ИСПОЛЬЗОВАНИЕ рН-ЧУВСТВИТЕЛЬНЫХ ИММОБИЛИЗОВАННЫХ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ ДЛЯ ОПТИМИЗАЦИИ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО СЭНДВИЧ-МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ HBsAg ВИРУСА ГЕПАТИТА В


Цитировать

Полный текст

Аннотация

Цель. Получение высокочувствительного сэндвич-метода определения поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg) в сыворотке крови. Анализ возможности оптимизации твердой фазы в иммуноферментом сэндвич методе определения HВsAg путем вариации рН сорбции моноклональных антител на поверхность иммунных планшетов. Материалы и методы. Сравнивали калибровочные кривые для определения HВsAg в сэндвич-методах, использующих 36 возможных парных сочетаний моноклональных антител нашей панели (включающей высокоаффинные антитела к HBsAg, продуцируемые шестью гибридомами). Иммобилизацию антител на твердой фазе (путем пассивной сорбции) проводили при различных значениях рН (2,8; 7,5 и 9,5). Результаты. Анализ панели антител из 6 гибридом к HВsAg выявил рН-чувствительные моноклональные антитела (18С8), иммобилизация которых при низких значениях рН (2,8) с детектирующими антителами F4F3 позволила резко увеличить чувствительность сэндвич-метода. Минимальная достоверно определяемая концентрация HBsAg в сыворотках больных, инфицированных вирусом гепатита В, составляла 0,013—0,017 нг/мл. Валидация сэндвич-метода была проведена на сертифицированной панели сывороток с различными концентрациями HBsAg (разных серотипов). Заключение. Сконструирован высокочувствительный сэндвич-метод определения HВsAg. Показано, что анализ панели моноклональных антител на рН-чувствительность может использоваться в качестве простого методического приема для оптимизации иммуноферментных сэндвич-методов определения различных антигенов.

Полный текст

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ рН-ЧУВСТВИТЕЛЬНЫХ ИММОБИЛИЗОВАННЫХ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ ДЛЯ ОПТИМИЗАЦИИ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО СЭНДВИЧ-МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ HBsAg ВИРУСА ГЕПАТИТА В
×

Об авторах

Д. А Яковлева

Научный центр психического здоровья РАМН

А. Д Дмитриев

Институт высшей нервной деятельности и нейрофизиологии, Москва

Д. А Дмитриев

Научный центр психического здоровья РАМН

Г. И Коляскина

Научный центр психического здоровья РАМН

Ю. С Массино

Институт высшей нервной деятельности и нейрофизиологии, Москва

Е. В Павлова

Научный центр психического здоровья РАМН

И. Ю Пыренкова

НПО «Диагностические системы», Нижний Новгоро

М. Б Смирнова

Институт высшей нервной деятельности и нейрофизиологии, Москва

О. Л Сегал

Институт высшей нервной деятельности и нейрофизиологии, Москва

Ю. Н Тараканова

Научный центр психического здоровья РАМН

Т. И Уланова

О. Н Фартушная

Научный центр психического здоровья РАМН

И. Н Шарипова

НПО «Диагностические системы», Нижний Новгоро

Г. И Коляскина

Научный центр психического здоровья РАМН

В. Ф Лавров

НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова, Москва

Список литературы

  1. Block T.M., Guo H., Guo J.T. Molecular virology of hepatitis B virus for clinicans. Clin. Liver. Dis. 2007, 11 (4): 685-706.
  2. Butler J.E. Solid supports in enzyme linked immunosorbent assays and other solid phase immunoassays. Methods Mol. Med. 2004, 94: 333-372.
  3. Butler J.E., Ni L., Joschi K.S. et al. The physical and functional behavior of capture antibodies adsorbed on polysterene. J. Immunol. Meth. 1992, 150 (1—2): 77-90.
  4. Comanor L., Holland P. Hepatitis B virus blood screening: unfinished agendas. Vox Sang. 2006, 91 (1): 1-12.
  5. Dmitriev A.D., Factor M.I., Segal O.L. et al. Western blot analysis of human and rat serotonin transporter in platelets and brain using site-specific antibodies: Evidence that transporter undergoes endoproteolytic cleavage. Clin. Chim. Acta. 2005, 356 (1—2): 76-94.
  6. Klonish T., Panayotou G., Edwards P. et al. Enhancement in antigen binding by a combination of synergy and antibody capture. Immunology. 1996, 89 (2): 165-171.
  7. Nikulina V.A., Kizim E.A., Massino Y.S. et al. Synergistic effects in antigen capturer ELISA using three monoclonal antibodies directed at different epitopes of the same antigen. Clin. Chim. Acta. 2000, 299 (1—2): 25-44.
  8. Valimaa L., Laurikainen K. Comparison of streptavidin-coated microtitration plates. J. Immunol. Meth. 2006, 308 (1—2): 203-215.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© Яковлева Д.А., Дмитриев А.Д., Дмитриев Д.А., Коляскина Г.И., Массино Ю.С., Павлова Е.В., Пыренкова И.Ю., Смирнова М.Б., Сегал О.Л., Тараканова Ю.Н., Уланова Т.И., Фартушная О.Н., Шарипова И.Н., Коляскина Г.И., Лавров В.Ф., 2010

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License.
СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: ПИ № ФС77-75442 от 01.04.2019 г.


Данный сайт использует cookie-файлы

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.

О куки-файлах