol. 2009, 191 (14): 4492-4501.
Дополнительные файлы
