Journal of microbiology, epidemiology and immunobiologyJournal of microbiology, epidemiology and immunobiologyЖурнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии0372-93112686-7613Central Research Institute for Epidemiology53110.36233/0372-9311-2020-97-1-72-82REVIEWSОБЗОРЫReview ArticleImmunological and Epidemiological Aspects of the Immunogenicity of Streptococcus Pneumoniae Serotype 3 Capsular Polysaccharide in Pneumococcal VaccinesИммунологические и эпидемиологические аспекты иммуногенности капсульного полисахарида Streptococcus pneumoniae серотипа 3 в составе пневмококковых вакцинhttps://orcid.org/0000-0002-8434-231XZaitsevA. E.ЗайцевА. Е.
Russian Federation

Аnton Е. Zaitsev — junior researcher

Moscow 105064

Зайцев Антон Евгеньевич — младший научный сотрудник

105064, Москва

anton.zajtseff2015@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0002-0282-4471KurbatovaE. A.КурбатоваЕ. А.
Russian Federation

Ekaterina A. Kurbatova — Doct. Sci. (Med.), Prof., Head, Laboratory of therapeutic vaccines, Department of immunology

Moscow 105064

Курбатова Екатерина Алексеевна — доктор медицинских наук, профессор, заведующий лабораторией терапевтических вакцин Отдела иммунологии

105064, Москва

kurbatova6162@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0002-4474-7531EgorovaN. B.ЕгороваН. Б.
Russian Federation

Nadezhda B. Egorova — Doct. Sci. (Med.), Prof., leading researcher, Laboratory of therapeutic vaccines, Department of immunology

Moscow 105064

Егорова Надежда Борисовна — доктор медицинских наук, профессор, ведущий научный  сотрудник лаборатории терапевтических вакцин Отдела иммунологии

105064, Москва

vmegorova@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0001-7589-3876SukhovaE. V.СуховаЕ. В.
Russian Federation

Elena V. Sukhova — senior researcher

119991, Moscow

Сухова Елена Викторовна — кандидат химических наук, старший научный сотрудник

119991, Москва

glycoperl@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0002-0727-4050NifantievN. E.НифантьевН. Э.
Russian Federation

Nikolay E. Nifantiev — Doct. Sci. (Chem.), Prof., Corr. Member of the Russian Academy of Sciences, Head, Glycoconjugate chemistry laboratory

119991, Moscow

Нифантьев Николай Эдуардович — доктор химических наук, профессор, член-корреспондент РАН, заведующий лабораторией химии гликоконъюгатов

119991, Москва

nen@ioc.ac.ruMechnikov Research Institute for Vaccines and SeraФГБНУ «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток имени И.И. Мечникова»N.D. Zelinsky Institute of Organic ChemistryФГБУН «Институт органической химии имени Н.Д. Зелинского» РАН0204202097172820603202006032020Copyright ©; 2020, Zaitsev A.E., Kurbatova E.A., Egorova N.B., Sukhova E.V., Nifantiev N.E.Copyright ©; 2020, Зайцев А.Е., Курбатова Е.А., Егорова Н.Б., Сухова Е.В., Нифантьев Н.Э.2020Zaitsev A.E., Kurbatova E.A., Egorova N.B., Sukhova E.V., Nifantiev N.E.Зайцев А.Е., Курбатова Е.А., Егорова Н.Б., Сухова Е.В., Нифантьев Н.Э.https://creativecommons.org/licenses/by/4.0https://microbiol.crie.ru/jour/article/view/531

The introduction of pneumococcal vaccines into national immunization programmes around the world has reduced the incidence of pneumococcal vaccine serotypes, but had no influence on the incidence of Streptococcus pneumoniae serotype 3 included in their composition. The results of evaluation of epidemiological efficacy and immunogenicity of capsular polysaccharide of S. pneumoniae serotype 3 capsular polysaccharide (CP) in conjugated and polysaccharide pneumococcal vaccines are contradictory. Some studies have shown the effectiveness of vaccination, other studies indicate insufficient immunogenicity and prophylactic efficacy of S. pneumoniae serotype 3 CP. The authors’ analysis of the results of clinical studies showed that the prophylactic efficacy of S. pneumoniae serotype 3 CP depends on the type of vaccine, nosological form of the disease, age, immunization schedule. According to the literature data, the most informative parameter of the protective activity of S. pneumoniae CP in pneumococcal vaccines, including serotype 3, is opsonophagocytosis. The experimental data of the low immunogenicity of serotype 3 CP, presumably associated with an unusual way of synthesis of its CP, are considered. To increase the im muno genicity of S. pneumoniae serotype 3 CP, the use of synthetic oligosaccharides of a strictly defined chemical structure corresponding to the protective fragments of serotype 3 CP and conjugated with a carrier protein for induction of T-dependent immune response and immunological memory is promising.

