ИССЛЕДОВАНИЕ ВНЕКЛЕТОЧНЫХ АНТИГЕНОВ ИММУНОДИФФУЗИОННЫМИМЕТОДАМИ В ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ПАТОГЕННЫХ БУРКХОЛЬДЕРИЙ


Цитировать

Полный текст

Аннотация

Цель. Выделение и сравнение составов
экстрацеллюлярных антигенов (ЭЦА) патогенных буркхольдерий в электрофорезе в
ПААГ с SDS и использование их для дифференциации этих микроорганизмов иммунодиффузионными методами. Материалы
и методы. Изучено 60 штаммов Burkholderia
pseudomallei, 14 штаммов B. mallei, 5 штаммов B. thailandensis, 4 штамма B. cepacia.
ЭЦА получали по методике Liu на F-агаре,
покрытом целлофаном. Электрофорез в
ПААГ с SDS проводили в 10% геле по
Laemmli, реакцию иммунодиффузии (РИД)
в 1% агарозном геле, РИД с живыми культурами, иммуноэлектрофорез (ИЭФ) ставили по общепринятым методикам. Для
получения сывороток кроликов иммунизировали смесью ЭЦА с неполным адъювантом Фрейнда. Результаты. Спектры ЭЦА
типичных штаммов изучаемых видов буркхольдерий после электрофореза в ПААГ с
SDS, окрашенные серебром, имеют 8 - 9
мажорных фракций. Высоким сходством
обладают электрофореграммы ЭЦА B.
pseudomallei и B. thailandensis. Анализ состава ЭЦА в РИД с иммунными сыворотками к ЭЦА выявил максимальное количество перекрестнореагирующих ЭЦА (3)
между B. pseudomallei и B. thailandensis. Эти
штаммы имели только по одному перекрестному ЭЦА со штаммом B. mallei. РИД
с живыми культурами с иммунной сывороткой к ЭЦА B. thailandensis выявлял ЭЦА у
всех штаммов B. pseudomallei, B. thailandensis
и не выявлял их у всех штаммов B.
mallei. Анализ электрофореграмм, полученных с помощью метода ИЭФ ЭЦА патогенных буркхольдерий с иммунными сыворотками к ЭЦА выявил различия в их составах,
достаточные для их дифференцирования.
Заключение. Выявленные иммунодиффузионными методами различия составов ЭЦА
позволили разработать дополнительные
способы дифференциации возбудителей
сапа и мелиоидоза.

Об авторах

А А Будченко

Волгоградский научно-исследовательскийпротивочумный институт

Волгоградский научно-исследовательскийпротивочумный институт

И Ю Мазурова

Волгоградский научно-исследовательскийпротивочумный институт

Волгоградский научно-исследовательскийпротивочумный институт

В И Илюхин

Волгоградский научно-исследовательскийпротивочумный институт

Волгоградский научно-исследовательскийпротивочумный институт

A A Budchenko

I Yu Mazurova

V I Ilyukhin

Список литературы

  1. Илюхин В.И., Меринова Л.К., Агеева Н.П. и др. Бактериоцины и бактериофаги патогенных буркхольдерий. Журн. микробиол. 2011, 1: 12-19.
  2. Г. Фримель. Иммунологические методы. М., 1987.
  3. Будченко А.А., Мазурова И.Ю., Илюхин В.И. Способ дифференциации возбудителей сапа и мелиоидоза преципитирующей антисывороткой. Патент ¹ 2305557 РФ, 10.09.2007.
  4. Пивень Н.Н. Перспективы исследований общих, перекрестнореагирующих и видовых антигенов у некоторых видов бактерий рода Pseudomonas. Микробиол. журн. 1987, 49 (3): 6-10.
  5. Пивень Н.Н., Илюхин В.И., Тимошин В.Б. и др. Перекрестно-реагирующие антигены патогенных буркхольдерий и некоторых опасных возбудителей инфекционных болезней. Журн. микробиол. 2005, 2: 14-19.
  6. Пивень Н.Н., Смирнова В.И., Викторов Д.В. Иммуногенность и гетерогенность поверхностного антигена 8 Burkholderia pseudomallei. Журн. микробиол. 1996, 4: 75-78.
  7. Brett P.J., Burtnick M.N., Heis С. et al. Burkholderia thailandensis oacA mutants facilitate the expression of Burkholderia mallei-like O-polysaccharides. Infect. Immun. 2010, 10: 1023-1033.
  8. Euteneuer B., Loos M. Comparison of the exoproducts of gram-negative bacteria by SDS-Page. Zbl. Bakt. Hyng. 1985, A259: 11-19.
  9. Gilmore G., Barnes J., Ketheesan N. Use of antigens derived from B. pseudomallei, B. thailandensis, and B. cepacia in the indirect hemagglutination assay for melioidosis. Clin. Vac. Immun. 2007, 14: 1529-1531.
  10. Hardy L.N., Knox K.W., Brown R.A. Comparison of extracellular protein profiles of seven serotypes of mutans streptococci grown under controlled conditions. J. Gen. Microbiol. 1986, 132: 1389-1400.
  11. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 1970, 227: 680-685.
  12. Liu P.V. Survey of hemolysin production among species of pseudomonads. J. Bacteriol. 1957, 74: 718-727.
  13. Liu P.V. Identification of pathogenic pseudomonads by extracellular antigens. J. Bacteriol. 1961, 81: 28-35.
  14. Oakley B.R., Kirsch D.R., Morris B.R. A simplified ultrasensitive silver stain for detecting proteins in polyacrylamide gels. Anal. Biochem. 1980, 105: 361-363.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML

© Будченко А.А., Мазурова И.Ю., Илюхин В.И., Budchenko A.A., Mazurova I.Y., Ilyukhin V.I., 2012

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License.

СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: ПИ № ФС77-75442 от 01.04.2019 г.


Данный сайт использует cookie-файлы

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.

О куки-файлах