ВОЗМОЖНОСТЬ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ РЕКОМБИНАНТНЫХ ДОМЕНОВ ИММУНОГЛОБУЛИНОПОДОБНОГО БЕЛКА LigA В КАЧЕСТВЕ ПЕРСПЕКТИВНЫХ МАРКЕРОВ ДЛЯ ТЕСТИРОВАНИЯ СЫВОРОТОК КРОВИ БОЛЬНЫХ ЛЕПТОСПИРОЗАМИ


Цитировать

Полный текст

Аннотация

Цель. Клонировать в клетки Escherichia coli последовательность ДНК, кодирующую консервативный домен белка LigA Leptospira interrogans, и изучить антигенные свойства полученного химерного белка. Материалы и методы . Использовали штамм E.coli М15 [рREP4], рекомбинантную плазмиду pTT10, кодирующую целлюлозосвязывающий домен (CBD), эндонуклеазы рестрикции BamHI, BglI, BglII, XbaI, T4 ДНК-лигазу, РНКазу. Проводили молекулярное клонирование интересующего фрагмента гена ligA по стандартным протоколам, экспрессию гибридных генов в соответствии с протоколами фирмы «QIAGEN». Выделение и очистку белков проводили по оригинальной методике. Результаты. В клетки E.coli клонирован фрагмент, кодирующий иммуноглобулиноподобный домен 5 LigA. Получен эффективный штамм-продуцент химерного белка D5-CBD, состоящего из иммуноглобулиноподобного домена 5 LigA, глицинсеринового спейсера и целлюлозосвязывающего домена (CBD). Методом одностадийной очистки на целлюлозе получен высокоочищенный препарат белка D5-CBD. Изучена антигенная специфичность полученного химерного белка, показана возможность его использования в качестве маркера для разработки диагностической тест-системы на основе непрямого ИФА (нИФА). Заключение . При синтезе в клетках E.coli в составе химерного белка рекомбинантный домен LigA сохраняет антигенные свойства, присущие нативному белку. Полученные результаты подтверждают возможность использования рекомбинантного антигена D5-CBD в качестве маркера для разработки диагностических тест-систем на основе нИФА.

Полный текст

ВОЗМОЖНОСТЬ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ РЕКОМБИНАНТНЫХ ДОМЕНОВ ИММУНОГЛОБУЛИНОПОДОБНОГО БЕЛКА LigA В КАЧЕСТВЕ ПЕРСПЕКТИВНЫХ МАРКЕРОВ ДЛЯ ТЕСТИРОВАНИЯ СЫВОРОТОК КРОВИ БОЛЬНЫХ ЛЕПТОСПИРОЗАМИ
×

Об авторах

Н. Е Шарапова

НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи, Москва

З. М Галушкина

НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи, Москва

Н. Н Полетаева

НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи, Москва

Н. В Лаврова

НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи, Москва

Л. В Верховская

НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи, Москва

В. Г Лунин

НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи, Москва

Е. М Петров

НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи, Москва

А. П Самсонова

НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи, Москва

Ю. В Ананьина

НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи, Москва

Список литературы

  1. Лящук А.М., Лунин В.Г., Карягина А.С. и др. Иммунизация антигенами, иммобилизированными на целлюлозе. Развитие идей А.Е. Гу рвича. Жу рн. микробиол. 2006, 4: 65-68.
  2. Лунин В.Г., Шарапова Н.Е., Тихонова Т.В. и др. Изучение иммуногенных свойств рекомбинантного целлюлозосвязывающего домена Anaerocellum thermophilum in vivo. Мол. генет. микробиол. вирусол. 2009, 1: 21-27.
  3. Лящук A.M., Лунин В.Г., Карягина А.С. и др. Получение и характеристика рекомбинантного белка TUL4 из Francisella tularensis, потенциального компонента генно-инженерной субъединичной противотуляремийной вакцины. Биотехнология. 2006, 5: 23-32.
  4. Croda J., Ramos J.G., Matsunaga J. Leptospira immunoglobulin-like proteins as a serodiagnostic marker for acute leptospirosis. J. Clin. Microbiol. 2007, 45: 1528–1534.
  5. Guerreiro H., Croda J., Flannery B. et al. Leptospiral proteins recognized during the humoral immune response to leptospirosis in humans. Infect. Immun. 2001, 69: 4958-4968.
  6. Haake D.A., Matsunaga J. Characterization of the leptospiral outer membrane and description of three novel leptospiral membrane proteins. Ibid. 2002, 70: 4936–4945.
  7. Karsten H., Joanne C. The QIAexpressionist. DIAGEN GmbH, QIAGEN Inc., 1992.
  8. Koizumi N., Watanabe H. Leptospiral immunoglobulin-like proteins elicit protective immunity. Vaccine. 2004, 22: 1545-1552.
  9. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 1970, 227: 680-685.
  10. Matsunaga J., Barocchi M.A., Croda J. et al. Pathogenic Leptospira species express surface-exposed proteins belonging to the bacterial immunoglobulin superfamily. Mol. Microbiol. 2003, 49: 929-945.
  11. Palaniappan R.U., Chang Y.F., Jusuf S.S. et al. Cloning and molecular characterization of an immunogenic LigA protein of Leptospira interrogans. Infect. Immun. 2002, 70: 5924-5930.
  12. Palaniappan R.U., McDonough S.P., Divers T.J. et al. Immunoprotection of recombinant leptospiral immunoglobulin-like protein A against leptospira interrogans serovar pomona infection. Ibid. 2006, 74: 1745-1750.
  13. Srimanote P., Wongdeethai N., Jieanampunkul P. et al. Recombinant ligA for leptospirosis diagnosis and ligA among the Leptospira spp. clinical isolates. J. Microbiol. Meth. 2008, 72: 73-81.
  14. Towbin H., Staehelin T., Gordon J. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: Procedure and some applications. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1979, 76: 4350-4354.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© Шарапова Н.Е., Галушкина З.М., Полетаева Н.Н., Лаврова Н.В., Верховская Л.В., Лунин В.Г., Петров Е.М., Самсонова А.П., Ананьина Ю.В., 2010

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License.
СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: ПИ № ФС77-75442 от 01.04.2019 г.


Данный сайт использует cookie-файлы

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.

О куки-файлах