Включение в национальные программы иммунизации многих стран мира пневмококковых вакцин привело к снижению уровня заболеваний, вызываемых вакцинными серотипами пневмококка, однако не оказало влияния на частоту распространения Streptococcus pneumoniae серотипа 3, входящего в их состав. Результаты испытаний по оценке эпидемиологической эффективности и иммуногенности капсульного полисахарида (КП) S. pneumoniae серотипа 3 в составе конъюгированных и полисахаридных пневмококковых вакцин противоречивы. В одних исследованиях показана эффективность вакцинации, другие исследования свидетельствуют о недостаточной иммуногенности и профилактической эффективности КП S. pneumoniae серотипа 3. Проведенный авторами анализ результатов клинических исследований показал, что профилактическая эффективность КП S. pneumoniae серотипа 3 зависит от типа вакцины, нозологической формы заболевания, возраста, схемы иммунизации. В соответствии с данными литературы наиболее информативным показателем протективной активности КП S. pneumoniae в составе пневмококковых вакцин, в том числе серотипа 3, является опсонофагоцитоз. Рассмотрены экспериментальные данные, обосновывающие низкую иммуногенность КП серотипа 3, предположительно связанную с необычным путем синтеза его КП. Для повышения иммуногенности КП S. pneumoniae серотипа 3 перспективным является использование синтетических олигосахаридов строго определенного химического строения, соответствующих протективным фрагментам КП серотипа 3 и конъюгированных с белком-носителем для индукции Т-зависимого иммунного ответа и иммунологической памяти.

Streptococcus pneumoniae serotype 3capsular pneumococcal polysaccharideconjugated pneumococcal vaccinepolysaccharide pneumococcal vaccineepidemiological efficacy of pneumococcal vaccines opsonophagocytosispost-vaccination pneumococcal antibodiesStreptococcus pneumoniae серотипа 3капсульный полисахарид пневмококкаконъюгированная пневмококковая вакцинаполисахаридная пневмококковая вакцинаэпидемиологическая эффективность пневмококковых вакцинопсонофагоцитозпоствакцинальные пневмококковые антителаThis work was supported by a grant from the Russian Science Foundation 19-73-30017Работа выполнена при поддержке гранта РНФ 19-73-30017Henrichsen J. Six newly recognized types of Streptococcus pneumoniae. J. Clin. Microbiol. 1995; 33(10): 2759-62.Lund E., Henrichsen J. Phenotypic сharacterization and serotypes identification of CSF isolates in acute bacterial meningitis. Methods Microbiol. 1978; (12): 241-62.Calix J.J., Nahm M.H. A new pneumococcal serotype, 11E, has a variably inactivated wcjE gene. J. Infect. Dis. 2010; 202(1): 29-38. DOI: http://doi.org/10.1086/653123Weinberger D.M., Harboe Z.B., Sanders E.A., Ndiritu M., Klugman K.P., Rückinger S., et al. Association of serotype with risk of death due to pneumococcal pneumonia: a meta-analysis. Clin. Infect. Dis. 2010; 51(6): 692-9. DOI: http://doi.org/10.1086/655828Grabenstein J.D., Musey L.K. Differences in serious clinical out comes of infection caused by specific pneumococcal serotypes among adults. Vaccine. 2014; 32(21): 2399-405. DOI: http://doi.org/10.1016/j.vaccine.2014.02.096Martens P., Worm S.W., Lundgren B., Konradsen H.B., Benfield T. Serotype-specific mortality from invasive Streptoc occus pneumoniae disease revisited. BMC Infect. Dis. 2004; (4): 21. DOI: http://doi.org/10.1186/1471-2334-4-21Gransden W.R., Eykyn S.J., Phillips I. Pneumococcal bacteraemia: 325 episodes diagnosed at St Thomas’s Hospital. Br. Med. J. (Clin. Res. Ed). 1985; 290(6467): 505-8. DOI: http://doi.org/10.1136/bmj.290.6467.505Harboe Z.B., Thomsen R.W., Riis A., Valentiner-Branth P., Christensen J.J., Lambertsen L., et al. Pneumococcal serotypes and mortality following invasive pneumococcal disease: a population-based cohort study. PLoS Med. 2009; 6(5): e1000081. DOI: http://doi.org/10.1371/journal.pmed.1000081Inverarity D., Lamb K., Diggle M., Robertson C., Greenhalgh D., Mitchell T.J., et al. Death or survival from invas ive pneumococcal disease in Scotland: associations with serogroups and multilocus sequence types. J. Med. Microbiol. 2011; 60(Pt. 6): 793-02. DOI: http://doi.org/10.1099/jmm.0.028803-0Bender J.M., Ampofo K., Korgenski K., Daly J., Pavia A.T., Mason E.O., et al. Pneumococcal necrotizing pneumonia in Utah: does serotype matter? Clin. Infect. Dis. 2008; 46(9): 1346-52. DOI: http://doi.org/10.1086/586747Byington C.L., Korgenski K., Daly J., Ampofo K., Pavia A., Mason E.O. Impact of the pneumococcal conjugate vaccine on pneumococcal parapneumonic empyema. Pediatr. Infect. Dis. J. 2006; 25(3): 250-4. DOI: http://doi.org/10.1097/01.inf.0000202137.37642.abOstergaard C., Brandt C., Konradsen H.B., Samuelsson S. Differences in survival, brain damage, and cerebrospinal fluid cytokine kinetics due to meningitis caused by 3 different Streptococcus pneumoniae serotypes: evaluation in humans and in 2 experimental models. J. Infect. Dis. 2004; 190(7): 1212-20. DOI: http://doi.org/10.1086/423852Colman G., Hallas G. Systemic disease caused by pneumococci. J. Infect. 198; 7(3): 248-55. DOI: http://doi.org/10.1016/s0163-4453(83)97169-4Namkoong H., Ishii M., Funatsu Y., Kimizuka Y., Yagi K., Asami T., et al. Theory and strategy for pneumococcal vaccines in the elderly. Hum. Vaccin. Immunother. 2016; 12(2): 336-43. DOI: http://doi.org/10.1080/21645515.2015.1075678Morimoto K., Suzuki M., Ishifuji T., Yaegashi M., Asoh N., Hamashige N., et al. The burden and etiology of communityonset pneumonia in the aging Japanese population: a multicenter prospective study. PLoS One. 2015; 10(3): e0122247. DOI: http://doi.org/10.1371/journal.pone.0122247Inostroza J., Vinet A.M., Retamal G., Lorca P., Ossa G., Facklam R.R., et al. Influence of patient age on Streptococcus pneumoniae serotypes causing invasive disease. Clin. Diagn. Lab. Immunol. 2001; 8(3): 556-9. DOI: http://doi.org/10.1128/CDLI.8.3.556-559.2001Scott J.A., Hall A.J., Dagan R., Dixon J.M., Eykyn S.J., Fenoll A., et al. Serogroupspecific epidem iol ogy of Streptococcus pneumoniae: associations with age, sex, and geography in 7,000 episodes of invasive disease. Clin. Infect. Dis. 1996; 22(6): 97381. DOI: http://doi.org/10.1093/clinids/22.6.973Choi E.H., Zhang F., Lu Y.J., Malley R. Capsular polysaccharide (CPS) release by serotype 3 pneumococcal strains reduces the protective effect of anti-type 3 CPS antibodies. Clin. Vaccine. Immunol. 2016; 23(2): 162-7. DOI: http://doi.org/10.1128/CVI.00591-15Hammerschmidt S., Wolff S., Hocke A., Rosseau S., Müller E., Rohde M. Illustration of pneumococcal polysaccharide capsule during adherence and invasion of epithelial cells. Infect. Immun. 2005; 73(8): 4653-67. DOI: http://doi.org/10.1128/IAI.73.8.4653-4667.2005. Morona J.K., Morona R., Paton J.C. Attachment of capsular polysaccharide to the cell wall of Streptoc occus pneumoniae type 2 is required for invasive disease. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2006; 103(22): 8505-10. DOI: http://doi.org/10.1073/pnas.0602148103Sugimoto N., Yamagishi Y., Hirai J., Sakanashi D., Suematsu H., Nishiyama N., et al. Invasive pneumococcal disease caused by mucoid serotype 3 Streptococcus pneumoniae: a case report and literature review. BMC. Res. Notes. 2017; 10(1): 21. DOI: http://doi.org/10.1186/s13104-016-2353-3Kawasaki S., Aoki N. A case of severe community-acquired pneumonia caused by mucoid type Streptococcus pneumoniae. Ann. Jpn Resp. Soc. 2015; 4: 303-8.Athlin S., Kaltoft M., Slotved H.C., Herrmann B., Holmberg H., Konradsen H.B., et al. Association between serotype-specific antibody response and serotype characteristics in patients with pneumococcal pneumonia, with special reference to degree of encapsulation and invasive potential. Clin. Vaccine Immunol. 2014; 21(11): 1541-9. DOI: http://doi.org/10.1128/CVI.00259-14Littorin N., Uddén F., Ahl J., Resman F., Slotved H.C., Athlin S., et al. Serotypes with low invasive potent ial are associated with an impaired antibody response in invasive pneumococcal disease. Front. Microbiol. 2018; 9: 2746. DOI: http://doi.org/10.3389/fmicb.2018.02746Akata K., Chang B., Yatera K., Kawanami T., Yamasaki K., Naito K., et al. Distribution and annual changes in Strept ococ cus pneumoniae serotypes in adult Japanese patients with pneumonia. J. Infect. Chemother. 2015; 21(10): 723-8. DOI: http://doi.org/10.1016/j.jiac.2015.07.002Chiba N. Current status of invasive pneumococcal diseases and the preventive pneumococcal vaccines in Japan. Jpn J. Chem other. 2011; 59: 561-72.Lee S., Lee K., Kang Y., Bae S. Prevalence of serotype and multidrug-resistance of S. pneumoniae respiratory tract isolates in 265 adults and 36 children in Korea, 2002-2005. Microb. Drug Resist. 2010; 16(2): 135-42. DOI: http://doi.org/10.1089/mdr.2009.0114España P.P., Uranga A., Ruiz L.A., Quintana J.M., Bilbao A., Aramburu A., et al. Evolution of serotypes in bacteremic pneumococcal adult pneumonia in the period 2001–2014, after introduction of the pneumococcal conjugate vaccine in Bizkaia (Spain). Vaccine. 2019; 37(29): 3840-8. DOI: http://doi.org/10.1016/j.vaccine.2019.05.052Козлов Р.С., Чагарян А.Н., Козлова Л.В., Муравьев А.А. Серологическая характеристика и чувствительность к антибиотикам пневмококков, выделенных у детей в возрасте до 5 лет в отдельных регионах Российской Федерации. Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. 2011; 13(2): 177-87.Таточенко В.К., Катосова Л.К., Уланова М.А., Батуро А.П., Федоров А.М., Падюков Л.Н. и др. Периодические и географические различия серотипового спектра пневмококков у детей с респираторными заболеваниями и здоровых носителей. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1994; 71(3): 3-10.Белошицкий Г.В., Королева И.С. Серотиповая характеристика штаммов S. pneumoniae в Москве. Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2014; (1): 90-7.Douglas R.M., Paton J.C., Duncan S.J., Hansman D.J. Antibody response to pneumococcal vaccination in children younger than five years of age. J. Infect. Dis. 1983; 148(1): 131-7. DOI: http://doi.org/10.1093/infdis/148.1.131Thompson A., Lamberth E., Severs J., Scully I., Tarabar S., Ginis J., et al. Phase 1 trial of a 20-valent pneumococcal conjugate vaccine in healthy adults. Vaccine. 2019; 37(42): 6201-7. DOI: http://doi.org/10.1016/j.vaccine.2019.08.048Laughlin J.M., Jiang Q., Gessner B.D., Swerdlow D.L., Sings H.L., Isturiz R.E., et al. Pneumococcal conjugate vaccine against serotype 3 pneumococcal pneumonia in adults: A systematic review and pooled analysis. Vaccine. 2019; 37(43): 6310-6. DOI: http://doi.org/10.1016/j.vaccine.2019.08.059Lodi L., Ricci S., Nieddu F., Moriondo M., Lippi F., Canessa C., et al. Impact of the 13-valent pneumococcal conjugate vaccine on severe invasive disease caused by serotype 3 Streptococcus pneumo niae in Italian children. Vaccines (Basel). 2019; 7(4): E128. DOI: http://doi.org/10.3390/vaccines7040128Nurkka A., Joensuu J., Henckaerts I., Peeters P., Poolman J., Kilpi T., et al. Immunogenicity and safety of the eleven valent pneumococcal polysaccharide-protein D conjugate vaccine in infants. Pediatr. Infect. Dis. J. 2004; 23(11): 1008-14. DOI: http://doi.org/10.1097/01.inf.0000143640.03214.18Prymula R., Peeters P., Chrobok V., Kriz P., Novakova E., Kaliskova E., et al. Pneumococcal capsular polysaccharides conjugated to protein D provide protection against otitis media caused by both Streptococcus pneumonia and non-typable Haemophilus influenzae: a randomized double-blind efficacy study. Lancet. 2006; 367(9512): 740-8. DOI: http://doi.org/10.1016/S0140-6736(06)68304-9Schuerman L., Prymula R., Chrobok V., Dieussaert I., Poolman J. Kinetics of the immune response following pneumococcal PD conjugate vaccination. Vaccine. 2007; 25(11): 1953-61. DOI: http://doi.org/10.1016/j.vaccine.2006.12.007Schuerman L., Prymula R., Henckaerts I. ELISA IgG concentrations and opsonophagocytic activity following pneumococcal protein D conjugate vaccination and relationship to efficacy against acute otitis media. Vaccine. 2006; 25(11): 1962-8. DOI: http://doi.org/10.1016/j.vaccine.2006.12.008Andrews N.J., Waight P.A., Burbidge P., Pearce E., Roalfe L., Zancolli M., et al. Serotype-specific effectiveness and correlates of protection for the 13-valent pneumococcal conjugate vaccine: a postlicensure indirect cohort study. Lancet Infect. Dis. 2014; 14(9): 839-46. DOI: http://doi.org/10.1016/S1473-3099(14)70822-9Shiramoto M., Hanada R., Juergens C., Shoji Y., Yoshida M., Ballan B., et al. Immunogenicity and safety of the 13-valent pneumococcal conjugate vaccine compared to the 23-valent pneumococcal polysaccharide vaccine in elderly Japanese adults. Hum. Vaccin Immunother. 2015; 11(9): 2198-206. DOI: http://doi.org/10.1080/21645515.2015.1030550Simonsen V., Brandão A.P., Brandileone M.C., Yara T.I., Di Fabio J.L., Lopes M.H., et al. Immunogenicity of a 23-valent pneu mococcal polysaccharide vaccine in Brazilian elderly. Braz. J. Med. Biol. Res. 2005; 38(2): 251-60. DOI: http://doi.org/10.1590/s0100-879x2005000200014Cartee R.T., Forsee W.T., Schutzbach J.S., Yother J. Mechanism of type 3 capsular polysaccharide synthesis in Streptococcus pneumoniae. J. Biol. Chem. 2000; 275(6): 3907-14. DOI: http://doi.org/10.1074/jbc.275.6.3907Cartee R.T., Forsee W.T., Yother J. Initiation and synthesis of the Streptococcus pneumoniae type 3 capsule on a phosp ha ti dylglycerol membrane anchor. J. Bacteriol. 2005; 187(13): 4470-9. DOI: http://doi.org/10.1128/JB.187.13.4470-4479.2005Guidolin A., Morona J.K., Morona R., Hansman D., Paton J.C. Nucleotide sequence analysis of genes essential for capsular polysaccharide biosynthesis in Streptococcus pneumoniae type 19F. Infect. Immun. 1994; 62(12): 5384-96.Kolkman M.A., Wakarchuk W., Nuijten P.J., van der Zeijst B.A. Capsular polysaccharide synthesis in streptococcus pneumoniae serotype 14: molecular analysis of the complete cps locus and identification of genes encoding glycosyltransferases required for the biosynthesis of the tetrasaccharide subunit. Mol. Microbiol. 1997; 26(1): 197-208. DOI: http://doi.org/10.1046/j.1365-2958.1997.5791940.xDillard J.P., Vandersea M.W., Yother J. Characterization of the cassette containing genes for type 3 capsular polysaccharide biosynthesis in Streptococcus pneumoniae. J. Exp. Med. 1995; 181(3): 973-83. DOI: http://doi.org/10.1084/jem.181.3.973Arrecubieta C., López R., García E. Type 3-specific synthase of Streptococcus pneumoniae (Cap3B) directs type 3 polysaccharide biosynthesis in Escherichia coli and in pneumococcal strains of different serotypes. J. Exp. Med. 1996; 184(2): 449-55. DOI: http://doi.org/10.1084/jem.184.2.449Moore M.R., Link-Gelles R., Schaffner W., Lynfield R., Lexau C., Bennett N.M., et al. Effect of use of 13-valent pneumococcal conjugate vaccine in children on invasive pneumococcal disease in children and adults in the USA: analysis of multisite, population-based surveillance. Lancet Infect. Dis. 2015; 15(3): 301-9. DOI: http://doi.org/10.1016/S1473-3099(14)71081-3Tian Н., Weber S., Thorkildson P., Kozel T.R., Pirofski L.A. Efficacy of opsonic and nonopsonic serotype 3 pneumococcal capsular polysaccharide-specific monoclonal antibodies against intranasal challenge with Streptococcus pneumoniae in mice. Infect. Immun. 2009; 77(4): 1502-13. DOI: http://doi.org/10.1128/IAI.01075-08Курбатова Е.А., Воробьев Д.С., Егорова Н.Б., Батуро А.П., Романенко Э.Е., Маркова М.Е. и др. Штаммовые различия внутривидовой иммуногенной активности антигенных компонентов Streptococcus pneumoniae. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2013; (5): 60-9.Генинг М.Л., Курбатова Е.А., Цветков Ю.Е., Нифантьев Н.Э. Разработка подходов к созданию углеводной конъюгированной вакцины третьего поколения против Streptococcus pneumoniae: поиск оптимальных олигосахаридных лигандов. Успехи химии. 2015; 84(11): 1100-13. DOI: http://doi.org/10.1070/RCR4574Akhmatova N.K., Kurbatova E.A., Akhmatov E.A., Egorova N.B., Logunov D.Y., Gening M.L., et al. The effect of a BSA conjugate of a synthetic hexasaccharide related to the fragment of capsular polysaccharide of Streptococcus pneumoniae type 14 on the activation of innate and adaptive immune responses. Front. Immunol. 2016; (7): 248. DOI: http://doi.org/10.3389/fimmu.2016.00248Kurbatova E.A., Akhmatova N.K., Akhmatova E.A., Egorova N.B., Yastrebova N.E., Sukhova E.V., et al. Neoglycoconjugate of tetrasaccharide representing one repeating unit of the Streptococcus pneumoniae type 14 capsular polysaccharide induces the production of opsonizing IgG1 antibodies and possesses the highest protective activity as compared to hexaand octasaccharide conjugates. Front. Immunol. 2017; (8): 1-13. DOI: http://doi.org/10.3389/fimmu.2017.00659Parameswarappa S.G., Reppe K., Geissner A., Ménová P., Govindan S., Calow A., et al. A Semi-synthetic Oligosaccharide Conjugate Vaccine Candidate Confers Protection against Streptococcus pneumoniae Serotype 3 Infection. Cell. Chem. Biol. 2016; 23(11): 1407-16. DOI: http://doi.org/10.1016/j.chembiol.2016.09.016Kaplonek P., Khan N., Reppe K., Schumann B., Emmadi M., Lisboa M.P., et al. Improving vaccines against Streptococcus pneumoniae using synthetic glycans. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2018; 115(52): 13353-8. DOI: http://doi.org/10.1073/pnas.1811862115